发酵法制备蛹虫草多肽工艺优化及抗氧化活性研究 被引量：1

1

作者 辛婷 王钊 +1 位作者 李长滨 邹建 《食品与机械》 北大核心 2025年第4期148-154,共7页

[目的]利用发酵法制备蛹虫草多肽,并分析其抗氧化活性。[方法]从4种菌株中筛选出最适菌;在单因素试验基础上结合正交试验对最适菌发酵工艺条件进行优化;通过超滤对多肽液进行分离纯化,并分析蛹虫草多肽的抗氧化能力。[结果]枯草芽孢杆... [目的]利用发酵法制备蛹虫草多肽,并分析其抗氧化活性。[方法]从4种菌株中筛选出最适菌;在单因素试验基础上结合正交试验对最适菌发酵工艺条件进行优化;通过超滤对多肽液进行分离纯化,并分析蛹虫草多肽的抗氧化能力。[结果]枯草芽孢杆菌发酵蛹虫草蛋白制备多肽最佳工艺条件为蛹虫草蛋白添加量3%,发酵温度36℃,接种量4%,发酵时间24 h,此条件下多肽得率为67.95%。经超滤后,多肽液中相对分子质量<3000组分的抗氧化活性最好。[结论]采用枯草芽孢杆菌发酵制备蛹虫草抗氧化肽工艺可行。 展开更多

关键词 蛹虫草 发酵 抗氧化性 多肽 枯草芽孢杆菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

响应面法优化赤小豆多肽制备及体外降糖活性研究

2

作者 辛婷 索婷 +3 位作者 李长滨 王钊 许美娟 邹建 《食品与机械》 北大核心 2025年第8期180-187,共8页

[目的]利用响应面法优化赤小豆多肽制备工艺,并分析其体外降血糖活性。[方法]从3种蛋白酶中筛选最适酶,采用单因素及响应面试验优化最佳酶解工艺;将酶解多肽液进行超滤分离,并比较不同组分的降糖活性。[结果]最佳赤小豆多肽制备工艺条... [目的]利用响应面法优化赤小豆多肽制备工艺,并分析其体外降血糖活性。[方法]从3种蛋白酶中筛选最适酶,采用单因素及响应面试验优化最佳酶解工艺;将酶解多肽液进行超滤分离,并比较不同组分的降糖活性。[结果]最佳赤小豆多肽制备工艺条件为碱性蛋白酶添加量3 860 U/g、底物浓度2.0%、pH 8.0、酶解时间3 h、酶解温度60℃,此时多肽含量为135 mg/g。酶解多肽液经超滤分离,F1(相对分子质量<3 000)组分的体外降糖活性最高,10 mg/mL质量浓度下α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制率分别为79.1%,81.0%。[结论]采用碱性蛋白酶酶解制备的赤小豆多肽展现出显著的体外降血糖效果。 展开更多

关键词 赤小豆多肽 蛋白酶酶解 响应面优化 降糖活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

政策工具组合对家庭农场耕地生态保护采纳行为的影响

3

作者 周利平 辛婷 苏红 《沈阳农业大学学报》 北大核心 2025年第4期138-147,共10页

[目的]探究如何打好政策工具组合拳,助力家庭农场突破认知、资金和市场困境,进而破解农业生产发展与生态环境保护双赢难题。[方法]运用启发式模型进行理论分析,针对江西省378份家庭农场的研究数据,采用Ordered Probit模型,研究政府补贴... [目的]探究如何打好政策工具组合拳,助力家庭农场突破认知、资金和市场困境,进而破解农业生产发展与生态环境保护双赢难题。[方法]运用启发式模型进行理论分析,针对江西省378份家庭农场的研究数据,采用Ordered Probit模型,研究政府补贴、政府投资和政府监管等单一政策工具及其不同形式的政策组合对家庭农场耕地生态保护采纳行为的影响及其内在机制。[结果]不同政策工具组合对家庭农场耕地生态保护采纳行为影响显著,“补贴—投资”“补贴—监管”“投资—监管”及“补贴—投资—监管”等政策工具组合具有显著协同效应。并且,政策工具组合效应在农业信息化水平较高且融资能力较弱的家庭农场中更为突出。[结论]各地应加大政策工具支持力度,多管齐下打好政策组合拳,同时充分考虑家庭农场属性差异,实行精准化支持,以有效促进家庭农场耕地生态保护采纳行为。 展开更多

