H13亚型禽流感病毒TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

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作者 田杰 蒋文明 +8 位作者 彭程 杨吉喆 李金平 侯广宇 周婉婷 李晓奇 刘朔 赵宇军 刘华雷 《中国家禽》 北大核心 2025年第12期80-87,共8页

为建立用于H13亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)快速检测的TaqMan探针实时荧光RT-PCR方法,试验基于GISAID数据库公布的624株H13亚型AIV血凝素(HA)基因的保守结构域,设计特异性引物和TaqMan探针,对引物终浓度和探针终浓度配比... 为建立用于H13亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)快速检测的TaqMan探针实时荧光RT-PCR方法,试验基于GISAID数据库公布的624株H13亚型AIV血凝素(HA)基因的保守结构域,设计特异性引物和TaqMan探针,对引物终浓度和探针终浓度配比及退火温度、延伸时间等扩增条件进行优化,确定最优反应条件,从而建立针对H13亚型AIV的TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测方法,并对该方法的灵敏度、特异性及重复性进行验证。结果显示:引物浓度和探针浓度分别是0.5μmol/L和0.25μmol/L,退火温度和延伸时间分别是60℃30 s时扩增效果最佳;该方法仅对H13亚型AIV有特异性扩增,与其他亚型AIV、传染性法氏囊病病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性支气炎病毒和新城疫病毒等均无交叉反应;其检测限为6.27拷贝/μL;批内和批间试验的变异系数均低于2%;野鸟临床粪便样品检测结果与病毒分离鉴定符合率为100%。研究表明,建立的H13亚型AIV的TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,为H13亚型AIV的快速诊断和监测及科学防控提供技术支持。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H13亚型 实时荧光RT-PCR 野鸟

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鸭瘟病毒强毒株与弱毒株双重PCR鉴别检测方法的建立与应用

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作者 周婉婷 崔雪志 +9 位作者 毛秋艳 汪建华 李玉峰 李金平 刘朔 彭程 杨吉喆 侯广宇 刘华雷 蒋文明 《中国动物检疫》 2025年第8期108-114,共7页

鸭瘟是一种由鸭瘟病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病,对养鸭业造成了严重威胁。目前,该病主要依靠鸭瘟弱毒活疫苗进行防控。鸭瘟病毒属于疱疹病毒科,其基因组为双链DNA,具有复杂的结构和多种变异类型。为建立一种能够区分鸭瘟病... 鸭瘟是一种由鸭瘟病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病,对养鸭业造成了严重威胁。目前,该病主要依靠鸭瘟弱毒活疫苗进行防控。鸭瘟病毒属于疱疹病毒科,其基因组为双链DNA,具有复杂的结构和多种变异类型。为建立一种能够区分鸭瘟病毒强毒株与弱毒株的双重PCR鉴别检测方法,以提高临床诊断的准确性和效率,通过分析鸭瘟病毒基因组序列,设计针对UL2和LORF5基因的特异性引物,建立了双重PCR方法。该方法具有良好的特异性,能够准确区分鸭瘟病毒强毒株与弱毒株,同时对其他禽类病原无交叉反应:最低可检测到10拷贝的鸭瘟病毒DNA,表现出较高的灵敏度。使用建立的方法对2019-2024年收集的临床疑似鸭瘟病料进行检测,发现经典强毒株集中流行于2019-2022年,而变异强毒株在2023-2024年更为常见,表明鸭瘟病毒优势流行株可能正在发生变化。综上,本研究建立的双重PCR鉴别检测方法为鸭瘟病毒的快速、准确检测提供了技术支持,对鸭瘟防控及流行病学调查具有重要意义。 展开更多

关键词 鸭瘟病毒 UL2基因 LORF5基因 双重PCR 强毒株 变异株

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山西省圣天湖天鹅H5N8禽流感疫情与当前H5亚型病毒谱系分析 被引量：7

3

作者 蒋文明 田文霞 +6 位作者 侯广宇 李金平 程隆 王素春 彭程 王仲兵 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第6期14-17,43,共5页

