纳米银:合成、抗感染与免疫 被引量：5

1

作者 郭大伟 龚佳豪 +1 位作者 粟硕 顾宁 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期829-838,共10页

纳米银以其抗感染、调节免疫、抗炎等广泛的生物学活性而成为最具应用潜力的纳米材料之一。本文从合成方法、抗病原微生物感染、免疫调节活性方面重点综述了纳米银近年来的研究进展,分析了纳米银在兽医领域中的应用和潜在毒性,最后提出... 纳米银以其抗感染、调节免疫、抗炎等广泛的生物学活性而成为最具应用潜力的纳米材料之一。本文从合成方法、抗病原微生物感染、免疫调节活性方面重点综述了纳米银近年来的研究进展,分析了纳米银在兽医领域中的应用和潜在毒性,最后提出了纳米银目前面临的挑战及未来的发展方向。 展开更多

关键词 纳米银 合成 抗感染 免疫调节 兽医应用

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Red/ET同源重组技术在载体构建中的应用 被引量：1

2

作者 郭善军 张晓林 +1 位作者 陈章宝 曾吉 《科教导刊（电子版）》 2017年第1期168-169,共2页

Red/ET同源重组技术是以原有的重组技术为基础，利用Rac噬菌体ET系统或者噬菌体的Red系统进行外源基因重组的重组方法。该方法使同源重组过程变得更方便快捷。本文对Red/ET同源重组技术的原理，改进和载体构建方面的应用做了综述。

关键词 Red/ET 同源重组 噬菌体 载体构建

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Bcl-2反义寡核苷酸与Rituximab联合对Raji细胞增殖和凋亡的影响

3

作者 申咏梅 杨晓春 +2 位作者 石怡珍 谢小芳 唐军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期727-730,共4页

目的：研究bcl-2硫代反义寡核苷酸（bcl-2 ASODN）联合Rituximab[CD20单克隆抗体（mAb）]对B细胞淋巴瘤Raji细胞株体内外增殖和凋亡的影响, 并探讨其作用机制.方法：bcl-2 ASODN和Rituximab分别和联合作用B细胞淋巴瘤Raji细胞后, 通过MT... 目的：研究bcl-2硫代反义寡核苷酸（bcl-2 ASODN）联合Rituximab[CD20单克隆抗体（mAb）]对B细胞淋巴瘤Raji细胞株体内外增殖和凋亡的影响, 并探讨其作用机制.方法：bcl-2 ASODN和Rituximab分别和联合作用B细胞淋巴瘤Raji细胞后, 通过MTT法检测细胞生长情况;流式细胞术（FCM）检测bcl-2蛋白表达和细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2 mRNA表达水平;用Raji细胞建立裸鼠B细胞淋巴瘤模型观察bcl-2 ASODN与Rituximab联合在体内的抗肿瘤效果. 结果：5～30 μmol/L bcl-2 和1 ～16 mg/L Rituximab单独应用均能抑制Raji细胞生长、诱导细胞凋亡、使bcl-2蛋白和bcl-2 mRNA表达降低, 但两者联合应用较单独应用抑制作用更为明显（P＜0.01）.体内实验表明, bcl-2 ASODN与Rituximab联合应用较单独可有效抑制BALB/c裸鼠B细胞淋巴瘤的生长（P＜0.01）.结论：bcl-2 ASODN联合Rituximab较分别单独应用可明显抑制B细胞淋巴瘤Raji细胞生长, 促进细胞凋亡;其机制可能是通过联合下调bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA表达而起作用. 展开更多

关键词 BCL-2 反义寡核苷酸 RITUXIMAB Raji

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鱼类传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白的截短表达及免疫原性检测 被引量：6

4

作者 赵景壮 徐黎明 +4 位作者 刘淼 曹永生 尹家胜 刘红柏 卢彤岩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1238-1242,共5页