关键词 政策工具组合 家庭农场耕地生态保护采纳行为 政府补贴 政府投资 政府监管

在线阅读 下载PDF 职称材料

时代新人视域下劳动教育融入学生党建的育人新模式探索

4

作者 辛婷 余海燕 王志浩 《西南科技大学学报(哲学社会科学版)》 2025年第5期115-122,共8页

劳动教育是培育时代新人的必要途径,是实现高校学生立德成才的重要举措,也是实现五育并举的重要内容。本文以西南科技大学经济管理学院学生第五党支部为例,论述了时代新人视域下高校将劳动教育融入学生党建工作的必要性,阐明劳动教育融... 劳动教育是培育时代新人的必要途径,是实现高校学生立德成才的重要举措,也是实现五育并举的重要内容。本文以西南科技大学经济管理学院学生第五党支部为例,论述了时代新人视域下高校将劳动教育融入学生党建工作的必要性,阐明劳动教育融入学生党建的育人新模式:支部以劳动教育为总抓手,依托“以劳为基,辐射三环”的优秀工作法,探索出深耕“五育”的支部建设模式,创新提出“一核三环”,打造“三型七力”的党建育人新模式。该模式为各高校提高支部党建工作成效、推进高校学生党员高质量发展提供借鉴和参考建议。 展开更多

关键词 劳动教育 学生党建 时代新人 育人模式

在线阅读 下载PDF 职称材料

布鲁氏菌感染与宿主细胞程序性死亡博弈 被引量：1

5

作者 叶建新 冯宇 +8 位作者 李燕 许霄峰 郇喻 范学政 沈青春 鑫婷 蒋卉 张广智 丁家波 《微生物学通报》 北大核心 2025年第2期561-570,共10页

布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的一种重要人兽共患细菌病,目前呈全球流行态势。布病对人兽健康造成严重威胁,并给局部地区带来巨大的社会经济负担。布鲁氏菌侵入宿主体内并建立长期甚至终身感染,离不开其精巧的... 布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的一种重要人兽共患细菌病,目前呈全球流行态势。布病对人兽健康造成严重威胁,并给局部地区带来巨大的社会经济负担。布鲁氏菌侵入宿主体内并建立长期甚至终身感染,离不开其精巧的免疫逃逸机制和复杂的胞内复制机制。调控宿主细胞死亡,如细胞凋亡、焦亡和自噬等,是布鲁氏菌免疫逃逸机制的重要环节。因此,深入研究布鲁氏菌调控宿主细胞程序性死亡的方式及其作用,能够为深入解析布鲁氏菌致病机制、挖掘药物靶标提供有益的参考价值。基于此,本文总结了近些年关于布鲁氏菌感染与宿主细胞多种程序性死亡之间的精密调控及其之间的“对弈”进展。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 免疫逃避 程序性细胞死亡 凋亡 焦亡 自噬

原文传递

微生物菌群调控人畜共患结核病的研究进展

6

作者 许霄峰 张广智 +8 位作者 鑫婷 叶建新 张建伟 贾丽 钱佳豪 温贺飞 吴慧光 蒋卉 丁家波 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期91-96,共6页

目前,人畜共患结核病(zTB)仍是世界上最重要的细菌传染性疫病之一,严重威胁人和动物健康以及公共卫生安全。机体数量庞大的微生物菌群积极参与着机体的发育、免疫调控、代谢等。研究发现微生物菌群和zTB的发生、发展、治疗、疫苗免疫具... 目前,人畜共患结核病(zTB)仍是世界上最重要的细菌传染性疫病之一,严重威胁人和动物健康以及公共卫生安全。机体数量庞大的微生物菌群积极参与着机体的发育、免疫调控、代谢等。研究发现微生物菌群和zTB的发生、发展、治疗、疫苗免疫具有紧密的相关性,现已成为诸多领域中的研究热点。菌群对zTB进程的调控可通过诸多途径直接或间接地进行,如菌群稳态、代谢物及对免疫的调控等。基于此,论文综述了目前微生物菌群与zTB相关研究的最新进展,重点讨论了肠道菌群和肺部菌群与zTB的关联及调节机制,分析了肠-肺轴相互作用、菌群代谢产物对zTB的影响,探讨了通过调节宿主的菌群组成和功能对预防和辅助治疗结核病的潜在价值,旨在为zTB防控提供理论基础和借鉴。 展开更多

