摘要
将 J亚群禽白血病病毒 (AL V- J)急性转化型中国分离毒 SD990 2株的 env- gp85基因的 PCR产物克隆进表达性载体 p GEX- 5 X- 3中 ,构建成重组质粒 p GEX- SD990 2 - gp85。将重组质粒 p GEX- SD990 2 - gp85转化的 BL 2 1大肠杆菌培养并用 IPTG诱导后 ,其菌体的超声波裂解物用 SDS- PAGE电泳分离蛋白质 ,在经考马斯亮蓝染色的 SDS- PAGE凝胶中与非重组载体 p GEX- 5 X- 3的转化菌裂解物相比 ,重组质粒 p GEX- SD990 2 - gp85的转化菌失去了相对分子质量为2 90 0 0的天然谷胱甘肽 (GST)蛋白带 ,但出现 1条相对分子质量为 6 30 0 0的条带 (相当于 AL V- J囊膜 gp85蛋白与GST的融合蛋白的相对分子质量 )。在 Western- blot中 ,AL V- J特异性单抗 JE9仅能从重组质粒 p GEX- SD990 2 - gp85的转化菌中特异性地识别出该 6 30 0 0的蛋白条带 ,而与天然非重组载体 p GEX- 5 X- 3的转化菌不发生反应。而抗 GST的抗体却从天然非重组载体 p GEX- 5 X- 3和重组质粒 p GEX- SD990 2 - gp85的转化菌中分别识别出 2 90 0 0或 6 30 0 0的条带。 Western- blot的结果证明 ,能分别被 AL V- J特异性单抗 JE9及 GST特异性抗体识别的相对分子质量为 6 30 0 0的蛋白质 ,确实为 GST与 AL V-
Env gp85 gene was amplified by polymerase chain reaction(PCR) from a plasmid containing the env gene of Chinese strain SD9902 of subgroup J avian leukosis viruses,and cloned into the expressing plasmid vector pGEX 5X 3 at the location between restriction endonucleases BamHⅠ and XhoⅠ sites.The recombinant plasmid pGEX SD9902 gp85 was transformed into E coli.BL21 for gp85 gene expression.The expression product was identified by SDS PAGE and Western blot with ALV J specific monoclonal antibody JE9 or GST specific antibodies.The result showed that the recombinant fusion protein must be the gp85 GST with a molecular weight of 63 000 as expected.
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期3-6,共4页
Chinese Journal of Veterinary Science
基金
国家自然科学基金资助项目 (3 0 0 40 0 11)
