摘要
高分辨率熔解曲线（high resolution melting,HRM）是一种主要用于基因分型和突变扫描的分子诊断技术,在中药真伪鉴定中有着广泛应用前景。该文将高分辨率熔解曲线技术应用于木通药材的鉴别,即选择trn H-psb A通用引物,在退火温度为58℃,35个循环数的条件下,建立正品木通药材的熔解曲线模型,并筛选确定其DNA模板浓度、引物浓度、Mg离子浓度的适宜范围。结果表明,在DNA质量浓度为5-125 mg·L^-1、引物浓度0.4μmol·L^-1、Mg离子浓度2.0 mmol·L^-1的条件下,木通药材的熔解曲线为双峰,其Tm为（81.84±0.16）,（85.28±0.16）℃;川木通熔解曲线为单峰,其Tm为（83.22±0.19）℃;关木通熔解曲线为双峰,其Tm为（81.67±0.14）,（84.24±0.10）℃。该方法可以实现简单、快速、高通量、可视化的的木通类药材的鉴定。
High resolution melting（HRM）,an important technology for genotyping and mutation scanning,has broad prospects in the authentification of traditional Chinese medicine. This paper selected universal trn H-psb A primers and used HRM to establish a new methods for identification of Akebia herbs. PCR was conduct at the annealing temperature of 58 ℃ and 35 cycles. The range of the DNA template concentration,the primer concentration and the Mg^2 ＋ion concentration were further analyzed. The results showed the Tm values of Caulis Akebiae was（81. 84 ± 0. 16）,（85. 28 ± 0. 16） ℃ and Caulis Clematidis Armandii was（83. 22 ± 0. 19） ℃ and Caulis Aristolochiae manshuriensis was（81. 67 ± 0. 14） ℃,（84. 24 ± 0. 10） ℃ with 5-125 mg·L^- 1DNA template,0. 4 μmol·L^- 1primer,2. 0 mmol·L^- 1Mg^2 ＋. This method can achieve the authentification of Akebia herbs and is simple,fast,high-throughput,visual.
出处
《中国中药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期2304-2308,共5页
China Journal of Chinese Materia Medica
基金
中医药行业科研专项(201407003)
关键词
高分辨率熔解曲线
木通
分子鉴定
high resolution melting
Akebia Herbs
molecular identification