关键词 人畜共患结核病 肠道微生物菌群 肠-肺轴 益生菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒B438L蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：14

7

作者 刘雪婷 王召阳 +6 位作者 鑫婷 郭晓宇 姜一曈 崔帅 于海男 朱鸿飞 贾红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第3期991-1000,共10页

本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒(ASFV)B438L基因原核表达系统表达p49重组蛋白,并制备抗p49蛋白的多克隆抗体。根据ASFV Georgia 2007/1(GenBank登录号:FR682468.1)公布的基因序列合成B438L基因,并将其插入pET-28a(+)载体,构建pET-28a-B... 本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒(ASFV)B438L基因原核表达系统表达p49重组蛋白,并制备抗p49蛋白的多克隆抗体。根据ASFV Georgia 2007/1(GenBank登录号:FR682468.1)公布的基因序列合成B438L基因,并将其插入pET-28a(+)载体,构建pET-28a-B438L重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,在16℃经1 mmol/L IPTG诱导12 h,通过SDS-PAGE对重组蛋白表达形式进行分析;利用串联质谱技术鉴定重组蛋白是否正确表达;将纯化的p49重组蛋白免疫小鼠制备鼠源抗p49多克隆抗体,利用间接ELISA方法测定该多克隆抗体的效价,并以间接免疫荧光试验及Western blotting检测该多克隆抗体的特异性。结果显示,试验成功构建了pET-28a-B438L重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经诱导表达获得了p49重组蛋白,重组蛋白主要以包涵体形式表达,大小约为60 ku;串联质谱技术进一步证实该蛋白为p49。间接ELISA检测制备的鼠源抗p49多克隆抗体效价达1∶64000,间接免疫荧光试验及Western blotting结果表明制备的鼠源抗p49多克隆抗体能特异性识别p49蛋白。以上结果表明,该原核表达的ASFV p49重组蛋白具有良好的免疫原性,利用表达的p49重组蛋白制备的多克隆抗体具有较高的抗体效价和特异性,为进一步研究ASFV p49蛋白的结构与功能、研制相关的ASFV诊断试剂及疫苗提供了生物材料。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) B438L基因 p49重组蛋白 原核表达 多克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于重组酶聚合酶扩增技术的犬细小病毒快速检测方法的建立 被引量：10

8

作者 姜一曈 王昭华 +4 位作者 鑫婷 贾红 郭晓宇 朱鸿飞 侯绍华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期926-929,共4页

为建立一种快速、简便检测犬细小病毒(CPV)的方法,本研究基于CPV VP2基因的保守序列,设计合成引物,通过对反应条件的优化,建立了CPV的重组酶聚合酶(RPA)检测方法。该方法在38℃恒温反应15 min即可快速、特异性的检测出CPV。特异性试验... 为建立一种快速、简便检测犬细小病毒(CPV)的方法,本研究基于CPV VP2基因的保守序列,设计合成引物,通过对反应条件的优化,建立了CPV的重组酶聚合酶(RPA)检测方法。该方法在38℃恒温反应15 min即可快速、特异性的检测出CPV。特异性试验结果显示,除CPV (BJ-2b株、BJ-2c株)外,犬瘟热病毒、犬冠状病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒等检测均为阴性;敏感性试验结果显示,以重组质粒pEASY-CPV-VP2为模板,RPA的检测下限为1×10~1拷贝/μL,其敏感度比普通PCR方法高10倍。利用建立的RPA方法对疑似CPV感染的临床样品的阳性检出率为88%,高于普通PCR的检出率(82%)和胶体金的检出率(76%)。本研究建立的CPV RPA检测方法操作简单,反应灵敏,结果确实可靠,适用于CPV的快速检测。 展开更多

