目的:通过网络药理学结合体内外实验探讨黄芩素(baicalein,Bai)对抗胰腺癌的作用机制及靶点。方法:通过多数据筛选Bai治疗胰腺癌的潜在靶点;利用STRING构建蛋白相互作用网络,并使用Cytoscape筛选核心靶点;同时进行GO(Gene Ontology)和KE...目的:通过网络药理学结合体内外实验探讨黄芩素(baicalein,Bai)对抗胰腺癌的作用机制及靶点。方法:通过多数据筛选Bai治疗胰腺癌的潜在靶点;利用STRING构建蛋白相互作用网络,并使用Cytoscape筛选核心靶点;同时进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析,探讨这些靶点的生物学功能。人胰腺癌细胞系Aspc-1和Bxpc-3经Bai处理后,用MTT法检测细胞活力;集落形成实验评估细胞群体依赖性增殖;流式细胞技术分析细胞凋亡和周期;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;异种移植瘤模型评价胰腺癌肿瘤增殖;免疫组化实验检测小鼠肿瘤组织中AKT蛋白表达;Western blot分析AKT、β-catenin、N-cadherin和转录因子Slug蛋白表达水平。结果:通过网络药理学筛选,得到108个Bai与胰腺癌交集的靶点,其中核心靶点共有7个,分别是原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、热休克蛋白90α家族A类成员1(heat shock protein 90 alpha family class A member 1,HSP90AA1)、雌激素受体1(estrogen receptor 1,ESR1)、肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,TP53)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、AKT1和丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated pro⁃tein kinase 3,MAPK3)。GO主要富集于氧化应激反应、蛋白磷酸化和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性等生物过程。KEGG主要富集PI3K/AKT、MAPK和Ras信号通路。MTT及集落形成实验显示,Bai呈剂量依赖性抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞活力(72 h的IC50分别为73.6μmol/L和83.4μmol/L)并减少细胞集落形成(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术证实,Bai能诱导Aspc-1和Bxpc-3细胞凋亡(P<0.01),阻滞细胞至G0/G1期(P<0.05或P<0.01)。Transwell实验结果表明Bai抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01)。异种移植瘤实验证实,Bai抑制由Aspc-1细胞诱导产生肿瘤的增殖作用(P<0.01)。此外,免疫组化实验显示,肿瘤组织中AKT的表达水平显著降低(P<0.01)。Western blot实验表明,Bai显著降低Aspc-1和Bxpc-3细胞中AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug表达水平(P<0.01)。结论:Bai抑制胰腺癌增殖、迁移及侵袭,与AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug蛋白水平降低有关。展开更多
文摘目的:观察化瘀祛痰方(Huayu-Qutan formula,HYQT)含药血清对油酸诱导的HepG2细胞脂质损伤及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的影响,探讨HYQT防治脂代谢紊乱的可能机制。方法:以不同终浓度的油酸诱导HepG2细胞,CCK8法、油红O染色和ELISA法筛选油酸诱导及HYQT含药血清干预的最佳浓度及时间。将HepG2细胞分为对照(control)组、模型(model)组、HYQT组、毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg;ERS激动剂)组和Tg+HYQT组。油红O染色观察细胞脂质沉积情况;ELISA法检测细胞甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量变化;透射电镜观察细胞内质网结构变化;RT-qPCR和Wes全自动蛋白定量分析系统检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regula⁃tory element binding protein 1c,SREBP1c)、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl coenzyme A carboxylase 1,ACC1)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和硬脂酰辅酶A去饱和酶l(stearoyl coenzyme A desaturase 1,SCD1)的mRNA和蛋白表达情况。结果:1000μmol/L油酸诱导HepG2细胞脂质沉积效果明显,10%含药血清作用48 h作为后续实验的相对最佳浓度和时间。与control组比较,model组胞浆中橘红色脂滴形成明显增多,内质网扩张,发生ERS,细胞核固缩;TG和FFA含量明显增多(P<0.01);GRP78、SREBP1c、ACC1、FAS和SCD1 mRNA及蛋白表达量显著增高(P<0.01);与model组比较,HYQT含药血清干预后细胞内橘红色脂滴明显减少,内质网形态基本恢复正常,TG和FFA含量明显减少(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01);加入Tg后细胞内橘红色脂滴形成更多,内质网扩张程度更明显,内质网形态迥异,大小不一,呈空泡状改变,部分可见融合成簇现象,TG和FFA含量增多(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量增高(P<0.01);与Tg组比较,Tg+HYQT组细胞内橘红色脂滴减少,内质网扩张程度减轻,空泡体积减小和数量减少;TG和FFA含量明显减少(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论:HYQT含药血清可以减轻油酸诱导的HepG2细胞脂质损伤,其机制可能与抑制ERS介导的脂肪酸从头合成有关。
文摘目的:通过网络药理学结合体内外实验探讨黄芩素(baicalein,Bai)对抗胰腺癌的作用机制及靶点。方法:通过多数据筛选Bai治疗胰腺癌的潜在靶点;利用STRING构建蛋白相互作用网络,并使用Cytoscape筛选核心靶点;同时进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析,探讨这些靶点的生物学功能。人胰腺癌细胞系Aspc-1和Bxpc-3经Bai处理后,用MTT法检测细胞活力;集落形成实验评估细胞群体依赖性增殖;流式细胞技术分析细胞凋亡和周期;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;异种移植瘤模型评价胰腺癌肿瘤增殖;免疫组化实验检测小鼠肿瘤组织中AKT蛋白表达;Western blot分析AKT、β-catenin、N-cadherin和转录因子Slug蛋白表达水平。结果:通过网络药理学筛选,得到108个Bai与胰腺癌交集的靶点,其中核心靶点共有7个,分别是原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、热休克蛋白90α家族A类成员1(heat shock protein 90 alpha family class A member 1,HSP90AA1)、雌激素受体1(estrogen receptor 1,ESR1)、肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,TP53)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、AKT1和丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated pro⁃tein kinase 3,MAPK3)。GO主要富集于氧化应激反应、蛋白磷酸化和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性等生物过程。KEGG主要富集PI3K/AKT、MAPK和Ras信号通路。MTT及集落形成实验显示,Bai呈剂量依赖性抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞活力(72 h的IC50分别为73.6μmol/L和83.4μmol/L)并减少细胞集落形成(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术证实,Bai能诱导Aspc-1和Bxpc-3细胞凋亡(P<0.01),阻滞细胞至G0/G1期(P<0.05或P<0.01)。Transwell实验结果表明Bai抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01)。异种移植瘤实验证实,Bai抑制由Aspc-1细胞诱导产生肿瘤的增殖作用(P<0.01)。此外,免疫组化实验显示,肿瘤组织中AKT的表达水平显著降低(P<0.01)。Western blot实验表明,Bai显著降低Aspc-1和Bxpc-3细胞中AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug表达水平(P<0.01)。结论:Bai抑制胰腺癌增殖、迁移及侵袭,与AKT、β-catenin、N-cadherin和Slug蛋白水平降低有关。
