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C-myc标记肽对单链抗体与抗原结合活性的影响 被引量：1
1
作者 杨康鹃 孟繁平 +4 位作者 王玉祥 金桂花 范华英 M.Stassen m.de baets 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期369-371,共3页
目的　探讨在不同的免疫学检测方法中 ,与单链抗体相连的亲和标记肽对单链抗体与抗原结合活性的影响。方法　在制备“VH 连接链 VL”型结构抗乙酰胆碱受体单链抗体时 ,将c myc标记肽与单链抗体的VL 连接 ,应用先将抗c myc抗体固定单链... 目的　探讨在不同的免疫学检测方法中 ,与单链抗体相连的亲和标记肽对单链抗体与抗原结合活性的影响。方法　在制备“VH 连接链 VL”型结构抗乙酰胆碱受体单链抗体时 ,将c myc标记肽与单链抗体的VL 连接 ,应用先将抗c myc抗体固定单链抗体的固相放射免疫测定法、直接将单链抗体与乙酰胆碱受体结合的液相放射免疫测定法 ,分别测定单链抗体与乙酰胆碱受体的结合活性。结果　在固相放射免疫测定法中 ,单链抗体不能与乙酰胆碱受体结合 ;在液相放射免疫测定法中 ,单链抗体则能与乙酰胆碱受体结合。结论　在应用不同的免疫学检测方法中 ,与单链抗体相连的c myc标记肽可影响单链抗体与抗原的结合活性。 展开更多
关键词 单链抗体 标记肽 乙酰胆碱受体
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重症肌无力单链抗体基因的制备 被引量：6
2
作者 杨康鹃 孟繁平 +1 位作者 M.Stassen m.de baets 《延边大学医学学报》 CAS 2002年第1期1-4,共4页
[目的 ]构建抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体 .[方法 ]应用多聚酶链反应从抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区抗原结合片段扩增重链和轻链可变区基因 ,并克隆到载体噬粒 pHEN2 .将含有单链抗体基因的重组噬粒转化大肠杆菌DH5α ,分离... [目的 ]构建抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体 .[方法 ]应用多聚酶链反应从抗人乙酰胆碱受体主要免疫原区抗原结合片段扩增重链和轻链可变区基因 ,并克隆到载体噬粒 pHEN2 .将含有单链抗体基因的重组噬粒转化大肠杆菌DH5α ,分离提纯重组噬粒后再经酶切、琼脂糖凝胶电泳检查以确认单链抗体基因的正确性 .[结果 ]电泳检查发现了大小分别为 3 78bp ,3 3 9bp和 762bp的重链可变区、轻链可变区和单链抗体基因 ,且位置正确 .[结论 展开更多
关键词 重症肌无力 单链抗体基因 制备 胆碱能受体
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电鳐乙酰胆碱受体的分离和纯化 被引量：3
3
作者 杨康鹃 孟繁平 m.de baets 《延边大学医学学报》 CAS 2004年第1期5-8,共4页
[目的 ]分离和纯化具有活性的电鳐乙酰胆碱受体 .[方法 ]将电鳐电器官肌肉制成匀浆 ,细胞经裂解制备电鳐乙酰胆碱受体粗提液 .经眼镜蛇毒素偶联的Sepharose 4B层析柱亲和吸附 ,得到纯化的电鳐乙酰胆碱受体 .应用酶联免疫吸附试验检查纯... [目的 ]分离和纯化具有活性的电鳐乙酰胆碱受体 .[方法 ]将电鳐电器官肌肉制成匀浆 ,细胞经裂解制备电鳐乙酰胆碱受体粗提液 .经眼镜蛇毒素偶联的Sepharose 4B层析柱亲和吸附 ,得到纯化的电鳐乙酰胆碱受体 .应用酶联免疫吸附试验检查纯化的电鳐乙酰胆碱受体与抗乙酰胆碱受体抗体的结合活性 .[结果 ]分离和纯化的电鳐乙酰胆碱受体能与抗乙酰胆碱受体抗体结合 ,且结合活性高 .[结论 ]从电鳐电器官中分离和纯化的乙酰胆碱受体活性高、特异性强 ,可作为抗原在酶联免疫吸附试验中用于检查抗乙酰胆碱受体抗体 . 展开更多
关键词 重症肌无力 受体 胆碱能 电鳐属 乙酰胆碱
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抗乙酰胆碱受体单链抗体在大肠杆菌中的表达 被引量：2
4
作者 杨康鹃 孟繁平 +1 位作者 M.Stassen m.de baets 《延边大学医学学报》 CAS 2002年第2期79-82,共4页
