摘要
目的探讨人多发性骨髓瘤（MM）肝癌缺失基因1（DLC-1）启动子区CpG岛甲基化情况，以及三氧化二砷（As2O3）诱导DLC-1基因的去甲基化作用。方法采用甲基特异性PCR法（MSP）定性检测2008至2012年来自福建医科大学附属协和医院血液内科的52例MM患者DIC基因甲基化状态，反转录（RT）-PCR检测MM患者和人骨髓瘤U266细胞系DLC-1基因的表达情况；采用重亚硫酸盐测序PCR（BSP）法定量检测As203作用前、后人骨髓瘤细胞株U266其DLC-1基因的甲基化状态；荧光定量PCR检测U266细胞用药前、后DLC-1基因、DNA甲基转移酶基因（DNMTl、DNMT3a、DNMT3b）mRNA的表达变化。结果MM患者DLC-1基因的甲基化比例为71.15％（37／52）。U266细胞DLC-1基因呈甲基化，DLC-1基因不表达；经0.5、1.0、2.0pμmol／L As203作用后72h U266细胞DLC-1基因甲基化率由95.38％下降至63.07％、30.00％及7.69％；荧光定量PCR检测经0.5、1.0、2.0pμmol／L As2O3作用后72hU266细胞DLC-1基因mRNA表达与未加药组相比分别为其（1.60±0.09）、（3.66±0.17）、（5.29±0.15）倍，而DNMTl、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA表达下调（均P〈0.05）。结论DLC-1基因甲基化在MM患者中较为常见，这可能为MM的诊断和治疗提供借鉴；As2O3可诱导DLC-1基因去甲基化，使DLC-1基因表达上调，恢复其活性，为MM去甲基化治疗提供新思路。
Objective To explore the role of hypemethylation of DLC-1 gene in the pathogenesis of multiple myeloma （ MM ） and examine the effects of arsenic trioxide （ As2 03 ） -induced demethylation of DLC-1 gene in U266 cell line. Methods The methylation status of DLC-1 gene was detected by methylation specific PCR （MSP） in MM patients from 2008 to 2012. And the expression of DLC-1 gene mRNA was determined by reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR）. Methylation statuses of DLC-1 gene exposed to As2O3 were detected by bisulfite sequencing PCR （BSP）. And the mRNA expressions of DLC-1 and DNA methyltransferase （DNMT1, T3a and 3b） were determined by real-time fluorescence quantitative PCR （RTFQ-PCR）. Results Hypermethylation of CpG island of DLC-1 gene was observed in 37/52 （71.15%） MM patients. DLC-1 gene was not expressed after methylation. As2O3 could induce DLC-1 gene demethylation. After 72-houe treatments of 0. 5, 1.0 and 2.0 μmol/L As2O3 , the methylation rate of DLC-1 gene dropped from 95.38% to 63.07% , 30.00% and 7. 69% . As compared with the untreated group, the expression of DLC-1 gene mRNA increased to （ 1.60 ±0.09） , （3.66 ± 0. 17 ） and （5.29 ±0. 15） folds after exposures（all P 〈0. 05）. And As2O3 could induce the expression of DNMT1,DNMrI3a, DNMT3b gene mRNA （all P 〈 0. 05）. Conclusions Methylation of DLC-1 gene is essential in the pathogenesis of MM and may provide a new diagnostic technique and drug target for the treatment of MM. And As2 03 may activate the expression of DLC-1 gene through demethylation.
出处
《中华医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第36期2816-2821,共6页
National Medical Journal of China
基金
国家自然科学基金（81370629）
国家自然科学基金青年科学基金（81300428）
国家临床重点专科建设项目
教育部高等学校博士学科点专项科研基金（20133518120002）
福建省自然科学基金（2011J1179）
福建省卫生厅青年科学基金（2010-01-07）
福建省血液病重点实验室基金（2009J1004）
福建省临床重点专科建设项目