关键词 犬细小病毒 重组酶聚合酶扩增技术 快速检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

新的高致病性PRRSV毒株FZ16A的分子特征及其致病性的研究 被引量：3

9

作者 隋修锟 侯绍华 +7 位作者 林伟东 张珊 贾红 郭晓宇 袁维峰 姜一曈 鑫婷 朱鸿飞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1511-1521,共11页

为了掌握猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）分离株的遗传变异特点,从福建省某疑似猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）发病猪场采集病料并分离病原,采用RT-PCR、间接免疫荧光试验及基因测... 为了掌握猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）分离株的遗传变异特点,从福建省某疑似猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）发病猪场采集病料并分离病原,采用RT-PCR、间接免疫荧光试验及基因测序等方法将其鉴定为HP-PRRSV,命名为FZ16A株。对FZ16A株ORF5基因进行克隆和测序,并进行分子生物学研究。将分离毒株接种PRRSV抗原、抗体双阴性的60日龄仔猪,通过观察临床症状、病理解剖变化及其病理切片等指标初步探讨分离毒株的致病性。结果,FZ16A株是北美（NA）基因型高致病性PRRSV（HP-PRRSV）变异株。同源性分析显示,FZ16A株ORF5基因与北美株VR-2332核苷酸（氨基酸）序列的相似性为87.9%（85.1%）,与JXA1的相似性为98.8%（97%）,与欧洲典型菌株Lelystad病毒的相似性为63.3%（56.9%）。系统发育分析表明,FZ16A属于NA基因型,与其他高致病性PRRSV毒株具有相同的亚型。氨基酸序列分析表明,与VR-2332株相比,FZ16A在信号肽、跨膜区（TM）、初级中和表位（PNE）、非中性表位和N-糖基化位点方面有不同程度的变异。抗原性分析显示,FZ16A ORF5基因产物与JXA1具有相似的抗原性,抗原表位主要位于aa32-37、aa50-55、aa127-133、 aa136-142、aa147-156、aa159-171、aa174-185和aa193-198区域。致病性分析表明,该分离毒株感染猪后能引起体温升高、咳嗽、食欲下降等临床症状,但并未引起试验动物死亡。剖检结果显示,FZ16A分离株能引起试验动物肺部组织实变,淋巴结肿大。肺脏病理切片可见FZ16A感染组动物有明显的间质增生性肺炎,肺泡壁毛细血管扩张充血,肺泡壁增厚等变化。以上结果表明,本研究分离的FZ16A株是新的变异毒株,丰富了该地区的PRRSV基因数据库,并为该地区PRRSV分子流行病学研究及防控奠定了一定基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 ORF5基因 分子特征 致病性分析

原文传递

数字化转型背景下婴幼儿托育服务与管理专业人才培养体系优化研究

10

作者 辛婷 郝丽丽 《科教导刊》 2025年第30期133-135,共3页

文章以数字化转型为切入点,聚焦当前高职院校在育人目标定位、课程内容结构与实践教学支撑方面存在的突出问题,明确育人变革的现实动因。在此基础上,构建“三维协同”的目标机制、“岗课对接”的课程结构模式及“校政园”协同支撑的实... 文章以数字化转型为切入点,聚焦当前高职院校在育人目标定位、课程内容结构与实践教学支撑方面存在的突出问题,明确育人变革的现实动因。在此基础上,构建“三维协同”的目标机制、“岗课对接”的课程结构模式及“校政园”协同支撑的实践教学体系,探索可推广的高质量人才培养路径。旨在推动专业建设从结构优化向能力建构转向,为提升高职教育服务托育行业的能力提供理论参考与实践支撑。 展开更多

