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UFLC-QTOF-MS/MS分析噁唑酰草胺及其在生物体内的代谢产物
1
作者 罗剑文 钟创光 +6 位作者 刘羿飞 黄欣如 黄昆 彭霏 殷梓宁 何昀泽 张以顺 《中山大学学报(自然科学版)(中英文)》 北大核心 2025年第2期67-75,共9页
采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UFLC-QTOF-MS/MS)技术,以黄粉虫幼虫(Tenebrio molitor)作为模式生物,探索了一种在缺乏全面代谢物标准品的情况下发现和积累噁唑酰草胺(metamifop)代谢物色谱-质谱特征数据的新方法,并构建... 采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UFLC-QTOF-MS/MS)技术,以黄粉虫幼虫(Tenebrio molitor)作为模式生物,探索了一种在缺乏全面代谢物标准品的情况下发现和积累噁唑酰草胺(metamifop)代谢物色谱-质谱特征数据的新方法,并构建出噁唑酰草胺在黄粉虫中的代谢途径。研究显示从连续15 d定量摄食含噁唑酰草胺2 mg/g药饵的黄粉虫粪便提取物中发现了21种代谢产物,包括14种Ⅰ相代谢产物和7种Ⅱ相代谢产物。在Ⅰ相代谢产物中除单氧化噁唑酰草胺、精噁唑禾草酸、6-CBO、HPFMPA、HPPA和HFMPA已报道外,其余8种均为首次在生物体内发现。并发现这些I相代谢产物至少通过与氨基酸结合、与葡萄糖硫酸酯结合以及与硫酸酯结合3种途径进一步转化为相应的Ⅱ相代谢产物。 展开更多
关键词 噁唑酰草胺(metamifop) 黄粉虫(Tenebrio molitor) 代谢产物 超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UFLC-QTOF-MS/MS)
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黑木耳黑色素的氨基酸修饰及结构表征
2
作者 姚秀鸽 郭燕 +5 位作者 韩闯 田爽 朱加楠 张晓佳 殷博 马银鹏 《中国酿造》 北大核心 2025年第9期105-111,共7页
为了提高黑木耳黑色素的溶解性,对黑木耳发酵液中提取的黑色素进行氨基酸修饰,选出修饰效果较好的氨基酸黑色素的结构进行表征,并对其溶解性、稳定性及抗氧化活性进行分析。结果表明,精氨酸、赖氨酸和组氨酸对黑木耳黑色素的修饰效果较... 为了提高黑木耳黑色素的溶解性,对黑木耳发酵液中提取的黑色素进行氨基酸修饰,选出修饰效果较好的氨基酸黑色素的结构进行表征,并对其溶解性、稳定性及抗氧化活性进行分析。结果表明,精氨酸、赖氨酸和组氨酸对黑木耳黑色素的修饰效果较好,吸光度值分别为1.970、1.560、1.193;修饰后的氨基酸黑色素的紫外光谱分析显示,其最大吸收峰均向短波方向偏移,红外光谱分析显示,其在波数2 200~2 000 cm^(-1)处存在氨基酸黑色素的吸收峰;精氨酸、组氨酸和赖氨酸黑色素在水中的溶解度明显提高,分别为5.62 g/L、5.43 g/L、5.39 g/L;不同温度、光照及金属离子条件下,随着时间延长,黑木耳黑色素和氨基酸黑色素的吸光度值无明显变化,黑色素保存率均>94.97%;黑木耳黑色素和氨基酸黑色素质量浓度为4 mg/m L时,DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除率均>96%,铁离子还原力(吸光度值)为1.863~2.252。 展开更多
关键词 黑木耳 黑色素 氨基酸修饰 结构表征 理化性质 抗氧化活性
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嗜水气单胞菌RPA-LFD快速检测方法的建立 被引量：7
3
作者 王姝然 徐嘉楠 +4 位作者 范厚勇 郑跃平 周天琦 张也 许丹 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期849-858,共10页
