摘要
目的探讨尾加压素Ⅱ（UⅡ）对大鼠血管外膜成纤维细胞表达白细胞介素6（IL-6）作用的影响及其细胞内信号转导机制。方法雄性SD大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞体外同步化培养24 h后,于无血清DMEM培养基中加入UⅡ（10^-10^-10^-7mol/L）,共孵育3-24 h。为了探索UⅡ的作用机制,加入细胞内不同的信号转导通路抑制剂,处理30 min后,加入UⅡ（10^-8mol/L）共孵育3 h或12 h。实验结束时,收集细胞,采用逆转录-聚合酶链反应法检测细胞IL-6 mRNA表达（3 h）;另外,细胞实验结束后收集培养液,采用酶联免疫吸附测定法检测IL-6分泌水平（12 h）。结果 （1）UⅡ呈浓度（10^-10^-10^-7mol/L）和时间依赖性方式促进外膜成纤维细胞中IL-6 mRNA表达和蛋白分泌,至10^-8mol/L UⅡ达高峰（P〈0.01）;UⅡ（10^-8mol/L）刺激IL-6基因表达3 h达高峰,蛋白分泌24 h达高峰（P〈0.01）。（2）UⅡ促进外膜成纤维细胞表达IL-6的效应能被UⅡ受体阻断剂SB710411（10^-6mol/L）、钙离子通道阻断剂尼卡地平（10^-5mol/L）、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂PD980959（10^-5mol/L）、蛋白激酶C抑制剂H7（10^-5mol/L）、Rho激酶抑制剂Y-27632（10^-5mol/L）和钙调神经磷酸酶抑制剂环孢霉素A（10^-5mol/L）所抑制（P〈0.01）。结论 UⅡ明显促进大鼠主动脉外膜成纤维细胞IL-6的表达,该作用通过激活UⅡ受体、钙离子通道、丝裂原活化蛋白激酶、蛋白激酶C、Rho激酶和钙调神经磷酸酶信号途径来实现,提示UⅡ诱导外膜成纤维细胞表达IL-6升高可能是其参与动脉粥样硬化的重要机制之一。
Aim To explore the effect of urotensin Ⅱ（ UⅡ） on expression of interleukin-6（ IL-6） in rat aortic adventitial fibroblast（ AF） and its intracellular mechanisms. Methods Growth-arrested AF was incubated in serumfree medium with UⅡ（ 10^- 10- 10^- 7mol /L）. In order to explore the mechanism of UⅡ effects,the cells were pretreated with some inhibitors of signal transduction pathways for 30 min,and then incubated with UⅡ（ 10^- 8mol /L） for 3 h to24 h. The IL-6 mRNA expression in the cells and secretion from the cells induced by UⅡ were evaluated by reverse transcription polymerase chain reaction（ RT-PCR） and enzyme-linked immunosorbent assay（ ELISA）,respectively. Results（ 1） UⅡ significantly increased IL-6 mRNA expression and protein secretion in rat AF,in a concentration-dependent（ 10^- 10- 10^- 7mol /L） and a time-dependent manner,with maximal effect at 10^- 8mol /L at 3 h for mRNA expression,or at 24 h for protein secretion（ both P〈0. 01）.（ 2） The effect of UⅡ was inhibited by SB710411（ 10^- 6mol /L）,nicardipine（ 10^- 5mol /L）,PD98059（ 10^- 5mol /L）,H7（ 10^- 5mol /L）,Y-27632（ 10^- 5mol /L） and cyclosporine A（ CsA）（ 10^- 5mol /L）,the inhibitors of UⅡ receptor,Ca^2 ＋channel,mitogen activated protein kinase,protein kinase C,Rho kinase,and calcineurin,respectively. Conclusion UⅡ significantly induces IL-6 expression in rat AF,via activation of its receptor,Ca^2 ＋channel,mitogen activated protein kinase,protein kinase C,Rho kinase and calcineurin signal transduction pathways,indicating that UⅡ induced-IL-6 expression is one of the important mechanisms responsible for accelerated atherosclerosis.
出处
《中国动脉硬化杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期763-768,共6页
Chinese Journal of Arteriosclerosis
基金
国家自然科学基金(30971273
81270223)
广东省自然科学基金(9151051501000016
S2011010000450)
广东省杰出大学生创新实验项目(1056010010)