关键词 数字化转型 婴幼儿托育 高职教育 人才培养

在线阅读 下载PDF 职称材料

针对性护理在尿道狭窄患者递增扩张内切开微创治疗中的应用效果

11

作者 王璐 辛婷 张浩 《中国社区医师》 2025年第25期130-132,共3页

目的:分析针对性护理在尿道狭窄患者递增扩张内切开微创治疗中的应用效果。方法:选取2022年1月—2024年1月徐州新健康老年病医院收治的162例尿道狭窄患者作为观察对象,随机分为两组,各81例。对照组行常规护理,观察组行针对性护理。比较... 目的:分析针对性护理在尿道狭窄患者递增扩张内切开微创治疗中的应用效果。方法:选取2022年1月—2024年1月徐州新健康老年病医院收治的162例尿道狭窄患者作为观察对象,随机分为两组,各81例。对照组行常规护理,观察组行针对性护理。比较两组护理效果。结果:护理后,两组自我概念、自护责任感、自护技能、健康知识水平评分比护理前高,且观察组高于对照组(P<0.05)。观察组尿管拔除时间、术后首次下床活动时间比对照组早,住院时间比对照组短(P<0.001)。观察组护理总满意度高于对照组(P=0.043)。结论:针对性护理在尿道狭窄患者递增扩张内切开微创治疗中的应用效果较好,能够促进患者术后恢复,提高其自护能力、护理满意度。 展开更多

关键词 针对性护理 尿道狭窄 递增扩张内切开微创 康复进程

暂未订购

重组犬α6干扰素的酵母表达及其抗病毒活性评价 被引量：2

12

作者 宋天琪 侯绍华 +5 位作者 郭晓宇 鑫婷 姜一曈 袁维峰 朱鸿飞 贾红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期2144-2150,共7页

试验旨在构建犬α6干扰素毕赤酵母表达系统,并对其进行优化和筛选,以期获得高活性的重组犬α6干扰素(CaIFN-α6)。根据CaIFN-α6基因序列,按毕赤酵母菌密码子偏好性对CaIFN-α6全基因序列进行优化与合成,用XhoⅠ和NotⅠ双酶切将其连接... 试验旨在构建犬α6干扰素毕赤酵母表达系统,并对其进行优化和筛选,以期获得高活性的重组犬α6干扰素(CaIFN-α6)。根据CaIFN-α6基因序列,按毕赤酵母菌密码子偏好性对CaIFN-α6全基因序列进行优化与合成,用XhoⅠ和NotⅠ双酶切将其连接至载体pPICZαA中,构建pPICZαA-CaIFN-α6重组表达质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。提取质粒pPICZαA-CaIFN-α6并线性化,电转入酵母感受态细胞X33中制备重组菌。采用甲醇进行诱导表达,收集上清,超滤浓缩,最终获得纯化的重组CaIFN-α6。利用BCA法测得纯化后的CaIFN-α6蛋白浓度为1.5 mg/mL,Western blotting分析表明CaIFN-α6蛋白具有良好的反应原性,SDS-PAGE显示其纯度约在95%以上,MDCK/VSV法检测其效价为2.37×10^7 IU/mL,比活性为1.58×10^7 IU/mg。结果表明犬α6干扰素在毕赤酵母pPICZαA表达载体系统中成功表达,且具有较高的生物活性,为后期的犬病毒病的临床预防与治疗提供了良好的支撑。 展开更多

关键词 犬α6干扰素(CaIFN-α6) 真核表达 纯化 抗病毒活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗猪圆环病毒2型病毒样颗粒单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1

13

作者 侯强 侯绍华 +5 位作者 贾红 姜一曈 鑫婷 李明 陈青 朱鸿飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期325-329,共5页

为制备能够特异性识别猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP)的单克隆抗体(MAb),本研究利用杆状病毒表达系统分别制备了具有VLP结构的核衣壳蛋白(Cap)和去掉核定位信号肽的tCap蛋白,以前者为免疫原,后者为筛选抗原制备了一株杂交瘤细胞(1F... 为制备能够特异性识别猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP)的单克隆抗体(MAb),本研究利用杆状病毒表达系统分别制备了具有VLP结构的核衣壳蛋白(Cap)和去掉核定位信号肽的tCap蛋白,以前者为免疫原,后者为筛选抗原制备了一株杂交瘤细胞(1F6),通过western blot、间接免疫荧光和透射电镜对其生物学特性进行鉴定。结果显示,1F6 MAb与PCV2 VLP具有良好的特异性反应,同时能够特异性识别天然PCV2和线性结构的Cap蛋白。本研究制备的MAb为PCV2抗原表位的鉴定和PCV2 VLP定量方法的建立提供了工具。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 单克隆抗体 核衣壳蛋白 病毒样颗粒