2016年12月,山西省芮城县圣天湖景区的18只白天鹅陆续出现异常死亡。经病毒分离、基因组测序与分析,确定此次疫情的病原为H5N8亚型高致病性禽流感病毒。该毒株与同期在欧洲流行的H5N8病毒同源性很高,其HA和NA基因同源性分别为99.1%~99.6... 2016年12月,山西省芮城县圣天湖景区的18只白天鹅陆续出现异常死亡。经病毒分离、基因组测序与分析,确定此次疫情的病原为H5N8亚型高致病性禽流感病毒。该毒株与同期在欧洲流行的H5N8病毒同源性很高,其HA和NA基因同源性分别为99.1%~99.6%和98.7%~99.6%;同期在欧洲流行的H5N8病毒的HA基因主要从2010—2013年在韩国、保加利亚、泰国、越南流行的病毒进化而来。基因组序列分析表明,2016年流行的H5N8病毒是一种新重组病毒。病毒的不断变异进化,造成了全球H5亚型禽流感流行的复杂性,增加了对其防控的难度,疫苗也需要随之更新换代。因此,建议加大疫苗的研发投入力度,改进水禽养殖模式,提高水禽免疫覆盖率和合格率,从而降低其感染和排毒的风险。 展开更多

关键词 禽流感 野鸟 H5 防控

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2017年2月我国东部四省份家禽H7N9流感横断面调查 被引量：7

4

作者 王灏 李金平 +10 位作者 侯广宇 王素春 彭程 庄青叶 刘朔 于建敏 王楷宬 邱源 费荣梅 陈继明 蒋文明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第6期18-21,共4页

为了解现阶段我国家禽中H7N9病毒感染状况,2017年2月在我国东部4个省份的123个场点进行了H7N9流感流行病学调查。结果显示:H7N9病毒的样品总阳性率为2.48%,其中活禽市场的阳性率与往年监测数据相比出现上升;阳性场点范围较大,涵盖了养... 为了解现阶段我国家禽中H7N9病毒感染状况,2017年2月在我国东部4个省份的123个场点进行了H7N9流感流行病学调查。结果显示:H7N9病毒的样品总阳性率为2.48%,其中活禽市场的阳性率与往年监测数据相比出现上升;阳性场点范围较大,涵盖了养殖场、屠宰场和市场等多个区域;鸭类样品中的H7N9病毒阳性率高于往年,为1.89%。HA序列分析结果显示,此次调查中检出的H7N9病毒均为低致病性病毒。这些数据为今后全面了解我国家禽中的H7N9病毒感染现状和制定有关防控措施提供了技术支持。 展开更多

关键词 家禽 流感病毒 H7N9 流行病学 横断面调查

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H7N9亚型流感候选疫苗株的构建及免疫效力试验 被引量：4

5

作者 蒋文明 侯广宇 +5 位作者 李金平 王素春 袁万哲 王灏 程善菊 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第6期86-89,共4页

近期的禽流感主动监测结果表明,我国部分H7N9亚型流感病毒已突变为高致病性毒株。为预防H7N9流感在禽群中引发大流行,本研究利用反向遗传技术,以鸡胚适应毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,分别以H7N9亚型流感弱毒A/chicken/SH... 近期的禽流感主动监测结果表明,我国部分H7N9亚型流感病毒已突变为高致病性毒株。为预防H7N9流感在禽群中引发大流行,本研究利用反向遗传技术,以鸡胚适应毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,分别以H7N9亚型流感弱毒A/chicken/SH/3277/2016(S3277)和强毒A/chicken/SD/GDRZ/2017(GDRZ)的基因组为模板,扩增HA及NA基因,并对GDRZ HA基因进行修饰,去除裂解位点处的多个碱性氨基酸,使其获得低致病性流感病毒的分子特征,最终成功构建了H7N9流感疫苗候选株r S3277和r GDRZ。将两株病毒与自然分离的H7N3弱毒株A/duck/ZJ/1208/2009(ZJ1208)同时作为候选疫苗株,进行免疫效力试验。结果表明,r S3277、r GDRZ和ZJ1208灭活疫苗免疫SPF鸡21 d后,针对GDRZ的平均HI抗体效价分别达到7.2log2、10.1 log2和6.2 log2。免疫攻毒保护试验结果表明,上述3种灭活疫苗均可100%保护SPF鸡免受H7N9强毒攻击。本研究所构建的r GDRZ重组候选疫苗株可为H7N9高致病性流感的防控提供支持。 展开更多