文章旨在建立一种针对嗜水气单胞菌的敏感性高、特异性强的快速临床诊断方法。研究根据嗜水气单胞菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B,gyrB)基因的保守序列,设计特异性重组酶聚合酶扩增技术(RPA)扩增引物,通过结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和... 文章旨在建立一种针对嗜水气单胞菌的敏感性高、特异性强的快速临床诊断方法。研究根据嗜水气单胞菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B,gyrB)基因的保守序列,设计特异性重组酶聚合酶扩增技术(RPA)扩增引物,通过结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和侧流层析试纸条(LFD)的方法进行反应条件的优化、特异性及灵敏度检测。实验结果表明,所建立的嗜水气单胞菌RPA-LFD快速检测方法可在38℃最适温度下30min内无干扰地检测到嗜水气单胞菌,对嗜水气单胞菌纯培养物和基因组DNA的最小检出限为10^(3)cfu/mL和100 pg/μL。利用建立的RPA-LFD与普通PCR同时检测杂交鲟鱼处理临床样品的结果表明,两种方法的结果一致。综上所述,通过对RPA反应条件的探索和优化,成功建立了嗜水气单胞菌快速检测方法。该方法操作简便,反应迅速,与普通PCR相比,不需要昂贵的仪器,为未来嗜水气单胞菌细菌性疾病的早期诊断提供了更有效的技术支持。 展开更多
关键词 快速检测 重组酶聚合酶扩增技术 侧向流动试纸条 嗜水气单胞菌
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龙牙百合鳞茎生长点石蜡切片技术改良研究 被引量：1
4
作者 杨林澔 陈淼 +2 位作者 李庠 马杰 李玉帆 《湖南农业科学》 2024年第6期10-13,20,共5页
为了准确观测龙牙百合鳞茎生长点的生长分化过程,以龙牙百合冷藏期间的鳞茎为试验材料,在传统石蜡制片法的基础上,对脱水、透明等步骤进行优化并筛选了最佳的甲苯胺蓝染色方法。试验获得的百合鳞茎生长点石蜡切片制作改良方法为:将百合... 为了准确观测龙牙百合鳞茎生长点的生长分化过程,以龙牙百合冷藏期间的鳞茎为试验材料,在传统石蜡制片法的基础上,对脱水、透明等步骤进行优化并筛选了最佳的甲苯胺蓝染色方法。试验获得的百合鳞茎生长点石蜡切片制作改良方法为:将百合鳞茎剥开鳞片至可观察到茎尖生长点,修整为5mm大小的立方体投入FAA固定液中,保存一周;用85%乙醇(2 h)、95%乙醇(2h)、100%乙醇(3h)进行脱水处理,再用二甲苯与乙醇等比例溶液(2h)、纯二甲苯(3h)进行透明处理;将透明好的材料放入石蜡+二甲苯溶液(体积比2∶3)中,在37℃的恒温箱中浸蜡2d,期间多次少量加入石蜡;之后在60℃恒温箱更换纯石蜡2次,每次4 h,浸蜡后的材料在60℃的操作台上包埋,再切成厚10μm的薄片,待蜡片完全伸展,将蜡片粘于均匀涂抹了赫伯特粘片剂的载玻片上,37℃烤片5h,脱蜡复水后用1%甲苯胺蓝染液稀释150倍染色3min。 展开更多
关键词 龙牙百合 鳞茎生长点 石蜡切片 技术改良
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匀浆法快速提取叶绿素对比试验 被引量：4
5
作者 王富豪 郭婧华 程有普 《中南农业科技》 2024年第1期36-39,共4页
通过与试剂盒法、直接浸提法进行比较,分析增加匀浆步骤后浸提液提取叶绿素的效果,并比较了95%乙醇、95%乙醇和80%丙酮、二甲基亚砜和80%丙酮3种常用浸提液在增加匀浆步骤后对油菜、辣椒、棉花、樟子松、番茄、荷兰菊、小叶黄杨、小麦8... 通过与试剂盒法、直接浸提法进行比较,分析增加匀浆步骤后浸提液提取叶绿素的效果,并比较了95%乙醇、95%乙醇和80%丙酮、二甲基亚砜和80%丙酮3种常用浸提液在增加匀浆步骤后对油菜、辣椒、棉花、樟子松、番茄、荷兰菊、小叶黄杨、小麦8种常见植物的提取效率和稳定性。结果表明,匀浆浸提法比试剂盒法和直接浸提法两种方法的提取效率更高、更稳定,并适用于多种浸提液加快浸提过程,其中,番茄和油菜在95%乙醇、95%乙醇和80%丙酮匀浆浸提液中都可以在2 h内完成提取,稳定性好,荷兰菊和辣椒在95%乙醇浸提液中匀浆浸提效果最好,2 h内提取完成,小麦、樟子松在95%乙醇和80%丙酮浸提液中匀浆浸提效果最好,棉花和小叶黄杨在加入匀浆后提取效率大幅提高。 展开更多