在线阅读 下载PDF 职称材料

劳动教育在高校人才培养中的意义与功能探析 被引量：3

14

作者 辛婷 周凤生 《西南科技大学学报（哲学社会科学版）》 2021年第1期85-89,共5页

实现培养德智体美劳全面发展的时代新人的教育目标,高校劳动教育不可缺少。文章对劳动教育在高校人才中重要意义进行了系统阐述,并深刻分析高校劳动教育中蕴含的教育功能和价值,以期为高校实现为党育人、为国育才提供现实启鉴。

关键词 劳动教育 人才培养 功能探析

在线阅读 下载PDF 职称材料

发酵食品中产细菌素乳酸菌的筛选与鉴定 被引量：4

15

作者 辛婷 郭潇扬 +1 位作者 王钊 苏楠 《现代牧业》 2022年第2期7-13,共7页

旨在从发酵食品中分离、筛选出产细菌素的乳酸菌。将样品增菌培养,以沙门氏菌、志贺氏菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等5种致病菌为指示菌,利用双层琼脂扩散法检测发酵上清液的抑菌活性,并通过有机酸、过氧化氢排... 旨在从发酵食品中分离、筛选出产细菌素的乳酸菌。将样品增菌培养,以沙门氏菌、志贺氏菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等5种致病菌为指示菌,利用双层琼脂扩散法检测发酵上清液的抑菌活性,并通过有机酸、过氧化氢排除试验以及蛋白酶敏感试验确定抑菌物质。试验筛选到1株产细菌素乳酸菌A2,通过形态学观察以及生理生化试验,初步鉴定为植物乳杆菌。 展开更多

关键词 细菌素 乳酸菌 筛选 鉴定

在线阅读 下载PDF 职称材料

4种牛分枝杆菌特异性基因PCR检测方法的比较与评价

16

作者 辛凌翔 王豪杰 +6 位作者 刘燕 姚文生 胡云皓 张一帜 赵浩然 鑫婷 朱良全 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第12期55-61,共7页

牛分枝杆菌是严重危害养牛业的重要人兽共患病原微生物,PCR是检测该病原的有效手段之一。本研究通过筛选最佳的PCR检测方法,以期为临床监测牛分枝杆菌感染提供技术参考。针对牛分枝杆菌4种常见的特异性基因(16S rRNA、IS6110、IS1081和M... 牛分枝杆菌是严重危害养牛业的重要人兽共患病原微生物,PCR是检测该病原的有效手段之一。本研究通过筛选最佳的PCR检测方法,以期为临床监测牛分枝杆菌感染提供技术参考。针对牛分枝杆菌4种常见的特异性基因(16S rRNA、IS6110、IS1081和Mpb64)分别设计引物,通过温度梯度PCR法确定最适退火温度;采用牛分枝杆菌参考株核酸确定PCR最小检测限,同时运用牛分枝杆菌国内参考株、牛分枝杆菌国际参考株、禽分枝杆菌、胞内分枝杆菌、副结核分枝杆菌、羊种布鲁菌以及牛种布鲁菌进行特异性比较试验;最后运用人工模拟牛分枝杆菌感染组织样本(肺脏、淋巴结、奶样)比较不同PCR方法检测效果。4对引物以60℃为退火温度时均能检测分枝杆菌,其中IS6110、IS1081和Mpb64基因引物可以特异性检测牛分枝杆菌。IS6110和IS1081基因引物对牛分枝杆菌基因组的检测灵敏度最高,可达10^(-10) ng/μL;IS6110基因引物在肺脏和淋巴结中牛分枝杆菌检测灵敏度可达10~6 CFU/mL以上,而Mpb64基因引物对奶样中牛分枝杆菌的检测灵敏度可达10~2 CFU/mL。本研究筛选出相对适宜的牛分枝杆菌PCR检测方法,为牛结核病病原学检测和临床应用提供技术支持。 展开更多

关键词 牛分枝杆菌 病原 PCR 灵敏度 特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒MGF360-14L靶向MAVS抑制Ⅰ型干扰素的产生 被引量：4

