目的:探究多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(C)-binding protein 2,PCBP2]如何通过调节铁死亡参与大别班达病毒(Dabie Banda virus,DBV)感染后的致病过程及其作用机制。方法:以人单核细胞系THP-1为模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测DBV...目的:探究多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(C)-binding protein 2,PCBP2]如何通过调节铁死亡参与大别班达病毒(Dabie Banda virus,DBV)感染后的致病过程及其作用机制。方法:以人单核细胞系THP-1为模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测DBV感染的THP-1细胞中PCBP2的mRNA及蛋白表达水平。通过透射电镜观察病毒感染下的线粒体结构变化,在THP-1细胞中构建了慢病毒介导的PCBP2过表达和敲低稳转细胞系。FerroOrange荧光探针检测Fe^(2+)水平,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(2,7-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测铁死亡相关溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达,以评估PCBP2调控对铁死亡的影响。使用铁死亡诱导剂(RSL3、erastin)和抑制剂(Fer-1、Lip-1)处理细胞,qRT-PCR和免疫荧光检测病毒复制水平变化,探索PCBP2是否可以通过调控铁死亡影响DBV复制。结果:在DBV感染的细胞模型中,PCBP2的mRNA和蛋白表达水平显著下调,DBV感染诱导典型铁死亡特征(线粒体嵴减少、肿胀)。通过qRT-PCR和Western blot验证,PCBP2敲低和过表达的THP-1细胞系构建成功,PCBP2敲低下调了铁死亡相关基因SLC7A11和GPX4的表达,导致ROS和Fe^(2+)水平升高;相反,PCBP2过表达使得SLC7A11和GPX4的表达水平升高,ROS和Fe^(2+)的水平降低。半数组织培养感染剂量与蛋白水平的检测进一步证实:铁死亡诱导剂可部分抵消PCBP2过表达促病毒复制的效应,铁死亡抑制剂可部分逆转PCBP2敲低抑制病毒复制的效应。结论:研究发现PCBP2可以通过维持SLC7A11/GPX4系统功能抑制铁死亡,从而限制DBV复制。这不仅阐明了PCBP2在DBV感染中的调控作用,为发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytope-nia syndrome,SFTS)的发病机制提供了新见解,同时靶向PCBP2-铁死亡通路可能成为SFTS治疗的潜在策略,为抗病毒药物的研发提供新思路。展开更多
目的观察大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)治疗儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)不良反应的发生情况,并分析影响甲氨蝶呤(MTX)排泄延迟发生的因素。方法回顾性分析2017年1月至2020年12月广西壮族自治区人民医院儿科收治的74例ALL患儿的临床资料,参照...目的观察大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)治疗儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)不良反应的发生情况,并分析影响甲氨蝶呤(MTX)排泄延迟发生的因素。方法回顾性分析2017年1月至2020年12月广西壮族自治区人民医院儿科收治的74例ALL患儿的临床资料,参照中国儿童肿瘤协作组急性淋巴细胞白血病2015(CCCG-ALL-2015)方案进行321例次HD-MTX化疗。以HD-MTX治疗44 h后血液MTX浓度>1.0μmol/L,或HD-MTX治疗68 h后血液MTX浓度>0.3μmol/L定义为MTX排泄延迟。根据美国卫生及公共服务部的常见不良事件评价标准5.0(NCI-CTCAE v5.0)对不良事件进行分级,以≥Ⅱ级的不良反应界定为HD-MTX化疗相关的、具有临床意义的不良反应。分析不良反应发生情况与危险度分层、免疫分型的关联性。分析影响HD-MTX治疗后44 h、68 h MTX排泄延迟发生的因素。结果74例ALL患儿中男40例(54.05%),女34例(45.95%);年龄1~14岁,中位年龄4岁。危险度为低危73例次(22.74%),中危217例次(67.60%),高危31例次(9.66%)。免疫分型为B系304例次(94.70%),T系17例次(5.30%)。融合基因类型为BCR/ABL1型34例次(10.59%),ETV6/RUNX1型42例次(13.08%),其他类型13例次(4.05%),阴性232例次(72.27%)。ALL患儿接受HD-MTX化疗后Ⅱ~Ⅳ级不良反应以骨髓抑制最为常见(62.62%),随后为胃肠道反应(包括腹泻和便秘,31.78%)和口腔黏膜炎(30.53%)。B系和T系ALL患儿HD-MTX治疗后不良反应发生情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同危险度分层ALL患儿行HD-MTX治疗后骨髓抑制、感染、口腔黏膜炎和胃肠道反应发生情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。低危ALL患儿肝损害发生率显著低于中危ALL患儿(P<0.05),中危ALL患儿和高危ALL患儿的肝损害发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,年龄>7~14岁[OR(95%CI)=13.022(1.396~121.436),P=0.024]和融合基因类型为ETV6/RUNX1型[OR(95%CI)=5.863(1.641~20.948),P=0.006]是促进44 h MTX排泄延迟发生的独立危险因素。结论HD-MTX治疗儿童ALL的不良反应以骨髓抑制、胃肠道反应和口腔黏膜炎为主,年龄>7~14岁、融合基因类型为ETV6/RUNX1型是促进44 h MTX排泄延迟发生的独立危险因素。展开更多