关键词 流感病毒 H7N9 强毒 反向遗传 疫苗

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全面取代活禽市场的必要性和可行性分析 被引量：4

6

作者 王素春 蒋文明 +3 位作者 侯广宇 李金平 刘朔 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第6期38-40,共3页

活禽市场在禽流感的发生和传播中发挥着病毒汇集、增殖、杂交、变异、储存和传播的作用,严重威胁着我国养禽业健康持续发展和公共卫生安全,与我国禽流感防控和养禽业转型升级方向相悖。随着冰鲜禽肉上市和日益普及的电子商务等业务的发... 活禽市场在禽流感的发生和传播中发挥着病毒汇集、增殖、杂交、变异、储存和传播的作用,严重威胁着我国养禽业健康持续发展和公共卫生安全,与我国禽流感防控和养禽业转型升级方向相悖。随着冰鲜禽肉上市和日益普及的电子商务等业务的发展,在全国范围内,使其全面取代传统的活禽市场成为可能,并可以让民众通过更好的途径消费新鲜美味的禽肉。全面取代活禽市场,禽流感防控事半功倍。 展开更多

关键词 禽流感 活禽市场 电子商务 疫病防控 公共卫生

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鉴别H5亚型两种分支禽流感病毒双重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用 被引量：4

7

作者 彭程 刘朔 +7 位作者 张琳 李金平 于晓慧 侯广宇 王静静 李阳 蒋文明 刘华雷 《中国动物检疫》 CAS 2021年第1期100-105,共6页

为准确区分H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支的毒株,通过对GenBank和GISAID数据库中发表的以及本实验室保存的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行比对,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H5亚型禽流感病毒不同分支毒株的实时... 为准确区分H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支的毒株,通过对GenBank和GISAID数据库中发表的以及本实验室保存的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行比对,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H5亚型禽流感病毒不同分支毒株的实时荧光RT-PCR方法,并对该方法的反应体系和反应参数进行了优化,同时开展了特异性和敏感性试验,以及临床应用检测。结果显示:该方法具有良好的特异性,与其他亚型禽流感病毒及常见禽病病毒无交叉反应;对H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支毒株的检测灵敏度分别为495.0 copies/μL和22.3 copies/μL;100份临床家禽拭子禽流感病毒检测结果与常规RT-PCR和病毒分离检测结果一致,符合率为100%。结果表明,该方法特异、敏感、准确、耗时少,同时还可区分不同分支,可应用于H5亚型禽流感病毒的准确、快速检测。 展开更多

关键词 H5亚型禽流感病毒 分支 双重实时荧光RT-PCR 敏感性 特异性

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2019—2020年9株H9N2亚型禽流感病毒抗原性分析及候选疫苗株筛选 被引量：3

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作者 蒋文明 张琳 +5 位作者 彭程 刘朔 尹馨 李金平 侯广宇 刘华雷 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第11期72-78,共7页