17

作者 王洋 崔帅 +10 位作者 鑫婷 王西西 于海男 陈世钰 蒋亚君 高新桃 庞忠宝 姜一曈 郭晓宇 贾红 朱鸿飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期3272-3278,共7页

本研究旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)多基因家族成员MGF360-14L对Ⅰ型干扰素(IFN)的抑制作用及其作用机制。通过双荧光素酶试验检测MGF360-14L对线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)诱导的干扰素β(IFN-β)启动子活性... 本研究旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)多基因家族成员MGF360-14L对Ⅰ型干扰素(IFN)的抑制作用及其作用机制。通过双荧光素酶试验检测MGF360-14L对线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)诱导的干扰素β(IFN-β)启动子活性的影响,免疫共沉淀和激光共聚焦检测MGF360-14L与MAVS的互作关系,及Western blot分析MGF360-14L对MAVS和TRIM21诱导的TBK1和IRF3磷酸化的影响。结果表明,ASFV非结构蛋白MGF360-14L抑制MAVS诱导的IFN-β启动子活性。MGF360-14L能够与MAVS互作,并且对MAVS和TRIM21诱导的TBK1和IRF3磷酸化具有抑制作用。此外,当过表达MGF360-14L时,MGF360-14L蛋白与TRIM21竞争结合MAVS,抑制TRIM21对MAVS的泛素化作用,从而降低IFN-β的水平。综上所述,MGF360-14L可能通过竞争性结合MAVS,抑制TRIM21对MAVS的泛素化,从而下调Ⅰ型IFN的产生。研究结果为探究ASFV的免疫逃逸机制提供了新线索。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 Ⅰ型干扰素 线粒体抗病毒信号蛋白 泛素化 免疫逃逸

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同牛分枝杆菌特异性基因PCR方法的比较 被引量：4

18

作者 张春燕 秦玉明 +6 位作者 边增杰 徐中清 牛凯 许冠龙 丁家波 鑫婷 朱良全 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期782-791,共10页

【背景】牛结核病是我国二类动物疫病,世界动物卫生组织将其列为法定报告的动物疫病。牛主要通过患病牛呼吸道分泌物和咳嗽所产生的气溶胶感染;人则主要通过食用未经高温处理的病牛的肉或奶感染。因此,经过病原学PCR检测对疑似患病牛牛... 【背景】牛结核病是我国二类动物疫病,世界动物卫生组织将其列为法定报告的动物疫病。牛主要通过患病牛呼吸道分泌物和咳嗽所产生的气溶胶感染;人则主要通过食用未经高温处理的病牛的肉或奶感染。因此,经过病原学PCR检测对疑似患病牛牛奶或屠宰组织样品进行快速检验确诊,能够最大限度地减少奶牛养殖中乳品生产业的经济损失。【目的】研究并确定适宜的牛分枝杆菌PCR扩增引物及参数,为临床快速准确诊断牛结核病提供参考。【方法】对已报道的5对PCR引物,运用降落(touch down)PCR法确定适宜退火温度(Tm);运用梯度稀释的牛分枝杆菌C68001株(国内牛结核菌素生产用菌株)基因组DNA以及不同菌液含量的人工模拟临床样本(淋巴结、肺脏和牛奶),确定不同引物PCR方法的敏感性;同时以6种常见牛感染菌(牛种布鲁氏菌2308、羊种布鲁氏菌Rev.1、牛分枝杆菌C68001和AN5、禽分枝杆菌C68202、副结核分枝杆菌C68681和胞内分枝杆菌C68226)核酸样本,确定不同引物PCR方法的特异性。【结果】所有引物在53?63℃均含有目的条带,确定引物的最佳退火温度是60℃。在细菌核酸敏感性检验中,1号和3号引物的检测敏感性最高,达10?10 ng/μL;其次是2号和5号,达10?5 ng/μL。对于人工模拟感染样本,1号、3号和4号引物在淋巴结和肺脏中检测敏感性最高,其次是2号;而2号、3号、4号和5号引物对奶样检测敏感性最高。对于特异性检验,2号和5号引物特异性较好,可检测到明显的牛分枝杆菌特异性条带,对通常不引起牛结核病而只干扰免疫学诊断的禽分枝杆菌检测条带较微弱,而布鲁氏菌、副结核分枝杆菌和胞内分枝杆菌均无检测条带。【结论】2号引物及其反应参数的PCR方法敏感性、特异性良好,适合用于牛结核病的快速准确诊断。 展开更多