文摘目的:探究多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(C)-binding protein 2,PCBP2]如何通过调节铁死亡参与大别班达病毒(Dabie Banda virus,DBV)感染后的致病过程及其作用机制。方法:以人单核细胞系THP-1为模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测DBV感染的THP-1细胞中PCBP2的mRNA及蛋白表达水平。通过透射电镜观察病毒感染下的线粒体结构变化,在THP-1细胞中构建了慢病毒介导的PCBP2过表达和敲低稳转细胞系。FerroOrange荧光探针检测Fe^(2+)水平,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(2,7-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测铁死亡相关溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达,以评估PCBP2调控对铁死亡的影响。使用铁死亡诱导剂(RSL3、erastin)和抑制剂(Fer-1、Lip-1)处理细胞,qRT-PCR和免疫荧光检测病毒复制水平变化,探索PCBP2是否可以通过调控铁死亡影响DBV复制。结果:在DBV感染的细胞模型中,PCBP2的mRNA和蛋白表达水平显著下调,DBV感染诱导典型铁死亡特征(线粒体嵴减少、肿胀)。通过qRT-PCR和Western blot验证,PCBP2敲低和过表达的THP-1细胞系构建成功,PCBP2敲低下调了铁死亡相关基因SLC7A11和GPX4的表达,导致ROS和Fe^(2+)水平升高;相反,PCBP2过表达使得SLC7A11和GPX4的表达水平升高,ROS和Fe^(2+)的水平降低。半数组织培养感染剂量与蛋白水平的检测进一步证实:铁死亡诱导剂可部分抵消PCBP2过表达促病毒复制的效应,铁死亡抑制剂可部分逆转PCBP2敲低抑制病毒复制的效应。结论:研究发现PCBP2可以通过维持SLC7A11/GPX4系统功能抑制铁死亡,从而限制DBV复制。这不仅阐明了PCBP2在DBV感染中的调控作用,为发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytope-nia syndrome,SFTS)的发病机制提供了新见解,同时靶向PCBP2-铁死亡通路可能成为SFTS治疗的潜在策略,为抗病毒药物的研发提供新思路。
文摘目的观察大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)治疗儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)不良反应的发生情况,并分析影响甲氨蝶呤(MTX)排泄延迟发生的因素。方法回顾性分析2017年1月至2020年12月广西壮族自治区人民医院儿科收治的74例ALL患儿的临床资料,参照中国儿童肿瘤协作组急性淋巴细胞白血病2015(CCCG-ALL-2015)方案进行321例次HD-MTX化疗。以HD-MTX治疗44 h后血液MTX浓度>1.0μmol/L,或HD-MTX治疗68 h后血液MTX浓度>0.3μmol/L定义为MTX排泄延迟。根据美国卫生及公共服务部的常见不良事件评价标准5.0(NCI-CTCAE v5.0)对不良事件进行分级,以≥Ⅱ级的不良反应界定为HD-MTX化疗相关的、具有临床意义的不良反应。分析不良反应发生情况与危险度分层、免疫分型的关联性。分析影响HD-MTX治疗后44 h、68 h MTX排泄延迟发生的因素。结果74例ALL患儿中男40例(54.05%),女34例(45.95%);年龄1~14岁,中位年龄4岁。危险度为低危73例次(22.74%),中危217例次(67.60%),高危31例次(9.66%)。免疫分型为B系304例次(94.70%),T系17例次(5.30%)。融合基因类型为BCR/ABL1型34例次(10.59%),ETV6/RUNX1型42例次(13.08%),其他类型13例次(4.05%),阴性232例次(72.27%)。ALL患儿接受HD-MTX化疗后Ⅱ~Ⅳ级不良反应以骨髓抑制最为常见(62.62%),随后为胃肠道反应(包括腹泻和便秘,31.78%)和口腔黏膜炎(30.53%)。B系和T系ALL患儿HD-MTX治疗后不良反应发生情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同危险度分层ALL患儿行HD-MTX治疗后骨髓抑制、感染、口腔黏膜炎和胃肠道反应发生情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。低危ALL患儿肝损害发生率显著低于中危ALL患儿(P<0.05),中危ALL患儿和高危ALL患儿的肝损害发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,年龄>7~14岁[OR(95%CI)=13.022(1.396~121.436),P=0.024]和融合基因类型为ETV6/RUNX1型[OR(95%CI)=5.863(1.641~20.948),P=0.006]是促进44 h MTX排泄延迟发生的独立危险因素。结论HD-MTX治疗儿童ALL的不良反应以骨髓抑制、胃肠道反应和口腔黏膜炎为主,年龄>7~14岁、融合基因类型为ETV6/RUNX1型是促进44 h MTX排泄延迟发生的独立危险因素。