目的研究鱼类传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)糖蛋白不同区域对免疫原性的影响。方法本研究通过DNAStar 6.0软件分析糖蛋白跨膜区、疏水性及抗原性后,对其进行截短表达;纯化后的糖蛋白制备兔抗血清,ELISA检测兔抗血清的效价,用间接免疫... 目的研究鱼类传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)糖蛋白不同区域对免疫原性的影响。方法本研究通过DNAStar 6.0软件分析糖蛋白跨膜区、疏水性及抗原性后,对其进行截短表达;纯化后的糖蛋白制备兔抗血清,ELISA检测兔抗血清的效价,用间接免疫荧光技术检测纯化后蛋白的免疫原性。结果 SDS-PAGE结果显示,截短糖蛋白相对分子质量(Mr)为40 000,纯化后的糖蛋白经高效液相色谱检测纯度达到90%。利用纯化后的蛋白制备兔抗血清,ELISA结果显示,所制备的兔抗血清与糖蛋白的反应效价为1∶80 000,与IHNV-Sn株细胞培养物的反应效价为1∶20 000;间接免疫荧光结果显示,兔抗血清与IHNV-Sn分离株及参考毒株均能发生特异性的反应。结论实验所表达的糖蛋白与天然的病毒表面糖蛋白具有几乎相同的免疫原性。 展开更多

关键词 传染性造血器官坏死病毒 蛋白表达 糖蛋白 免疫原性

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硫酸氨基葡萄糖对正常小鼠免疫功能的影响 被引量：6

5

作者 陈冠敏 陈润 +2 位作者 张荣标 林秀芬 孙丽 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期227-229,共3页

目的了解硫酸氨基葡萄糖对正常小鼠免疫功能的影响。方法将ICR雌性小鼠按体重随机分成低、中、高(150、300、900mg/kg bw)3个剂量组和对照组。连续灌胃30天后,进行脾指数、胸腺指数、细胞免疫、体液免疫、NK细胞、单核-巨噬细胞及NK细... 目的了解硫酸氨基葡萄糖对正常小鼠免疫功能的影响。方法将ICR雌性小鼠按体重随机分成低、中、高(150、300、900mg/kg bw)3个剂量组和对照组。连续灌胃30天后,进行脾指数、胸腺指数、细胞免疫、体液免疫、NK细胞、单核-巨噬细胞及NK细胞活性的测定。结果高剂量组小鼠的胸腺指数显著高于对照组(P<0.05);中、高剂量组小鼠迟发型超敏反应(DTH)应激能力、血清溶血素水平及抗体生成能力明显高于对照组(P<0.05);高剂量组小鼠的NK细胞的活性显著高于对照组(P<0.05);硫酸氨基葡萄糖对小鼠脾淋巴细胞的增殖转化能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率、碳廓清吞噬指数均无影响。结论硫酸氨基葡萄糖从细胞免疫功能、体液免疫功能及NK细胞活性方面能增强正常小鼠的免疫功能。 展开更多

关键词 硫酸氨基葡萄糖 细胞免疫 体液免疫 NK细胞活性

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新生大鼠下丘脑GnRH免疫反应性神经元的体外发育 被引量：3

6

作者 宋天保 姚向民 +2 位作者 李明众 周劲松 张芳婷 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1997年第2期49-53,共5页

应用神经细胞培养、免疫细胞化学、图像分析等技术，研究了新生大鼠下丘脑促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）神经元的体外发育规律。培养１ｄ即可见ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元；１～３ｄ，ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元生长最快，胞体和突起的平均生长... 应用神经细胞培养、免疫细胞化学、图像分析等技术，研究了新生大鼠下丘脑促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）神经元的体外发育规律。培养１ｄ即可见ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元；１～３ｄ，ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元生长最快，胞体和突起的平均生长速度分别为４５．５９μｍ２／ｄ和１９．３９μｍ／ｄ，染色加深；培养７ｄ，ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元的胞体截面积、胞体染色强度和突起长度均达最高峰，分别为１７１．２１±４３．１７μｍ２，０．２８９±０．０３４，８７．０１±２２．３３μｍ；培养１４ｄ，ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元的胞体大小和突起长度维持在７ｄ时的水平，但染色减弱。结果提示，培养第１周是ＧｎＲＨ神经元体外发育成熟的关键时期。 展开更多

关键词 促性腺释放激素神经元 下丘脑 体外发育 细胞培养 免疫细胞化学 图像分析 新生大鼠

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宿主模式识别受体介导的病毒免疫逃逸机制研究进展 被引量：5