关键词 叶绿素提取 匀浆法 试剂盒法 直接浸提法 二甲基亚砜 丙酮 乙醇 应用
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重组人白细胞介素-1受体拮抗剂卡那霉素抗性菌种的构建、表达、纯化及质量鉴定
6
作者 殷婷婷 朱秋媚 +8 位作者 张宇 王江林 王明军 曲玲玲 朱翯 顾笑宇 刘景会 富锐丽 刘玉林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第6期672-678,686,共8页
目的构建卡那霉素抗性的重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)菌种,并进行rhIL-1Ra蛋白的表达、纯化及质量鉴定,以降低β-内酰胺抗生素带来的风险。方法分别以氨苄抗性的质粒rh... 目的构建卡那霉素抗性的重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)菌种,并进行rhIL-1Ra蛋白的表达、纯化及质量鉴定,以降低β-内酰胺抗生素带来的风险。方法分别以氨苄抗性的质粒rhIL-1Ra(A-rhIL-1Ra)、pET-28a为模板,进行PCR扩增,获得线性化载体和卡那霉素基因片段,经同源重组构建卡那霉素抗性的质粒rhIL-1Ra(K-rhIL-1Ra),测序正确后转化E.coli BL21(DE3),构建重组工程菌,经IPTG诱导表达后,进行CM Bestarose Fast Flow、DEAE Bestarose Fast Flow两步柱层析纯化。收集纯化产物,15%SDSPAGE、分子排阻高效液相色谱法(size-exclusion high-performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、反相高效液相色谱法(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测纯度,串联质谱法检测质谱相对分子质量,Western blot法鉴定特异性,报告基因法检测生物学活性,液相色谱-质谱(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)法分析比对产品相关杂质。结果经菌落PCR及测序鉴定证明质粒K-rhIL-1Ra构建正确。表达的K-rhIL-1Ra蛋白相对分子质量约17000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%以上;两步纯化的K-rhIL-1Ra蛋白纯度分别为97%和99%,单体含量分别为99.33%和100%,色谱纯度分别为91.86%和96.96%,质谱相对分子质量与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致,可与小鼠抗人IL-1Ra单抗发生特异性反应;纯化的K-rhIL-1Ra蛋白生物学活性为1.29×10^(5)U/mg,相关蛋白化学修饰类型与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致。结论成功构建了K-rhIL-1Ra菌种,表达并纯化后的蛋白符合rhIL-1Ra的特征和质量标准,为rhIL-1Ra菌种变更及可比性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-1受体拮抗剂 同源重组 抗性基因 菌种变更
原文传递
基于DNA条形码技术的高通量介观联接组学
7
作者 胡鹏凯 黄龙文 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第10期2369-2378,共10页
