文摘目的:观察化瘀祛痰方(Huayu-Qutan formula,HYQT)含药血清对油酸诱导的HepG2细胞脂质损伤及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的影响,探讨HYQT防治脂代谢紊乱的可能机制。方法:以不同终浓度的油酸诱导HepG2细胞,CCK8法、油红O染色和ELISA法筛选油酸诱导及HYQT含药血清干预的最佳浓度及时间。将HepG2细胞分为对照(control)组、模型(model)组、HYQT组、毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg;ERS激动剂)组和Tg+HYQT组。油红O染色观察细胞脂质沉积情况;ELISA法检测细胞甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量变化;透射电镜观察细胞内质网结构变化;RT-qPCR和Wes全自动蛋白定量分析系统检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regula⁃tory element binding protein 1c,SREBP1c)、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl coenzyme A carboxylase 1,ACC1)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和硬脂酰辅酶A去饱和酶l(stearoyl coenzyme A desaturase 1,SCD1)的mRNA和蛋白表达情况。结果:1000μmol/L油酸诱导HepG2细胞脂质沉积效果明显,10%含药血清作用48 h作为后续实验的相对最佳浓度和时间。与control组比较,model组胞浆中橘红色脂滴形成明显增多,内质网扩张,发生ERS,细胞核固缩;TG和FFA含量明显增多(P<0.01);GRP78、SREBP1c、ACC1、FAS和SCD1 mRNA及蛋白表达量显著增高(P<0.01);与model组比较,HYQT含药血清干预后细胞内橘红色脂滴明显减少,内质网形态基本恢复正常,TG和FFA含量明显减少(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01);加入Tg后细胞内橘红色脂滴形成更多,内质网扩张程度更明显,内质网形态迥异,大小不一,呈空泡状改变,部分可见融合成簇现象,TG和FFA含量增多(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量增高(P<0.01);与Tg组比较,Tg+HYQT组细胞内橘红色脂滴减少,内质网扩张程度减轻,空泡体积减小和数量减少;TG和FFA含量明显减少(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论:HYQT含药血清可以减轻油酸诱导的HepG2细胞脂质损伤,其机制可能与抑制ERS介导的脂肪酸从头合成有关。