7

作者 李倩 李向茸 冯若飞 《生命科学》 CSCD 北大核心 2019年第9期865-870,共6页

随着病毒和机体斗争的不断发展,病毒逐步进化出各种免疫逃逸机制来躲避宿主的免疫应答,以实现增殖的目的。该文归纳总结了病毒通过宿主的Toll样受体、RIG-I样受体、DNA识别受体及NOD样受体等主要模式识别受体进行逃逸的机制,并且为深入... 随着病毒和机体斗争的不断发展,病毒逐步进化出各种免疫逃逸机制来躲避宿主的免疫应答,以实现增殖的目的。该文归纳总结了病毒通过宿主的Toll样受体、RIG-I样受体、DNA识别受体及NOD样受体等主要模式识别受体进行逃逸的机制,并且为深入探究病毒致病机制奠定基础,也为病毒疫苗和抗病毒药物的研发提供了新思路。 展开更多

关键词 免疫逃逸机制 TOLL样受体 RIG-I样受体 天然免疫

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沙门菌鞭毛蛋白增强新城疫病毒融合蛋白在小鼠中的免疫原性 被引量：3

8

作者 潘志明 文科 +3 位作者 游猛 耿士忠 方强 焦新安 《生物技术通讯》 CAS 2009年第6期827-829,共3页

目的:分析沙门菌鞭毛蛋白对新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F蛋白)免疫原性的增强作用。方法:提取鼠伤寒沙门菌SL7207株鞭毛蛋白,将鞭毛蛋白与F蛋白以皮下注射的方式联合免疫C3H/HeJ小鼠,间隔2周免疫,共免疫3次。分别在第2次免疫后2周和第3次... 目的:分析沙门菌鞭毛蛋白对新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F蛋白)免疫原性的增强作用。方法:提取鼠伤寒沙门菌SL7207株鞭毛蛋白,将鞭毛蛋白与F蛋白以皮下注射的方式联合免疫C3H/HeJ小鼠,间隔2周免疫,共免疫3次。分别在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血清,应用ELISA法测定小鼠血清抗体;在第3次免疫后2周取免疫小鼠脾脏细胞,检测IFN-γ和IL-4特异性分泌细胞。结果:鞭毛蛋白与F蛋白联合免疫能诱导产生特异性的免疫应答,血清抗体水平显著高于F蛋白单独免疫组;在脾脏细胞中,检测到较高水平的IFN-γ和IL-4分泌细胞,免疫应答以Th1型为主。结论:鞭毛蛋白与F蛋白的联合免疫,可显著增强F蛋白的免疫原性,显示出鞭毛蛋白良好的免疫佐剂效应。 展开更多

关键词 鞭毛蛋白 融合蛋白 联合 免疫原性 增强

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IgG和IgE介导的免疫反应在旋毛虫病免疫机理中的作用 被引量：5

9

作者 闫玉文 李鹏 +2 位作者 邢杰 马平 王增田 《武警医学院学报》 CAS 2007年第4期348-351,共4页

【目的】探讨IgG和IgE依赖中性粒细胞（Neu）和单核细胞（Mon）介导的细胞毒效应杀伤旋毛虫肌幼虫的免疫机理。【方法】以雄性Wistar大鼠为旋毛虫病实验动物模型,在动态检测不同感染时相大鼠血清中IgE、IgG的基础上,应用体外培养法观察... 【目的】探讨IgG和IgE依赖中性粒细胞（Neu）和单核细胞（Mon）介导的细胞毒效应杀伤旋毛虫肌幼虫的免疫机理。【方法】以雄性Wistar大鼠为旋毛虫病实验动物模型,在动态检测不同感染时相大鼠血清中IgE、IgG的基础上,应用体外培养法观察经不同温度和时间处理的免疫血清对大鼠血液中Neu和Mon杀伤旋毛虫肌幼虫作用的影响。【结果】大鼠在感染旋毛虫后2～3周,血清中的总IgE和特异性IgE达最高值;总IgG和特异性IgG在5周达高峰。体外培养48 h后,Neus和Mons对旋毛虫肌幼虫的杀伤率分别为42.1%和23.2%。【结论】大鼠感染旋毛虫后,其血清中总IgE与特异性IgE及总IgG与特异性IgG同步增加。当免疫血清存在时,感染鼠和非感染鼠的Neu和Mon均具有杀伤旋毛虫肌幼虫的作用,但感染鼠的作用更强。Neu和Mon在发挥杀伤旋毛虫肌幼虫的作用时,主要依赖的是IgG。 展开更多