联接组学作为研究不同脑区、不同神经元之间突触联接模式的一个重要神经科学研究领域,是理解神经计算,揭示情感、学习、认知等复杂功能的关键之一。其中微米级的介观联接组学以其独有的优势成为了目前在啮齿类动物等的神经系统研究中应... 联接组学作为研究不同脑区、不同神经元之间突触联接模式的一个重要神经科学研究领域,是理解神经计算,揭示情感、学习、认知等复杂功能的关键之一。其中微米级的介观联接组学以其独有的优势成为了目前在啮齿类动物等的神经系统研究中应用最为广泛的技术,且在非人灵长类动物的脑科学研究中也有着重要的应用前景。传统的介观联接组学测量技术通常采用荧光标记和光学成像的原理,对神经环路进行顺行或逆行示踪。为了实现单细胞精度的示踪成像以绘制更精细的联接图谱,人们发明了稀疏标记神经元的方法,但在单个动物的示踪通量、数据的多组学跨模态整合等方面仍面临着挑战。近十年来,基于DNA条形码的高通量介观联接组测量技术正快速发展,与传统的介观联接组学测量技术相比具有高通量、低成本以及多组学分析的优势。本文根据示踪原理及所用病毒感染模式的不同介绍了几种较成熟的基于DNA条形码的介观联接组学代表性技术,并从技术原理、技术应用以及技术的优缺点等方面进行总结。最后,总结了基于DNA条形码的高通量介观联接组测量技术领域的发展现状,并提出了一些未来的研究方向。 展开更多
关键词 DNA条形码 介观联接组 脑联接图谱
原文传递
植物多糖提取液的几种脱蛋白方法的比较分析 被引量：125
8
作者 李知敏 王伯初 +1 位作者 周菁 彭亮 《重庆大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第8期57-59,共3页
多糖对肿瘤、病毒、心血管等方面具有独特的生物活性,且细胞毒性很低,因此多糖的分离及纯化一直是一个很有意义的研究课题。实验以多糖损失率和脱蛋白率(r)为衡量指标,通过对几种脱蛋白方法的比较,优化出植物多糖提取液的脱蛋白方法,为... 多糖对肿瘤、病毒、心血管等方面具有独特的生物活性,且细胞毒性很低,因此多糖的分离及纯化一直是一个很有意义的研究课题。实验以多糖损失率和脱蛋白率(r)为衡量指标,通过对几种脱蛋白方法的比较,优化出植物多糖提取液的脱蛋白方法,为多糖的纯化提供了一定的参考。选用了3种较为常见的方法:三氯乙酸法、盐酸法及沙维积法(Sevag法)对植物多糖提取液进行脱蛋白处理。三氯乙酸法、盐酸法及Sevag法的脱蛋白率分别为46.1%、72.5%和42.3%,多糖损失率分别为6.1%、15.1%和14.3%。盐酸法脱蛋白率高,但它的多糖损失率较高;三氯乙酸法较温和,但除蛋白效率不高;Sevag法的脱蛋白效果不及前两种方法。 展开更多
关键词 多糖 提取液 脱蛋白 比较
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亲水金和憎水二氧化硅纳米颗粒对葡萄糖生物传感器响应灵敏度的增强作用 被引量：28
9
作者 唐芳琼 韦正 +3 位作者 陈东 孟宪伟 苟立 冉均国 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2000年第1期91-94,共4页
用亲水金、憎水二氧化硅纳米颗粒固定葡萄糖氧化酶 (GOD) ,采用聚乙烯醇缩丁醛 (PVB)为辅助固酶膜基质来制备葡萄糖生物传感器 ,并考察了亲水金、憎水二氧化硅纳米颗粒对酶电极电流响应的影响 .实验表明 ,引入纳米粒子可显著增强电极响... 用亲水金、憎水二氧化硅纳米颗粒固定葡萄糖氧化酶 (GOD) ,采用聚乙烯醇缩丁醛 (PVB)为辅助固酶膜基质来制备葡萄糖生物传感器 ,并考察了亲水金、憎水二氧化硅纳米颗粒对酶电极电流响应的影响 .实验表明 ,引入纳米粒子可显著增强电极响应灵敏度 .并对两种不同性质纳米颗粒所起作用的可能机理进行讨论 ,从理论和实验上证明了纳米颗粒对固定酶的作用 .为制备有实用价值的葡萄糖生物传感器提供了可供参考的实验和理论依据 . 展开更多
关键词 GOD 亲水Au颗粒 憎水SiO2颗粒 生物传感器
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番茄成熟度与其电学参数关系的研究 被引量：31
10
作者 陈志远 张继澍 +2 位作者 刘亚龙 王瑞庆 王国栋 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期826-830,共5页
