目的:探讨下调CDl33基因的表达对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:将合成的CDl33小干扰核糖核酸分子(si RNA)转染至肝癌SMMC7721细胞并检测转染效率;分别以无转染与转染随机si RNA序列的SMMC7721细胞为空白对照和阴性对照,观察CDl33 si ...目的:探讨下调CDl33基因的表达对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:将合成的CDl33小干扰核糖核酸分子(si RNA)转染至肝癌SMMC7721细胞并检测转染效率;分别以无转染与转染随机si RNA序列的SMMC7721细胞为空白对照和阴性对照,观察CDl33 si RNA转染后CDl33基因沉默效果,以及SMMC7721细胞主要生物学行为的变化。结果:转染24 h后,转染效率可达到(80.8±9.1)%;与空白对照组比较,CDl33 si RNA转染后的SMMC7721细胞CD133 m RNA及蛋白表达量分别降至空白对照组的10%与35%、细胞增殖活性明显降低、细胞凋亡率明显增加(41.3%vs.25.3%)并出现明显的S期阻滞,集落形成能力明显降低(均P<0.05)。阴性对照组与空白对照组各指标无统计学差异(均P>0.05)。结论:CDl33在肝癌细胞中可能起了癌基因作用,下调其表达能抑制肝癌的恶性生物学行为。展开更多
目的构建具有免疫学活性的抗人甲胎蛋白单链抗体ScFv(single chain fragment of variety region,ScFv),为进一步的研究奠定实验基础。方法采用RT-PCR技术,从分泌抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增mAb的VH、VL基因,并进一步将其组装成...目的构建具有免疫学活性的抗人甲胎蛋白单链抗体ScFv(single chain fragment of variety region,ScFv),为进一步的研究奠定实验基础。方法采用RT-PCR技术,从分泌抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增mAb的VH、VL基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL型的ScFv片段。将ScFv片段亚克隆至原核分泌型表达载体pUC19,将pUC19-ScFv纯化质粒转染大肠杆菌BL21并用IPTG诱导表达ScFv蛋白。用SDS-PAGE方法检测ScFv的表达,采用ELISA检测ScFv的亲和活性。结果大肠杆菌BL21可被诱导表达ScFv蛋白。SDS-PAGE法证实ScFv蛋白在细胞包涵体有表达,大小约24 kD。ELISA检测表明,ScFv蛋白经能与重组人AFP纯化抗原结合,并具有抑制亲本单抗与其结合的能力。结论成功构建抗人AFP的ScFv表达载体,并能有效表达出具有免疫学活性的ScFv蛋白。展开更多
文摘目的:探讨下调CDl33基因的表达对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:将合成的CDl33小干扰核糖核酸分子(si RNA)转染至肝癌SMMC7721细胞并检测转染效率;分别以无转染与转染随机si RNA序列的SMMC7721细胞为空白对照和阴性对照,观察CDl33 si RNA转染后CDl33基因沉默效果,以及SMMC7721细胞主要生物学行为的变化。结果:转染24 h后,转染效率可达到(80.8±9.1)%;与空白对照组比较,CDl33 si RNA转染后的SMMC7721细胞CD133 m RNA及蛋白表达量分别降至空白对照组的10%与35%、细胞增殖活性明显降低、细胞凋亡率明显增加(41.3%vs.25.3%)并出现明显的S期阻滞,集落形成能力明显降低(均P<0.05)。阴性对照组与空白对照组各指标无统计学差异(均P>0.05)。结论:CDl33在肝癌细胞中可能起了癌基因作用,下调其表达能抑制肝癌的恶性生物学行为。
文摘目的构建具有免疫学活性的抗人甲胎蛋白单链抗体ScFv(single chain fragment of variety region,ScFv),为进一步的研究奠定实验基础。方法采用RT-PCR技术,从分泌抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增mAb的VH、VL基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL型的ScFv片段。将ScFv片段亚克隆至原核分泌型表达载体pUC19,将pUC19-ScFv纯化质粒转染大肠杆菌BL21并用IPTG诱导表达ScFv蛋白。用SDS-PAGE方法检测ScFv的表达,采用ELISA检测ScFv的亲和活性。结果大肠杆菌BL21可被诱导表达ScFv蛋白。SDS-PAGE法证实ScFv蛋白在细胞包涵体有表达,大小约24 kD。ELISA检测表明,ScFv蛋白经能与重组人AFP纯化抗原结合,并具有抑制亲本单抗与其结合的能力。结论成功构建抗人AFP的ScFv表达载体,并能有效表达出具有免疫学活性的ScFv蛋白。