关键词 IGG IgE NEU Mon ADCC效应 旋毛虫病

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人白介素6受体结合功能域的构效关系研究 被引量：1

10

作者 冯健男 任蕴芳 +1 位作者 李松 沈倍奋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第1期53-57,共5页

以分子对接(docking)方法研究人白介素6受体胞外区配基结合功能域“WSXWS”区氨基酸残基定点突变对受体与配基人白介素6结合时的相互作用能量、分子间相互作用的影响,从分子力学、分子动态学分析了人白介素6受体胞外区功能域关键氨基酸... 以分子对接(docking)方法研究人白介素6受体胞外区配基结合功能域“WSXWS”区氨基酸残基定点突变对受体与配基人白介素6结合时的相互作用能量、分子间相互作用的影响,从分子力学、分子动态学分析了人白介素6受体胞外区功能域关键氨基酸残基在受体与配基结合中的构象变化以及与人白介素6间的相互作用. 展开更多

关键词 人白介素6 受体 分子对接 WSXWS 构效关系

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人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库的建立 被引量：1

11

作者 包国强 马庆久 +2 位作者 邢金良 杨向民 陈志南 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期433-435,共3页

目的　建立人 鼠杂合Fab噬菌体抗体库 ,经过扩增和筛选 ,得到目的抗体。方法　自肝癌患者外周血单个核细胞中扩增全套人抗体Fd片段基因 ,分别克隆入含嵌合轻链的展示载体pComb3和pComb3X中 ,建立人 鼠杂合Fab噬菌体抗体库。然后利用肝... 目的　建立人 鼠杂合Fab噬菌体抗体库 ,经过扩增和筛选 ,得到目的抗体。方法　自肝癌患者外周血单个核细胞中扩增全套人抗体Fd片段基因 ,分别克隆入含嵌合轻链的展示载体pComb3和pComb3X中 ,建立人 鼠杂合Fab噬菌体抗体库。然后利用肝癌抗原HAb18GE进行筛选 ,并对抗体库的扩增和筛选条件进行优化。结果　pComb3展示抗体库在 37℃进行扩增挽救时存在明显的目的片段重组丢失现象。pComb3X展示抗体库在不同的扩增条件下均未发现明显的重组丢失现象。经过 4轮筛选后 ,噬菌体展示抗体ELISA显示 ,鉴定克隆与原核表达GST及无关蛋白存在明显交叉反应 ,而改用诱导表达细菌裂解上清进行ELISA鉴定可以抑制交叉反应的发生。结论　通过建立杂合Fab抗体库 ,并对扩增和筛选条件进行优化 。 展开更多

关键词 抗体库 人源性 肝肿瘤

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运用体内表达技术筛选霍乱弧菌感染成年小鼠体内诱导表达基因 被引量：1

12

作者 陈建东 张竞 +2 位作者 阚飙 钟增涛 朱军 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期103-107,共5页