以5个成熟度的金棚一号番茄果实为材料,在126 Hz^5 MHz频率范围内,利用平行板电极系统研究了8个电参数与番茄成熟度的关系,从而筛选反映果实成熟度的评价电指标.结果表明:500 kHz^5 MHz是测定番茄果实电指标的最佳频率段;在最佳频率范围... 以5个成熟度的金棚一号番茄果实为材料,在126 Hz^5 MHz频率范围内,利用平行板电极系统研究了8个电参数与番茄成熟度的关系,从而筛选反映果实成熟度的评价电指标.结果表明:500 kHz^5 MHz是测定番茄果实电指标的最佳频率段;在最佳频率范围内,随着番茄成熟度的增加,果实的复阻抗值逐渐减小,而其相对介电常数值持续增加;在番茄的转色期,其损耗系数具有最大值,而复阻抗相角具有最小值.研究发现,在合适频率下复阻抗和相对介电常数可以作为辨别番茄果实成熟度的合适电参数,而损耗系数和复阻抗相角可以作为辨别其转色期的指标. 展开更多
关键词 番茄 成熟度 电特性 无损检测
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胶原蛋白降解物高效液相色谱/质谱联用分析 被引量：25
11
作者 孙爱梅 张贵锋 +1 位作者 倪文 苏志国 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期66-72,共7页
利用高效液相色谱/质谱联用技术分析了胶原蛋白Ⅱ和Ⅰ经变性和酶解处理得到的多肽混合物,比较研究了两种类型胶原蛋白降解物之间的区别,利用液相色谱质谱连用技术识别出了不同类型胶原蛋白中的特征肽段.胶原蛋白在50℃处理3h可溶解于盐... 利用高效液相色谱/质谱联用技术分析了胶原蛋白Ⅱ和Ⅰ经变性和酶解处理得到的多肽混合物,比较研究了两种类型胶原蛋白降解物之间的区别,利用液相色谱质谱连用技术识别出了不同类型胶原蛋白中的特征肽段.胶原蛋白在50℃处理3h可溶解于盐溶液,凝胶过滤分析结果表明,热变性的胶原蛋白分子量在10万以上,因此在热变性过程中胶原蛋白的三螺旋结构被破坏但没有明显的随机降解.利用胰蛋白酶对胶原蛋白进行了酶切处理,在酶用量为2%,pH 8.1～8.2,温度37℃条件下,处理20h后胶原蛋白降解较完全,多肽混合物的平均分子量在1万以下.利用液质联用技术研究Ⅱ型和Ⅰ型胶原蛋白降解物中的多肽,通过多级质谱分析了胶原蛋白降解物多肽的序列.结果表明,不同类型的胶原蛋白酶解后的多肽混合物中存在特定序列的特征肽段,利用特征肽段进行胶原蛋白类型识别是可行的. 展开更多
关键词 胶原蛋白酶 多肽 降解物 酶解处理 高效液相色谱 质谱联用 不同类型 酶用量 热变性 凝胶过滤
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建立糖尿病心肌病动物模型方法的实验研究 被引量：38
12
作者 张春虹 臧伟进 +6 位作者 徐静 于晓江 吕军 荆爱玉 陈莉娜 胡浩 孙强 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期707-711,共5页
目的研究建立糖尿病心肌病动物模型的科学、实用的方法。方法应用链脲佐菌素对SD大鼠进行一次性腹腔注射,通过观察大鼠的一般状况、进食量、进水量、尿量、体重的变化,监测血糖、尿糖、心肌酶含量、胰岛素水平、心肌超微结构、心脏大血... 目的研究建立糖尿病心肌病动物模型的科学、实用的方法。方法应用链脲佐菌素对SD大鼠进行一次性腹腔注射,通过观察大鼠的一般状况、进食量、进水量、尿量、体重的变化,监测血糖、尿糖、心肌酶含量、胰岛素水平、心肌超微结构、心脏大血管内膜情况及心电图情况来评估糖尿病心肌病的发病情况。结果腹腔注射STZ 3周后,模型组大鼠出现病态表现,进食量、饮水量、尿量增加,体重下降。血糖值、尿糖值及肌酸激酶、乳酸脱氢酶值均较对照组大鼠升高。胰岛素水平较对照组明显降低,心肌超微结构符合糖尿病心肌病表现,心脏大血管未见纤维斑块和粥样斑块。结论对SD大鼠进行一次性腹腔注射链脲佐菌素(55mg/kg),大鼠于注射后第3周可出现稳定的糖尿病心肌病状态。这是一种可靠且实用性强的糖尿病心肌病动物模型的制备方法。 展开更多
关键词 糖尿病心肌病 动物模型 链脲佐菌素
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牛肉及其制品中掺入鸡肉、鸭肉和猪肉的多重数字PCR快速检测方法研究 被引量：22
13
作者 杨华 汪小福 +2 位作者 肖英平 魏巍 徐俊锋 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期994-1000,共7页