为了解近年来H9N2亚型禽流感病毒的分子特征和抗原变异情况,本研究对选自2019—2020年的9株H9N2亚型禽流感病毒的血凝素(HA)基因序列进行分析,进一步利用交叉血凝抑制试验和中和试验对抗原性进行分析,并以此筛选出候选疫苗株,开展免疫... 为了解近年来H9N2亚型禽流感病毒的分子特征和抗原变异情况,本研究对选自2019—2020年的9株H9N2亚型禽流感病毒的血凝素(HA)基因序列进行分析,进一步利用交叉血凝抑制试验和中和试验对抗原性进行分析,并以此筛选出候选疫苗株,开展免疫原性和攻毒保护试验研究。9株病毒HA基因核苷酸同源性为91.2%~98.9%,表明这些毒株之间HA基因分化明显。9株病毒HA蛋白裂解位点序列均为RSSR,符合低致病性禽流感病毒分子特征。所有9株病毒HA均含有7个潜在的糖基化位点。9株病毒HA关键受体结合位点的234位氨基酸由谷氨酰胺变为亮氨酸,提示这些毒株具有结合α2,6-Sialidase受体的能力。交叉血凝抑制试验显示各毒株之间出现最大64倍的抗原性差异,交叉中和试验显示各毒株之间出现最大1024倍的抗原性差异。根据中和试验结果,利用AntigenMap制作抗原图谱,可以看出9株病毒可以分为2个主要抗原群。筛选的Y2432毒株制备灭活疫苗免疫鸡群后21 d,针对同源毒株平均血凝抑制(HI)抗体效价达到13.6 log_2,使用同源毒株和异源毒株进行攻毒,保护率均为100%。Y2432免疫SPF鸡,14 d即可产生高水平抗体,最高可达到14.4 log_2,且抗体可维持140 d以上。筛选的候选疫苗株免疫原性和免疫保护效果较好,为预防H9N2亚型禽流感的流行提供了重要技术储备。 展开更多

关键词 禽流感 H9N2 抗原性 疫苗

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鄱阳湖与青海湖地区野鸟H9N2亚型禽流感病毒的生物学特性 被引量：3

9

作者 蒋文明 侯广宇 +3 位作者 彭程 王素春 李金平 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第6期10-13,共4页

为了解我国野鸟中H9N2亚型禽流感病毒的分布与特征,2015—2016年对鄱阳湖与青海湖地区野鸟中的H9N2病毒进行监测,结果共分离到12株H9N2亚型禽流感病毒。对分离的病毒进行HA和NA基因序列测定、受体分析和SPF鸡、Balb/c小鼠的感染性试验,... 为了解我国野鸟中H9N2亚型禽流感病毒的分布与特征,2015—2016年对鄱阳湖与青海湖地区野鸟中的H9N2病毒进行监测,结果共分离到12株H9N2亚型禽流感病毒。对分离的病毒进行HA和NA基因序列测定、受体分析和SPF鸡、Balb/c小鼠的感染性试验,结果显示:12个分离株的HA裂解位点基序均为PSRSSR/GLF,符合低致病性禽流感病毒的分子特征;HA蛋白受体结合位点处第226位氨基酸残基为亮氨酸(L),具有结合人样流感病毒受体的分子特征;受体结合试验表明,分离毒株既能结合禽样受体,也能结合人样受体;SPF鸡攻毒试验表明,分离株为低致病性毒株;Balb/c小鼠的感染性试验表明,分离株只在小鼠的上呼吸道鼻甲和肺中有限复制,未见明显临床症状。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H9N2 野鸟感染性

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咳尔康颗粒对肺腺癌细胞A549的体外抗肿瘤作用 被引量：2

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作者 侯广玉 李孟全 +3 位作者 赵鹏程 王一成 朱立双 杜书迪 《医药导报》 CAS 北大核心 2019年第1期27-32,共6页