为研究霍乱弧菌体内感染机制,寻找新的抗霍乱药物靶标和候选疫苗。以转座子上无启动子的kan-rpsL融合基因作为体内外双重抗生素报告基因,通过与霍乱弧菌埃尔托型C6706接合建立转座子突变库,经体内外各两轮筛选,获得对卡那霉素(Kan)体内... 为研究霍乱弧菌体内感染机制,寻找新的抗霍乱药物靶标和候选疫苗。以转座子上无启动子的kan-rpsL融合基因作为体内外双重抗生素报告基因,通过与霍乱弧菌埃尔托型C6706接合建立转座子突变库,经体内外各两轮筛选,获得对卡那霉素(Kan)体内抗性体外敏感、链霉素(Str)体外抗性体内敏感的突变株,即转座子插入位点上游包含了能够在体内被诱导激活的启动子。初步建立了筛选霍乱弧菌体内诱导表达基因的成年小鼠模型,最终获得5株阳性克隆。对转座子插入位点进行序列分析,分别为编码渗透敏感型钾离子通道组氨酸激酶的kdpD,谷氨酸合酶大亚基的gltB1,亮氨酰氨基肽酶的pepB以及核苷渗透酶的nupC。对kdpD基因融合lacZ报告基因进行表达调控研究,发现该基因在LB和霍乱毒素诱导培养基AKI中不能被诱导表达。以上结果表明霍乱弧菌通过调节氨基酸及核酸代谢,感知体内外环境来适应宿主体内环境的变化。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 体内表达技术 成年小鼠模型 kan-rpsL

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TLR21在斑马鱼免疫功能中的作用研究 被引量：3

13

作者 欧阳蒲月 郭成栓 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第3期1258-1260,共3页

[目的]研究斑马鱼TLR21受体家族的作用。[方法]用各种纯组分刺激斑马鱼,研究斑马鱼TLR21受体家族(zTLR21.1、zTLR21.3、zTLR21.4)的表达量变化,推测它们的功能。[结果]zTLR21.1对于LTA刺激无反应,对于LPS、ployI:C和Glucan刺激都有上调... [目的]研究斑马鱼TLR21受体家族的作用。[方法]用各种纯组分刺激斑马鱼,研究斑马鱼TLR21受体家族(zTLR21.1、zTLR21.3、zTLR21.4)的表达量变化,推测它们的功能。[结果]zTLR21.1对于LTA刺激无反应,对于LPS、ployI:C和Glucan刺激都有上调反应。zTLR21.3和zTLR21.4对于LPS、LTA和ployI:C刺激均无反应,对于Glucan刺激有明显上调变化。[结论]zTLR21.1可能是一种能够识别大部分抗原的模式识别受体。zTLR21.3和zTLR21.4的功能很类似,可能都是酵母的特异识别受体。 展开更多

关键词 TLR21 TLRS 斑马鱼

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NGF和bFGF对小鼠免疫细胞功能的影响 被引量：3

14

作者 张立平 端礼荣 《实验与检验医学》 CAS 2011年第1期9-11,共3页

目的探讨神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对免疫细胞功能的影响。方法通过小鼠巨噬细胞吞噬、脾细胞增殖、H2O2及O2-指标实验,观察NGF和bFGF对正常小鼠免疫细胞功能的影响。结果一定剂量的NGF、bFGF对小鼠免疫细胞功... 目的探讨神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对免疫细胞功能的影响。方法通过小鼠巨噬细胞吞噬、脾细胞增殖、H2O2及O2-指标实验,观察NGF和bFGF对正常小鼠免疫细胞功能的影响。结果一定剂量的NGF、bFGF对小鼠免疫细胞功能有较明显的促进作用,且表现具有协同促进效应,而同剂量的NGF对免疫功能的促进作用略强于bFGF。此外,NGF、bFGF还能协同促进脾细胞分泌H2O2及O2-。结论一定剂量的NGF、bFGF表现出较明显的免疫促进作用,并存在协同效应。 展开更多

关键词 NGF BFGF 免疫功能 过氧化氢 超氧阴离子

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P选择素单抗对肝缺血再灌注时细胞凋亡的影响 被引量：1

15

作者 陈金联 储榆德 +3 位作者 周同 许蕙敏 李晓 张明钧 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2000年第3期239-241,共3页

目的探讨P选择素及其单克隆抗体对肝缺血再灌注损伤及细胞凋亡的影响。　方法建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型 ,分别采用免疫组化LSAB法和原位DNA片段末端标记法检测有或无P选择素单抗治疗组肝组织中P选择素表达及凋亡细胞。　结果大鼠肝... 目的探讨P选择素及其单克隆抗体对肝缺血再灌注损伤及细胞凋亡的影响。　方法建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型 ,分别采用免疫组化LSAB法和原位DNA片段末端标记法检测有或无P选择素单抗治疗组肝组织中P选择素表达及凋亡细胞。　结果大鼠肝缺血再灌注时 ,肝组织出现显著病理改变及细胞凋亡 ,且P选择素在肝组织中表达 ;P选择素单抗作用组肝组织无明显病理变化且细胞凋亡减少 ,肝组织中未见P选择素表达。　结论P选择素介导中性粒细胞浸润和细胞凋亡 。 展开更多