利用微滴式数字PCR,建立针对牛、猪、鸡和鸭肉的多重数字PCR检测技术。结果表明,所选择的4个物种的引物和探针特异性良好,能够快速对样品中是否存在这4种肉类成分做出快速判断。数字PCR分析中,FAM和HEX两个通道的荧光信号能很好地区分,... 利用微滴式数字PCR,建立针对牛、猪、鸡和鸭肉的多重数字PCR检测技术。结果表明,所选择的4个物种的引物和探针特异性良好,能够快速对样品中是否存在这4种肉类成分做出快速判断。数字PCR分析中,FAM和HEX两个通道的荧光信号能很好地区分,在对9个实际样品的检测中,所在样品的微滴生成数都在10 000以上,满足数字PCR中泊松公式分析的要求,同时9个样品的检测结果与已知信息完全相符。 展开更多
关键词 数字PCR 肉源性成分检测 多重检测 快速检测
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水中五氯酚测定方法的研究 被引量：20
14
作者 周颖 吴显芳 +5 位作者 屈卫东 王霞 郑唯韡 陈国光 蒋颂辉 姜庆五 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期287-288,共2页
目的 建立灵敏、快速的水中五氯酚的测定方法。方法在色谱柱、色谱条件和定量方法等方面对现行的国家标准检测方法进行改进和优化，并对实际水样进行分析。结果建立以毛细管柱替代填充柱，以三溴苯酚（TBP）作为内标物的水中五氯酚的气... 目的 建立灵敏、快速的水中五氯酚的测定方法。方法在色谱柱、色谱条件和定量方法等方面对现行的国家标准检测方法进行改进和优化，并对实际水样进行分析。结果建立以毛细管柱替代填充柱，以三溴苯酚（TBP）作为内标物的水中五氯酚的气相色谱分析方法。方法线性范围为0.1～10μg／L，r=0.9999；方法检出限为4．5ng／L；样品加标回收率为90．1％～98．4％，相对标准偏差（RSD）小于4．1％。结论 本法灵敏度高、准确度好，适用于环境水样中五氯酚的痕量分析。 展开更多
关键词 五氯酚 毛细管气相色谱法 水
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灵芝菌原生质体融合条件研究 被引量：11
15
作者 陈合 胡云红 +1 位作者 秦俊哲 谷珅睿 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期173-176,共4页
通过化学方法和电融合法对白芝(Ganoderma applanatum,GA)和赤芝(Ganoderma lucidum,GL)两种大型真菌原生质体融合条件进行了研究,实验得出:化学方法对灵芝菌原生质体融合的最佳条件:PEG浓度30%、CaCl20.02mol/L、融合时间30min、温度30... 通过化学方法和电融合法对白芝(Ganoderma applanatum,GA)和赤芝(Ganoderma lucidum,GL)两种大型真菌原生质体融合条件进行了研究,实验得出:化学方法对灵芝菌原生质体融合的最佳条件:PEG浓度30%、CaCl20.02mol/L、融合时间30min、温度30℃,融合率可达0.4%;电融合法对灵芝菌原生质体融合的最佳条件:交变电流频率2MHz、电压40V、直流脉冲脉幅10kV/cm、脉宽25μs、直流电压为500V,融合率可达40%。 展开更多
关键词 灵芝菌 原生质体 电融合 化学融合 育种
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太白山几类植物群落灌木及草本层的最小取样面积研究 被引量：8
16
作者 任学敏 杨改河 +4 位作者 王得祥 秦晓威 刘振学 赵双喜 白宇 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期1024-1031,共8页
