[目的]本研究旨在探究树莓果肉多糖RPP-1的体外免疫活性,并结合转录组学初步分析RPP-1免疫调节的作用机制。[方法]以来源于树莓果肉的多糖组分RPP-1为试验材料,分别采用CCK-8法和荧光探针法测定RPP-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力和...[目的]本研究旨在探究树莓果肉多糖RPP-1的体外免疫活性,并结合转录组学初步分析RPP-1免疫调节的作用机制。[方法]以来源于树莓果肉的多糖组分RPP-1为试验材料,分别采用CCK-8法和荧光探针法测定RPP-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力和吞噬能力的影响,利用RT-qPCR和ELISA分别从转录和蛋白质水平检测RPP-1对RAW264.7细胞上清液中NO和细胞因子的作用。同时,采用转录组学对差异表达基因(differentially expressed genes,DEG)进行基因本体(gene ontology,GO)功能注释、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析和蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析。[结果]RPP-1能显著促进小鼠巨噬细胞RAW264.7的活力和吞噬能力,并明显增强细胞培养上清液中的NO、IL-6、IL-1β和TNF-α水平,提高iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的相对表达水平,显示出较强的体外免疫增强作用。转录组学分析发现,与空白组相比,经RPP-1处理的RAW264.7细胞中共有286个与免疫调节相关的DEG,其中111个DEG下调,175个DEG上调;GO功能注释结果表明这些DEG主要参与细胞过程、生物调节、代谢过程、发育过程和免疫系统过程;KEGG富集分析结果显示差异基因显著富集于系统性红斑狼疮、细胞因子-细胞因子受体相互作用和TNF信号通路;PPI网络分析发现枢纽基因为IL-6、IL-1β、Rad51ap1、H2afx、Birc5、Ccl5和Pbk。[结论]树莓果肉多糖RPP-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有免疫增强作用,结合体外活性试验与转录组学分析结果,RPP-1的免疫增强作用可能通过细胞因子-细胞因子受体相互作用及TNF信号传导途径调节实现,且其关键基因为IL-6、IL-1β。展开更多
文摘[目的]本研究旨在探究树莓果肉多糖RPP-1的体外免疫活性,并结合转录组学初步分析RPP-1免疫调节的作用机制。[方法]以来源于树莓果肉的多糖组分RPP-1为试验材料,分别采用CCK-8法和荧光探针法测定RPP-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力和吞噬能力的影响,利用RT-qPCR和ELISA分别从转录和蛋白质水平检测RPP-1对RAW264.7细胞上清液中NO和细胞因子的作用。同时,采用转录组学对差异表达基因(differentially expressed genes,DEG)进行基因本体(gene ontology,GO)功能注释、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析和蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析。[结果]RPP-1能显著促进小鼠巨噬细胞RAW264.7的活力和吞噬能力,并明显增强细胞培养上清液中的NO、IL-6、IL-1β和TNF-α水平,提高iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的相对表达水平,显示出较强的体外免疫增强作用。转录组学分析发现,与空白组相比,经RPP-1处理的RAW264.7细胞中共有286个与免疫调节相关的DEG,其中111个DEG下调,175个DEG上调;GO功能注释结果表明这些DEG主要参与细胞过程、生物调节、代谢过程、发育过程和免疫系统过程;KEGG富集分析结果显示差异基因显著富集于系统性红斑狼疮、细胞因子-细胞因子受体相互作用和TNF信号通路;PPI网络分析发现枢纽基因为IL-6、IL-1β、Rad51ap1、H2afx、Birc5、Ccl5和Pbk。[结论]树莓果肉多糖RPP-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有免疫增强作用,结合体外活性试验与转录组学分析结果,RPP-1的免疫增强作用可能通过细胞因子-细胞因子受体相互作用及TNF信号传导途径调节实现,且其关键基因为IL-6、IL-1β。
文摘目的:观察化瘀祛痰方(Huayu-Qutan formula,HYQT)含药血清对油酸诱导的HepG2细胞脂质损伤及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的影响,探讨HYQT防治脂代谢紊乱的可能机制。方法:以不同终浓度的油酸诱导HepG2细胞,CCK8法、油红O染色和ELISA法筛选油酸诱导及HYQT含药血清干预的最佳浓度及时间。将HepG2细胞分为对照(control)组、模型(model)组、HYQT组、毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg;ERS激动剂)组和Tg+HYQT组。油红O染色观察细胞脂质沉积情况;ELISA法检测细胞甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量变化;透射电镜观察细胞内质网结构变化;RT-qPCR和Wes全自动蛋白定量分析系统检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regula⁃tory element binding protein 1c,SREBP1c)、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl coenzyme A carboxylase 1,ACC1)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和硬脂酰辅酶A去饱和酶l(stearoyl coenzyme A desaturase 1,SCD1)的mRNA和蛋白表达情况。结果:1000μmol/L油酸诱导HepG2细胞脂质沉积效果明显,10%含药血清作用48 h作为后续实验的相对最佳浓度和时间。与control组比较,model组胞浆中橘红色脂滴形成明显增多,内质网扩张,发生ERS,细胞核固缩;TG和FFA含量明显增多(P<0.01);GRP78、SREBP1c、ACC1、FAS和SCD1 mRNA及蛋白表达量显著增高(P<0.01);与model组比较,HYQT含药血清干预后细胞内橘红色脂滴明显减少,内质网形态基本恢复正常,TG和FFA含量明显减少(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01);加入Tg后细胞内橘红色脂滴形成更多,内质网扩张程度更明显,内质网形态迥异,大小不一,呈空泡状改变,部分可见融合成簇现象,TG和FFA含量增多(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量增高(P<0.01);与Tg组比较,Tg+HYQT组细胞内橘红色脂滴减少,内质网扩张程度减轻,空泡体积减小和数量减少;TG和FFA含量明显减少(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论:HYQT含药血清可以减轻油酸诱导的HepG2细胞脂质损伤,其机制可能与抑制ERS介导的脂肪酸从头合成有关。