关键词 P选择素 肝缺血 再灌注损伤 单克隆抗体

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重组人Neuritin蛋白生物学活性的定量分析方法 被引量：2

16

作者 王宿洁 宋丹丹 +4 位作者 李煜 孟平平 朱金辉 朱礼彦 黄瑾 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2022年第5期611-619,共9页

目的建立一种快速高效地定量评价重组人Neuritin(rhNeuritin)蛋白生物学活性的新方法。方法首先建立小鼠海马神经元细胞(HT22细胞)维持培养条件。在此条件下,明确rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间。根据11组不同浓度梯度的rh... 目的建立一种快速高效地定量评价重组人Neuritin(rhNeuritin)蛋白生物学活性的新方法。方法首先建立小鼠海马神经元细胞(HT22细胞)维持培养条件。在此条件下,明确rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间。根据11组不同浓度梯度的rhNeuritin蛋白对HT22细胞存活的影响,建立标准品rhNeuritin蛋白与HT22细胞存活的量效关系曲线;并确定rhNeuritin蛋白的检测范围。在rhNeuritin蛋白的检测限内,根据标准品rhNeuritin蛋白与HT22细胞存活之间的量效关系的拟合曲线,制订标准品蛋白的活性单位,建立了针对rhNeuritin蛋白生物学活性的评价体系。利用两批测试品rhNeuritin蛋白,对该方法的重复性和准确性进行了验证。结果HT22细胞的维持培养液的浓度为0.4%FBS,rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间为72 h,rhNeuritin蛋白浓度在62.5~1000 ng·mL^(-1)的检测限内,HT22细胞的存活与rhNeuritin蛋白的浓度呈正相关。在rhNeuritin蛋白的检测线内,拟定标准品的EC50为一个活性单位。两组测试品rhNeuritin蛋白的量效关系曲线与标准品呈现相同趋势,3者R 2均大于0.9,说明该方法的重复性很好。通过拟订的标准品的活性单位,计算得到500 ng·mL^(-1)时测试品1和测试品2的活性单位分别为1.059、1.069,而实验实际测得测试品1和测试品2的活性单位分别为1.074和1.088,与测定的活性单位相比,两组测试品计算得到的活性单位的误差小于2%,说明该实验方法具有较好的准确性。结论成功建立了重组人Neuritin蛋白的定量检测方法,并制定了明确的活性单位。 展开更多

关键词 重组人Neuritin蛋白 小鼠海马神经元HT22细胞 细胞存活率 活性单位

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鼠TNF家族的B细胞活化因子ORF基因的克隆及原核表达

17

作者 弓莉 王元占 +4 位作者 杨培梁 刘谋荣 朱玉峰 曾俊岭 吴湘慧 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第9期970-973,共4页

目的克隆鼠TNF家族的B细胞活化因子(Bcell activating factor of TNF family,BAFF)ORF基因,并进行原核表达及纯化。方法提取鼠新鲜脾脏组织总RNA,经RT-PCR扩增BAFF ORF基因,测序后,克隆入载体pMAL-c2x,构建重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF O... 目的克隆鼠TNF家族的B细胞活化因子(Bcell activating factor of TNF family,BAFF)ORF基因,并进行原核表达及纯化。方法提取鼠新鲜脾脏组织总RNA,经RT-PCR扩增BAFF ORF基因,测序后,克隆入载体pMAL-c2x,构建重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF ORF,转化大肠杆菌Rosseta(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析纯化后,进行Western blot分析。结果 RT-PCR扩增得到约930bp的cDNA,其序列与GenBank中登录的鼠BAFF ORF cDNA序列的同源性达99.9%;重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF ORF经酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为76500,IPTG终浓度为0.9mmol/L,诱导时间为4h,目的蛋白的表达量最高,破菌上清和沉淀中均可见目的蛋白条带,可溶性蛋白的表达量占全菌总蛋白的49%;纯化的重组蛋白纯度可达90%,含量为0.9mg/ml,且具有良好的反应原性。结论已成功克隆了鼠BAFF ORF基因,并进行了原核表达及纯化,为进一步研究其生物功能奠定了基础。 展开更多