目的制备咳尔康颗粒并观察其对人肺腺癌细胞A549的体外抗肿瘤作用。方法将处方药材经水提取,减压浓缩,用淀粉和糊精为辅料制备咳尔康颗粒。以黄芩苷为指认成分,采用高效液相色谱(HPLC)法建立咳尔康颗粒质量控制标准。以不同浓度的咳尔... 目的制备咳尔康颗粒并观察其对人肺腺癌细胞A549的体外抗肿瘤作用。方法将处方药材经水提取,减压浓缩,用淀粉和糊精为辅料制备咳尔康颗粒。以黄芩苷为指认成分,采用高效液相色谱(HPLC)法建立咳尔康颗粒质量控制标准。以不同浓度的咳尔康颗粒溶液作用于肿瘤细胞A549,光学显微镜观察细胞形态,4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色后荧光显微镜观察细胞核固缩的凋亡过程,噻唑蓝(MTT)实验测定细胞增殖,实时定量聚合酶链反应(PCR)测定c-myc、c-fos、bax/bcl-2和caspase-9基因mRNA表达。结果制得咳尔康颗粒并建立HPLC质量控制标准,线性回归系数(r)为0.9929,平均加样回收率为98.03%,RSD为2.571%,指认成分黄芩苷含量为0.3498‰。咳尔康颗粒作用于肿瘤细胞A549后,细胞形态出现体积缩小,与周围的细胞脱离,核质浓缩,核膜破碎,最终形成凋亡小体;细胞增殖受到剂量依赖性抑制,半数抑制浓度(IC50)为74.07 g·L^(-1);原癌基因c-myc和c-fos的mRNA表达量降低,凋亡基因bax/bcl-2和caspase-9的mRNA表达量增加。结论咳尔康颗粒具有体外抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 咳尔康颗粒 色谱法 高效液相 A549细胞系 抗肿瘤作用

暂未订购

H7亚型流感病毒通用及区分强弱毒RT-PCR方法的建立 被引量：1

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作者 蒋文明 彭程 +4 位作者 李金平 王素春 侯广宇 袁万哲 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第6期90-93,共4页

为建立可以区分H7亚型流感病毒强弱毒的方法,根椐Genbank和GISAID中H7病毒的HA基因序列,设计2条特异性引物,建立了扩增H7病毒HA裂解位点区域的通用RT-PCR方法。在此基础上,在裂解位点处设计1条引物,建立了可以区分H7强弱毒的RT-PCR方法... 为建立可以区分H7亚型流感病毒强弱毒的方法,根椐Genbank和GISAID中H7病毒的HA基因序列,设计2条特异性引物,建立了扩增H7病毒HA裂解位点区域的通用RT-PCR方法。在此基础上,在裂解位点处设计1条引物,建立了可以区分H7强弱毒的RT-PCR方法。该方法对弱毒株可以扩增出约337 bp的片段,对强毒株可以扩增出约349 bp和227 bp的片段,对其他常见亚型流感病毒的RT-PCR扩增均为阴性。敏感性试验结果表明,该RT-PCR方法的检测下限为1 fg的H7N9病毒模板。该方法对10份实验室已鉴定好的H7N9病毒进行对比验证,两者的符合率为100%。试验结果表明,该方法具有特异、快速、敏感、准确的特点,可用于H7亚型流感病毒的快速检测,同时还可区分强弱毒,对H7N9病毒,尤其是高致病性病毒的早期诊断和有效防控可提供有效技术支撑。 展开更多

关键词 流感病毒 H7N9 RT-PCR 强毒株

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常减压装置腐蚀检查与分析 被引量：5

12

作者 张亮 侯广宇 张弛 《石化技术》 CAS 2022年第10期155-156,共2页

为全面掌握常减压装置腐蚀情况和规律,在装置停工期间开展了腐蚀调查,对设备及管线进行全面腐蚀检查和定点测厚,对每台设备腐蚀形态和情况进行分析总结,查找腐蚀隐患点,为腐蚀工作开展和设备大检修提出建议。

关键词 常减压装置 腐蚀 检查 机理

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大学生职业生涯规划应该从正确认识自我开始 被引量：1

13

作者 赵洪涛 侯广玉 孙凯 《科技资讯》 2020年第34期228-230,共3页

大学生职业生涯规划可以帮助大学生高效率地安排大学生活、圆满地完成大学学业及促进就业,实现人生价值。大学生职业生涯规划的重要组成部分之一是正确认识自我,一个科学的、合理的职业生涯规划应该从正确认识自我开始,其可以促进大学... 大学生职业生涯规划可以帮助大学生高效率地安排大学生活、圆满地完成大学学业及促进就业,实现人生价值。大学生职业生涯规划的重要组成部分之一是正确认识自我,一个科学的、合理的职业生涯规划应该从正确认识自我开始,其可以促进大学生看清自己,开发自己,充分发挥自己的潜能。该文就如何正确认识自我进行了多角度的剖析。 展开更多