[目的 ]使构建的抗人乙酰胆碱受体单链抗体基因在大肠杆菌中表达 .[方法 ]将含有单链抗体基因的载体 pHEN2 (含有 pelB引导肽和c myc)转化大肠杆菌HB 2 15 1,在细菌外周质中表达单链抗体 .应用鼠抗c myc单链抗体的斑点杂交试验检查细菌... [目的 ]使构建的抗人乙酰胆碱受体单链抗体基因在大肠杆菌中表达 .[方法 ]将含有单链抗体基因的载体 pHEN2 (含有 pelB引导肽和c myc)转化大肠杆菌HB 2 15 1,在细菌外周质中表达单链抗体 .应用鼠抗c myc单链抗体的斑点杂交试验检查细菌外周质裂解物中单链抗体的表达 .[结果 ]单链抗体表达在细菌外周质中 ,培养液上清及对照大肠杆菌外周质和培养液上清均未发现单链抗体 .[结论 ]已成功地在大肠杆菌中表达了抗人乙酰胆碱受体单链抗体 . 展开更多
关键词 抗乙酰胆碱受体 单链抗体 大肠杆菌 基因表达 重症肌无力
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从TE671细胞株提取人乙酰胆碱受体 被引量：1
5
作者 杨康鹃 孟繁平 m.de baets 《延边大学医学学报》 CAS 2003年第3期157-161,共5页
目的 ]分离提取具有活性的人乙酰胆碱受体 .[方法 ]用摇动培养瓶大量培养表达人乙酰胆碱受体的TE 671细胞株 ,细胞经裂解制备人乙酰胆碱受体提取液 .应用放射免疫测定法检测提取的人乙酰胆碱受体与抗人乙酰胆碱受体抗体的结合活性 .[结... 目的 ]分离提取具有活性的人乙酰胆碱受体 .[方法 ]用摇动培养瓶大量培养表达人乙酰胆碱受体的TE 671细胞株 ,细胞经裂解制备人乙酰胆碱受体提取液 .应用放射免疫测定法检测提取的人乙酰胆碱受体与抗人乙酰胆碱受体抗体的结合活性 .[结果 ]提取的人乙酰胆碱受体能与抗人乙酰胆碱受体抗体结合 ,且结合活性很高 ,含量为 1 8× 10 10 个乙酰胆碱受体分子 / 10 0 μL提取液 .[结论 ]从TE 671细胞株提取的人乙酰胆碱受体具有与相应抗体结合的功能 。 展开更多
关键词 重症肌无力 受体 胆碱能 细胞株
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重症肌无力治疗性单价IgG抗体基因的构建
6
作者 李钟燮 孟繁平 +6 位作者 孙昌元 李芳芳 金权鑫 李红花 李英信 M.Stassen m.de baets 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1003-1005,共3页
目的:构建一株对重症肌无力(MG)具有特异性免疫治疗作用的单价IgG类抗体基因。方法:应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体IgG637的重(H)链第322位氨基酸进行K322A突变,获得的突变型抗体IgG637/K322A基因再进行H链互补决定... 目的:构建一株对重症肌无力(MG)具有特异性免疫治疗作用的单价IgG类抗体基因。方法:应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体IgG637的重(H)链第322位氨基酸进行K322A突变,获得的突变型抗体IgG637/K322A基因再进行H链互补决定区3(CDR3)缺失突变,获得突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP基因。经转化大肠杆菌XL1-Blue进行增殖后,转染哺乳类细胞CHO-k1进行表达,表达产物经ELIAS检测与补体C3的结合活性,经RIA检测与特异性抗原人AChR的结合活性。突变抗体H链再经杵(T366Y)臼(Y407T)突变,以利于异源H链的配对。结果:突变型抗体IgG637/K322A丧失了与补体C3结合的能力,突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP丧失了与人AChR结合的能力。测序证实已经获得了预想的杵臼突变序列。结论:已经成功的制备了无补体激活能力的单价IgG类抗AChR抗体基因。 展开更多
关键词 重症肌无力 单价抗体 定点突变 免疫球蛋白G
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人源性抗乙酰胆碱受体自身抗体的构建及特异性鉴定
7
作者 杨康鹃 孟繁平 +5 位作者 金桂花 李芳芳 孙昌元 金权鑫 M.Stassen m.de baets 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期88-90,共3页