关键词 TNF家族的B细胞活化因子 克隆 分子 原核细胞 基因表达

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化学修饰法解除羊生长激素(OGH)抗原性的研究

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作者 曹淑桂 赵秋宇 +3 位作者 丁忠田 程玉华 聂磊 麦荫乔 《吉林大学自然科学学报》 CAS CSCD 1991年第3期119-121,共3页

生长激素具有刺激骨及软骨的生长,影响蛋白质、糖类、脂类的代谢,调节各种形式的RNA的生物合成等一些重要的生理功能。因而各种来源的生长激素的研究一直是一个非常活跃的领域。自从1972年Bewley等人查明了羊生长激素(OGH)的一级结构以... 生长激素具有刺激骨及软骨的生长,影响蛋白质、糖类、脂类的代谢,调节各种形式的RNA的生物合成等一些重要的生理功能。因而各种来源的生长激素的研究一直是一个非常活跃的领域。自从1972年Bewley等人查明了羊生长激素(OGH)的一级结构以来,人们为探讨其结构与功能的关系,用小分子修饰羊生长激素,取得了一定的结果。然而羊生长激素用于临床却受到异体蛋白抗原性的限制。为了解决这一问题。 展开更多

关键词 生长激素 羊 化学修饰法 抗原性

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43例中国人非综合征性听力减退患者的GJB2基因编码区的突变分析

19

作者 郑文波 罗建红 +1 位作者 郦云 瞿国伟 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2000年第2期55-57,共3页

目的 :分析 43例中国人非综合征性听力减退 (NSHI)患者的GJB2基因部分编码区的突变的情况。方法 :采取浙江省杭州市聋哑学校和宁波市鄞县特殊教育学校的 43例NSHI患者 (分别来自 43个独立家系 )血样 ,经聚合酶链反应 (PCR)扩增GJB2基因... 目的 :分析 43例中国人非综合征性听力减退 (NSHI)患者的GJB2基因部分编码区的突变的情况。方法 :采取浙江省杭州市聋哑学校和宁波市鄞县特殊教育学校的 43例NSHI患者 (分别来自 43个独立家系 )血样 ,经聚合酶链反应 (PCR)扩增GJB2基因编码区 1 2 3 4bp片段 ,用单链构象多态性 (SSCP)分析法进行突变筛选。结果 :43例NSHI患者中该片段PCR产物呈异常带型者有 1 0例 ,且至少有 3种不同的异常式样。结论 :中国人NSHI患者也存在GJB2基因的突变。 展开更多

关键词 非综合征性 听力减退 NSHI GJB2基因

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人脑髓鞘碱性蛋白的分离纯化和鉴定

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作者 王会信 赵强 +2 位作者 蒋滋慧 刘农乐 周廷冲 《生物化学杂志》 CSCD 1990年第1期45-48,共4页

本文介绍了从人脑中分离纯化髓鞘碱性蛋白的方法,人脑组织匀浆经甲醇—氯仿脱脂、酸提取、硫酸铵沉淀和羧甲基纤维素柱层析,得到了纯化的髓鞘碱性蛋白。该蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中为单一带,分子量为21kD。在聚焦电泳中测得其等电... 本文介绍了从人脑中分离纯化髓鞘碱性蛋白的方法,人脑组织匀浆经甲醇—氯仿脱脂、酸提取、硫酸铵沉淀和羧甲基纤维素柱层析,得到了纯化的髓鞘碱性蛋白。该蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中为单一带,分子量为21kD。在聚焦电泳中测得其等电点在pH10以上,氨基酸组成分析结果也与文献值接近。这为进一步研究人脑髓鞘碱性蛋白的抗原性创造了条件。 展开更多

关键词 髓鞘碱性蛋白 脑 分离 纯化

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