关键词 大学生 职业生涯规划 正确 认识自我

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第2.3.2.1分支H5亚型禽流感变异株候选疫苗株的构建及免疫效力试验

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作者 蒋文明 李金平 +5 位作者 侯广宇 王素春 袁万哲 孙文博 彭程 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第9期79-82,共4页

第2.3.2.1分支H5N1亚型禽流感病毒(AIV)抗原性目前已发生显著变异。为应对变异株可能引发的流行,利用反向遗传技术,以鸡胚适应毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以H5N1亚型AIV A/duck/JS/ZJ/2016(H5N1)(ZJ,第2.3.2.1d分支)、A... 第2.3.2.1分支H5N1亚型禽流感病毒(AIV)抗原性目前已发生显著变异。为应对变异株可能引发的流行,利用反向遗传技术,以鸡胚适应毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以H5N1亚型AIV A/duck/JS/ZJ/2016(H5N1)(ZJ,第2.3.2.1d分支)、A/Chicken/SD/YT/2015(H5N1)(YT,第2.3.2.1e分支)的基因组为模板,扩增其HA及NA基因,并对HA基因进行修饰,去除裂解位点处的多个碱性氨基酸,使其获得低致病性AIV的分子特征,成功构建了第2.3.2.1分支H5N1亚型AIV疫苗候选株rZJ和rYT。抗原性分析显示,rZJ和rYT与Re-6疫苗株之间的抗原性已有显著差异。免疫效力试验表明,rZJ和rYT重组灭活疫苗免疫21 d的平均HI抗体效价分别达到8.8 log2和8.9 log2,说明重组疫苗具备良好的免疫原性。免疫攻毒保护试验表明,rZJ和rYT重组灭活疫苗可以提供SPF鸡抵抗同源H5N1病毒100%的保护,而针对第2.3.2.1分支的Re-6疫苗仅能提供大约40%和30%的保护。利用反向遗传技术构建的rZJ和rYT重组候选疫苗株为该分支病毒的防控提供了技术支持。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H5 第2.3.2.1分支 变异株 反向遗传 疫苗

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鉴别H7N9流感病毒强毒和弱毒实时荧光RT-PCR方法的建立

15

作者 蒋文明 李阳 +4 位作者 李金平 袁丽萍 侯广宇 程善菊 刘华雷 《中国动物检疫》 CAS 2019年第4期58-63,共6页

为建立可以区分H7N9流感病毒强毒株和弱毒株的方法,通过比对Gen Bank和GISAID中H7N9流感病毒的HA基因序列以及本实验室保存的病毒序列,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H7N9流感病毒强弱毒株的实时荧光RT-PCR方法,同时对该方法的... 为建立可以区分H7N9流感病毒强毒株和弱毒株的方法,通过比对Gen Bank和GISAID中H7N9流感病毒的HA基因序列以及本实验室保存的病毒序列,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H7N9流感病毒强弱毒株的实时荧光RT-PCR方法,同时对该方法的反应体系和反应参数进行优化,并开展特异性和敏感性试验以及临床应用试验。特异性试验显示,该方法具有良好的特异性,对其他常见亚型的禽流感病毒和其他禽病病毒检测均为阴性。敏感性试验显示,该方法对H7N9流感强毒和弱毒HA基因的检测下限分别为0.004 fg和0.1 fg RNA模板,高于两种商品化试剂盒的灵敏度。利用该方法对40株经实验室分离鉴定的H7N9流感病毒进行对比验证,发现检出率和符合率均为100%。结果表明,该方法具有特异、敏感、准确的优点,可用于H7N9流感病毒的快速检测,同时还可区分强弱毒株,对H7N9流感病毒,尤其是高致病性流感病毒的早期诊断和有效防控具有重要意义。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H7N9 实时荧光RT-PCR 强毒株 弱毒株

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我国家禽H7N9和H9N2亚型流感流行病学调查 被引量：20

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作者 陆勤勤 刘朔 +6 位作者 蒋文明 侯广宇 李金平 庄青叶 王素春 费荣梅 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2018年第11期1-4,共4页