关键词 牛分枝杆菌 引物 PCR 敏感性 特异性

原文传递

牛肠道病毒北京株的分离鉴定及全基因组分析 被引量：4

19

作者 张姗 李晓轩 +4 位作者 侯绍华 鑫婷 林湛椰 袁万哲 孙继国 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期844-850,共7页

采用RT-PCR方法从北京某牛场有腹泻症状牛的粪便样品中检测到牛肠道病毒（bovine enterovirus,BEV）,分离出1株病毒并将其命名为BJ101。然后,通过电镜观察、全基因组序列测定和同源性分析,对该毒株进行了验证。结果,BJ101分离株在MDBK... 采用RT-PCR方法从北京某牛场有腹泻症状牛的粪便样品中检测到牛肠道病毒（bovine enterovirus,BEV）,分离出1株病毒并将其命名为BJ101。然后,通过电镜观察、全基因组序列测定和同源性分析,对该毒株进行了验证。结果,BJ101分离株在MDBK细胞上的TCID50为1×10^-6.42/0.1 m L,电镜观察到病毒颗粒直径为25～30 nm,无囊膜,呈典型的小RNA病毒粒子形态;BJ101株的基因组长度为7 409 bp,其中5′非编码区（UTR）长812 bp,3′UTR长72 bp,病毒基因组开放阅读框（ORF）全长6 525 bp。对全基因组序列进行比对分析显示,在5′UTR区、编码区和3′UTR区,BJ101分离株与BEV E2型毒株的核苷酸相似性最高。基于VP1基因的系统进化树表明,BJ101株是BEV E2型的成员。上述结果丰富了国内牛肠道病毒的基因库,为BEV的诊断及预防奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 牛肠道病毒 分离 基因组 比对分析

原文传递

非洲猪瘟病毒360-12L蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：6

20

作者 蒋亚君 陈世钰 +7 位作者 鑫婷 郭晓宇 王召阳 刘雪婷 崔帅 王洋 朱鸿飞 贾红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期352-360,共9页

【目的】获得抗原性好的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus)12L蛋白用于ASFV血清学诊断技术研究。【方法】根据GenBank ASFV参考序列(登录号:NC_044959.2)合成360-12L基因,并插入pET-28a(+)载体,构建原核表达质粒pET-28a-12L,将... 【目的】获得抗原性好的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus)12L蛋白用于ASFV血清学诊断技术研究。【方法】根据GenBank ASFV参考序列(登录号:NC_044959.2)合成360-12L基因,并插入pET-28a(+)载体,构建原核表达质粒pET-28a-12L,将经测序鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导培养,筛选最佳诱导温度,同时分析其可溶性。随后通过亲和层析纯化蛋白,并对所获得的12L重组蛋白进行SDS-PAGE分析。将获得的12L重组蛋白作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,以获得鼠抗ASFV 12L蛋白的多克隆抗体,通过间接ELISA方法测定所制备的多克隆抗体效价,并用间接免疫荧光试验进行验证。【结果】成功构建了ASFV 12L蛋白原核表达质粒,重组菌pET-28a-12L-BL21在37℃6 h时表达量较高,主要以包涵体形式表达,可在54.7 ku处出现明显条带。间接ELISA结果显示,制备的鼠抗ASFV 12L蛋白多克隆抗体效价>1∶512000,间接免疫荧光试验结果表明,所制备的鼠抗ASFV 12L蛋白多克隆抗体具有良好的特异性,可特异性识别12L重组蛋白。【结论】原核表达的12L重组蛋白具有良好的免疫原性,制备的鼠抗ASFV 12L蛋白的多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,为进一步研究12L蛋白的生物学功能、ASFV血清学诊断技术和疫苗研究提供生物材料。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) 原核表达 12L重组蛋白 多克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料