采用2条非饱和与2条饱和曲线方程对太白山7种类型植物群落（Ⅰ.锐齿栎林、Ⅱ.铁橡树林、Ⅲ.红桦林、Ⅳ.巴山冷杉-牛皮桦林、Ⅴ.巴山冷杉林、Ⅵ.太白红杉林和Ⅶ.头花杜鹃-大毛状薹草灌草丛）灌木及草本层拟合的种-面积曲线,计算研究精度... 采用2条非饱和与2条饱和曲线方程对太白山7种类型植物群落（Ⅰ.锐齿栎林、Ⅱ.铁橡树林、Ⅲ.红桦林、Ⅳ.巴山冷杉-牛皮桦林、Ⅴ.巴山冷杉林、Ⅵ.太白红杉林和Ⅶ.头花杜鹃-大毛状薹草灌草丛）灌木及草本层拟合的种-面积曲线,计算研究精度要求分别为60%、70%、80%、90%时各群落各层的最小取样面积,并进行分析比较.结果表明,不同群落灌木及草本层最小取样面积均随研究精度增高而增大,群落Ⅰ~Ⅶ灌木层的取样面积分别为96、35、73、63、75、1701、8 m2时,草本层为91、91、57、59、71、657、m2时,可满足精度80%以下的研究要求;灌木层的取样面积为163、62、122、104、120、296、35 m2时,草本层为150、151、109、110、126、1192、9 m2时,可满足精度90%的研究要求.方差分析表明,不同群落灌木及草本层最小取样面积存在差异,有些差异达显著水平（P〈0.05）.因此,在野外调查时应根据研究精度要求和群落类型合理设置最小取样面积. 展开更多
关键词 最小取样面积 种-面积曲线 植物群落 太白山
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酶水解分离人胃粘膜上皮细胞 被引量：8
17
作者 刘国安 杨燕 +1 位作者 关泉林 郑荣梁 《西北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第2期59-61,94,共4页
比较了金属螯合剂EDTA-Na2及各种蛋白酶水解分离人胃粘膜上皮细胞的方法.将胃粘膜组织置于不同分离液中,37℃振荡50min,结果显示:胶原蛋白酶、链霉蛋白酶、胰酶、EDTA-Na2单独使用及胰酶与EDTA-Na2联合使用,样本得到的细胞都较少;而胶... 比较了金属螯合剂EDTA-Na2及各种蛋白酶水解分离人胃粘膜上皮细胞的方法.将胃粘膜组织置于不同分离液中,37℃振荡50min,结果显示:胶原蛋白酶、链霉蛋白酶、胰酶、EDTA-Na2单独使用及胰酶与EDTA-Na2联合使用,样本得到的细胞都较少;而胶原蛋白酶和链霉蛋白酶联合使用时,得到的细胞总数、上皮细胞比率及细胞活率都较高.用彗星电泳对胶原蛋白酶和链霉蛋白酶联合作用下的淋巴细胞进行了分析,结果表明,该条件不会对细胞的DNA造成损伤. 展开更多
关键词 胃粘膜 上皮细胞 胶原蛋白酶 链霉蛋白酶 分离
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木瓜凝乳蛋白酶的单链单甲氧基聚乙二醇修饰产物的检测与分析 被引量：7
18
作者 舒薇 郭勇 +1 位作者 贺丽苹 温宏睿 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期64-68,共5页
在底物保护下,采用三聚氰氯活化的单链单甲氧基聚乙二醇(mPEG1)对木瓜凝乳蛋白酶(Cp)进行了共价修饰,反应混合物经毛细管电泳(CE)分析及SephadexG75分离纯化获得修饰度为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1长链的修饰纯酶(mPEG1Cp).以三硝基... 在底物保护下,采用三聚氰氯活化的单链单甲氧基聚乙二醇(mPEG1)对木瓜凝乳蛋白酶(Cp)进行了共价修饰,反应混合物经毛细管电泳(CE)分析及SephadexG75分离纯化获得修饰度为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1长链的修饰纯酶(mPEG1Cp).以三硝基苯磺酸(TNBS)法与CE法作对比测定了该修饰酶的平均氨基修饰度;以ELISA法检测mPEG1Cp的抗原性;用紫外吸收光谱和荧光发射光谱对mPEG1Cp进行了结构的测定分析.结果表明:Cp的mPEG1修饰产物经毛细管电泳检测为多组分体系,最大产物峰为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1的低修饰度修饰酶,其相对分子质量为40712～46044;该修饰酶抗原抗体结合能力完全消失,体内活性半衰期是原酶的1.6倍,同时酶活力保持在36.5%;紫外吸收光谱和荧光发射光谱分析表明:mPEG1Cp结构有轻度的改变. 展开更多
关键词 木瓜凝乳蛋白酶 单链单甲氧基聚乙二醇(mPEG1) 化学修饰 修饰产物 检测分析