为调查我国家禽H7N9和H9N2亚型流感流行状况,2018年3—5月,在我国11个省份67个场点,随机采集4 792份咽喉/泄殖腔拭子样品,通过RT-PCR进行流感病毒检测。结果显示:所检测的4 792份样品中,H7N9亚型阳性率为0,H9N2亚型阳性率为25.21%;场点... 为调查我国家禽H7N9和H9N2亚型流感流行状况,2018年3—5月,在我国11个省份67个场点,随机采集4 792份咽喉/泄殖腔拭子样品,通过RT-PCR进行流感病毒检测。结果显示:所检测的4 792份样品中,H7N9亚型阳性率为0,H9N2亚型阳性率为25.21%;场点阳性率为80.60%,其中活禽市场场点阳性率(96.30%)显著高于其他场所(15.38%)。与历年流行病学调查数据相比,2018上半年H9N2亚型病毒阳性率显著高于往年同期检测值(P<0.05),达到近年来最高点。病毒核酸序列分析显示,检出的H9N2亚型病毒属于2007年以来我国H9亚型主要流行分支,即h9.4.2.5分支。本次调查结果表明,我国实施的H7N9疫苗免疫政策有效遏制了H7N9亚型流感的蔓延,而H9N2亚型流感病毒在我国持续流行多年,感染范围广,感染率有增高趋势,需要采取新的防控策略。 展开更多

关键词 禽流感 H7N9 免疫政策 H9N2 流行病学

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H3亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：3

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作者 毛秋艳 周淑宁 +9 位作者 刘朔 彭程 尹馨 张雅馨 周婉婷 李金平 侯广宇 蒋文明 宋厚辉 刘华雷 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1137-1146,共10页

H3亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)感染宿主广泛,具备跨物种传播的能力,不但造成了家禽的发病,还导致了多起人感染病例,具有重要的公共卫生意义。因此,有必要建立一种快速灵敏的H3亚型AIV的检测方法。本研究参考了GenBank近... H3亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)感染宿主广泛,具备跨物种传播的能力,不但造成了家禽的发病,还导致了多起人感染病例,具有重要的公共卫生意义。因此,有必要建立一种快速灵敏的H3亚型AIV的检测方法。本研究参考了GenBank近年来公开的H3亚型AIV HA基因序列,在保守区域设计一对特异性引物和Taq Man探针。通过对反应条件的优化,分别以cRNA阳性标准品和病毒核酸标准品为模板绘制标准曲线,建立了针对H3亚型AIV的荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、重复性进行评估。进一步使用实验室攻毒鸡组织样品和临床拭子样品对该方法进行了验证。结果表明,该方法特异性强,与其他亚型AIV和常见禽类病原体均无交叉反应;检测下限分别为1.0×10^(2) copies·μL^(-1)和10^(2) EID 50·0.1 mL^(-1),灵敏度与常规RT-PCR相比提高了10倍;组内和组间变异系数均小于1.5%,重复性较好。动物攻毒临床试验样品和临床拭子样品检测结果显示,该检测方法敏感性高于普通RT-PCR方法,与病毒分离鉴定结果一致,符合率为100%,可用于临床检测。综上,本研究建立的H3亚型AIV荧光定量RT-PCR检测方法具备特异、快速、灵敏等特点,为H3亚型AIV的快速诊断和监测及防控提供一定的技术支持。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H3亚型 荧光定量 监测

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2020—2021年山东省部分地区鸭圆环病毒全基因组遗传进化及特征分析 被引量：4

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作者 梁少波 张琳 +9 位作者 李阳 于晓慧 李金平 刘朔 彭程 王静静 侯广宇 刘华雷 格日勒图 蒋文明 《中国家禽》 北大核心 2021年第12期33-37,共5页

