目的观察铁过载对人肝癌Huh7.5细胞活性的影响及机制。方法用(50、100、200)μmol/L枸橼酸铁铵(FAC)处理Huh7.5细胞,铁离子荧光探针Phen Green FL标记结合荧光显微镜检测细胞铁载量。MTT法检测铁过载细胞的增殖活性,实时定量PCR检测铁...目的观察铁过载对人肝癌Huh7.5细胞活性的影响及机制。方法用(50、100、200)μmol/L枸橼酸铁铵(FAC)处理Huh7.5细胞,铁离子荧光探针Phen Green FL标记结合荧光显微镜检测细胞铁载量。MTT法检测铁过载细胞的增殖活性,实时定量PCR检测铁过载细胞运铁蛋白受体1(TfR1)、TfR2、二价金属离子转运体1(DMT1)和膜铁转运蛋白1(FPN1)的mRNA水平,Western blot法检测TfR1、TfR2、DMT1和FPN 1蛋白水平,二氯二氢荧光素乙酰乙酸酯(DCFH-DA)染色结合流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;在FAC处理细胞以及FAC联合400μmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理后,采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果细胞铁载量随FAC增加呈浓度依赖性上升;FAC处理细胞TfR1、TfR2和DMT1 mRNA和蛋白水平显著下调,FPN1 mRNA和蛋白水平显著上调;ROS水平随FAC浓度增加显著升高,细胞增殖活性随FAC浓度增加显著下降;FAC处理细胞的凋亡率均显著高于对照组,而向FAC处理细胞加入抗氧化剂NAC后,细胞凋亡率显著下降。结论铁过载抑制Huh7.5细胞增殖活性并促进细胞凋亡,其作用机制可能与氧化应激途径有关。展开更多