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血清及脑组织中单胺类神经递质高效液相色谱电化学检测方法研究 被引量：12
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作者 阮国洪 郑力行 +1 位作者 吴强恩 周志俊 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期146-149,共4页
目的建立一种快速准确测定大鼠血清及脑组织中单胺类神经递质去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）含量的高效液相色谱-电化学检测方法.方法采用ODS柱,流动相为缓冲液（0.02mol/L柠檬酸三钠和0.05mol/L... 目的建立一种快速准确测定大鼠血清及脑组织中单胺类神经递质去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）含量的高效液相色谱-电化学检测方法.方法采用ODS柱,流动相为缓冲液（0.02mol/L柠檬酸三钠和0.05mol/L磷酸氢二钠）：甲醇=85：15的溶液,流速1.0ml/min.结果四种神经递质保留时间的RSD在0.29%～0.67%之间、峰面积RSD在0.09%～0.36%之间,重现性好.4种回收率在85.3%～95.4%之间,检测限NE为0.083ng/ml、E为0.51ng/ml、DA为0.046ng/ml、5-HT为0.078ng/ml,线性范围NE在1.0～100 ng/ml之间、E为5.0～80ng/m之间、DA为1.0～80ng/ml之间、5-HT为1.0～60ng/ml之间,相关系数在0.996～0.999之间.结论该方法为单胺类递质的神经毒理学、药理学等研究提供了一个简单灵敏、稳定可靠的方法. 展开更多
关键词 高效液相色谱 电化学检测 单胺类递质
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薄层层析-紫外分光光度法测定葡萄果皮中白藜芦醇及白藜芦醇苷 被引量：8
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作者 刘新荣 高丽萍 +2 位作者 夏涛 邹伟伟 陈恩昊 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期63-65,共3页
建立了葡萄果皮中反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷含量的薄层层析-紫外分光光度测定法。以甲醇提取目标组分,以高效硅胶GF254为固定相,甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(5∶4∶1)为展开剂,对反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷进行分离纯化,并用紫外分光... 建立了葡萄果皮中反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷含量的薄层层析-紫外分光光度测定法。以甲醇提取目标组分,以高效硅胶GF254为固定相,甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(5∶4∶1)为展开剂,对反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷进行分离纯化,并用紫外分光光度法进行定量,波长为306nm。结果表明,该方法测定反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷含量的线性关系良好,相关系数为0.9997;平均回收率为98.12%、97.23%;方法的精密度较高。并用该方法测定了酿酒红葡萄品种蛇龙珠不同生长时期的反式白藜芦醇和反式白藜芦醇苷含量。 展开更多
关键词 薄层层析-紫外分光光度法 葡萄果皮 反式白藜芦醇 反式白藜芦醇苷
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