为了解山东地区鸭圆环病毒(DuCV)流行状况及基因组特征,对山东济宁、潍坊等地区的病鸭病料进行DuCV检测及鉴定,DuCV阳性样品进行全基因组扩增,并进行遗传进化和基因组特征分析。结果显示:成功获得了14株DuCV的全基因组序列,全长为1 993~... 为了解山东地区鸭圆环病毒(DuCV)流行状况及基因组特征,对山东济宁、潍坊等地区的病鸭病料进行DuCV检测及鉴定,DuCV阳性样品进行全基因组扩增,并进行遗传进化和基因组特征分析。结果显示:成功获得了14株DuCV的全基因组序列,全长为1 993~1 995 bp,遗传进化显示这些毒株与德国株AY22855处同一进化分支,均属于DuCV基因Ⅰ型,但不同年份之间已形成独立小分支且彼此之间同源性不高;Cap和ORF3蛋白氨基酸序列分析发现,2020年与2021年监测毒株Cap蛋白氨基酸同源性为96.7%,提示病毒变异速度和程度较高,增加了防控的难度。研究为山东地区鸭圆环病毒病的防控提供了重要数据支撑。 展开更多

关键词 鸭圆环病毒 全基因组 序列分析

原文传递

心肌梗死大鼠模型制备方法的研究 被引量：7

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作者 贾茹 祝慧慧 +5 位作者 侯广玉 孙健 王莹 栾海蓉 李爽 魏韬 《中国继续医学教育》 2019年第7期159-161,共3页

目的探索建立急性心肌梗死大鼠模型制备方法,进而可以明确在急性心肌梗死模型中发生显著变化的指标,挖掘具有临床诊断价值的新的生物标志物,探讨其在临床诊断方面应用的前景以及与急性心肌梗死发生机制的关系。方法在未对大鼠进行气管... 目的探索建立急性心肌梗死大鼠模型制备方法,进而可以明确在急性心肌梗死模型中发生显著变化的指标,挖掘具有临床诊断价值的新的生物标志物,探讨其在临床诊断方面应用的前景以及与急性心肌梗死发生机制的关系。方法在未对大鼠进行气管插管术的情况下,借助RM6240系列生理信号采集处理系统和HX-300动物呼吸机辅助,通过结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死大鼠模型。结果结扎冠状动脉左前降支后,左室前壁心肌组织变苍白,收缩减弱。并结合心电图R波振幅增加,ST段升高等表明急性心肌梗死大鼠模型建立成功。结论此次研究无需对大鼠进行气管插管术,成功建立了急性心肌梗死模型,提高了模型制备的成功率和存活率,为该疾病的诊断和治疗提供可信的基础数据。 展开更多

关键词 心肌梗死 动物模型 人类疾病 生物标志物 大鼠 生理信号采集处理系统

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H7N9亚型禽流感疫苗研究进展 被引量：2

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作者 梁少波 张琳 +8 位作者 朱俊峰 刘朔 彭程 尹馨 李金平 侯广宇 刘华雷 格日勒图 蒋文明 《中国动物检疫》 CAS 2021年第12期77-81,共5页

自2013年以来,H7N9亚型流感对我国养禽业和人类公共卫生造成了极大影响。疫苗作为重要防疫工具,在H7N9亚型流感防控中起到了至关重要的作用。目前我国批准使用的H7N9禽流感全病毒灭活疫苗安全性高、免疫效果好,已在国内广泛应用。随着对... 自2013年以来,H7N9亚型流感对我国养禽业和人类公共卫生造成了极大影响。疫苗作为重要防疫工具,在H7N9亚型流感防控中起到了至关重要的作用。目前我国批准使用的H7N9禽流感全病毒灭活疫苗安全性高、免疫效果好,已在国内广泛应用。随着对H7N9亚型流感病毒研究的不断深入,研究人员对核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗及通用流感疫苗等新型疫苗进行了探索和尝试,并取得了一定的进展,为我国禽流感疫苗的开发与应用夯实了技术基础。本文对各类型H7N9亚型禽流感疫苗的研发情况以及优点和应用情况进行了综述,以期为更好地防控禽H7N9亚型流感提供帮助。 展开更多

关键词 H7N9 全病毒灭活疫苗 核酸疫苗 亚单位疫苗 病毒样颗粒疫苗 通用流感疫苗

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