目的用人抗乙酰胆碱受体(AchR)自身抗体的抗原结合片段(Fab)构建完整的抗人AchR自身抗体,为重症肌无力(MG)的实验研究提供人源性抗体材料。方法应用PCR技术从分离自MG患者胸腺的Fab637扩增重链Fd片段基因和轻链基因,并克隆至含有免疫球... 目的用人抗乙酰胆碱受体(AchR)自身抗体的抗原结合片段(Fab)构建完整的抗人AchR自身抗体,为重症肌无力(MG)的实验研究提供人源性抗体材料。方法应用PCR技术从分离自MG患者胸腺的Fab637扩增重链Fd片段基因和轻链基因,并克隆至含有免疫球蛋白(IgG1)基因的载体pIgG1上,构建人源性抗AchR自身抗体哺乳类细胞表达的重组载体pIgG1-637。将pIgG1-637转染CHO-k1细胞,细胞培养上清液经斑点杂交试验检测抗体的表达,以放射免疫测定法测定表达的抗体与特异性人AchR结合的活性。结果细胞培养24h后能检测到抗体的分泌,表达的抗体能特异性地与抗原结合,且结合活性很高。结论已成功地构建了具有与抗原特异性结合的人源性IgG1类抗人AchR自身抗体IgG1-637。 展开更多
关键词 乙酰胆碱受体 重症肌无力 自身抗体
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抗乙酰胆碱受体单链抗体对致病性抗体结合活性的抑制作用
8
作者 杨康鹃 张庆镐 +1 位作者 孟繁平 m.de baets 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期235-237,244,共4页
为探讨单链抗体 (ScFv )对重症肌无力 (MG )的特异性免疫治疗作用 ,从分离自MG患者胸腺的抗乙酰胆碱受体(AchR )抗原结合片段Fab6 37构建单链抗体ScFv6 37。应用放射免疫测定法测定了ScFv6 37与刺激抗原人AchR的特异性结合活性以及与相... 为探讨单链抗体 (ScFv )对重症肌无力 (MG )的特异性免疫治疗作用 ,从分离自MG患者胸腺的抗乙酰胆碱受体(AchR )抗原结合片段Fab6 37构建单链抗体ScFv6 37。应用放射免疫测定法测定了ScFv6 37与刺激抗原人AchR的特异性结合活性以及与相关抗原大鼠AchR和电鳐AchR的交叉反应 ,应用竞争性ELISA测定抑制致病性抗AchR完整抗体IgG6 37与人AchR结合活性。结果发现ScFv6 37只能与人AchR结合 ,不能与大鼠和电鳐的AchR结合。对IgG6 37与人AchR结合的抑制率为 17 5 %～ 32 9%。表明单链抗体对AchR具有一定的“保护”作用。 展开更多
关键词 重症肌无力 单链抗体 乙酰胆碱受体
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重症肌无力致病性自身抗体的人工构建 被引量：2
9
作者 杨康鹃 孟繁平 +5 位作者 魏晶 李强 李红花 李英信 M.Stassen m.de baets 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期717-719,共3页
目的构建一株具有致病性的人抗乙酰胆碱受体(AchR)自身抗体,用于诱导猴实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型。方法将分离自重症肌无力(MG)患者胸腺的抗AchR抗体的抗原结合片段(Fab637)克隆至含有免疫球蛋白(IgG1)基因的载体pIgG1,构... 目的构建一株具有致病性的人抗乙酰胆碱受体(AchR)自身抗体,用于诱导猴实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型。方法将分离自重症肌无力(MG)患者胸腺的抗AchR抗体的抗原结合片段(Fab637)克隆至含有免疫球蛋白(IgG1)基因的载体pIgG1,构建能在哺乳类细胞表达完整IgG1类抗AchR抗体(IgG1-637)的重组表达载体(pIgG1-637),将pIgG1-637转染CHO-k1细胞系,筛选出稳定表达IgG1-637的细胞株扩大培养。将纯化的IgG1-637注射5只恒河猴,通过检查猴肌肉收缩强度和复合肌肉运动电位(CMAP),判定猴EAMG发病情况,从而鉴定IgG1-637的致病性。结果20μmol／L MSX(L-methionine sulfoxmine)选择的CHO-k1细胞表达最高水平的抗体IgG1-637,表达产量为17．4μg/ml。3只猴(分别接受1．7、1．7和5．0mg／kg的注射剂量)在注射IgG1-637后1周内出现肌肉收缩无力临床症状,并表现出CMAP减弱现象。结论由Fab637构建的完整的IgG1-637是一株致病性抗AchR抗体,可在猴诱导出EAMG。 展开更多
关键词 乙酰胆碱受体 自身抗体 重症肌无力
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