摘要
提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部分TK基因 )的可用于同源重组的左臂片段 ( L )和右臂片段 ( R) ,L包括部分 UL 2 5、全部 UL 2 4、部分 TK,R包括部分 TK及部分U L2 2 ,L 和 R的拼接片段中 TK基因内部缺失 2 70个核苷酸。将 L 片段和 R片段克隆于 p Bluescript M13-载体上 ,获得p SKL R;再将绿色荧光蛋白载体 p EGFP- C1上含 GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入 p SKL R的 L 片段和 R片段之间构成转移载体 p SKL KG;又将猪瘟病毒 1.2 3 kb的 E2 ( CSFV- E2 )基因片段插入 p SKL RG的多克隆位点的 Bg1 与 Pst 之间获得转移载体 p SKL
PRV Bartha-K 61 strain genome DNA was extracted and two pairs of primers were synthesized according PRV Kaplan strain nucleotide sequence published on genbank, one pairs of the primers used to amplify the left recombinant fragment (L) of 1.167 bp containing the partial UL25, the whole UL24 and partial TK, the other to amplity the right recombinant fragment (R) of 2.083 bp containing the partial TK and partial UL 22. The left and right fragments were cloned into pBluescript M13-to obtain the transfer vector pSKLR, EGFP gene from pEGEFP-C1 was inserted into pSKLR between L and R, CSFV-E2 gene from PCDNA3E2ST was then inserted into the resulting transfer Vector pSKLRG in the EGFP multiclonal sites to obtain transfer Vector pSKLRGE2.
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2003年第3期3-8,共6页
Chinese Journal of Veterinary Medicine
