摘要
目的：通过c-Jun氨基末端激酶（c-junN-terminalkinase，JNK）信号通路来研究蹄叶橐吾醇化乙酸乙酯萃取物的抗炎作用机制。方法：采用噻唑蓝比色法（MTT法）测定倍比稀释的蹄叶橐吾醇化乙酸乙酯萃取物（浓度区间为0～640mg·L-1）作用于密度为5×10-4个／rnL的RAW264．7细胞24h后的细胞活力，计算出药物对细胞的无毒浓度；测定JNK抑制剂SP600125（终浓度分别为25，12．5，6．25μmol·L-1）作用于细胞密度为5×10-4个／mL的RAW264．7细胞24h后的细胞活力，计算出SP600125作用的安全有效浓度；测定蹄叶橐吾醇化乙酸乙酯萃取物（终质量浓度分别为5，2．5，1mg·L-1）作用于LPS诱导细胞密度为5×10-4个／mL的RAW264．7细胞12，24，36，48h后的细胞活力，计算出药物抑制细胞增殖的浓度。采用蛋白质印迹（Western-blot）法测定蹄叶橐吾醇化乙酸乙酯萃取物（5mg·L-1）作用于LPS诱导的RAW264．7细胞24h后p-JNK（磷酸化c-Jun氨基末端激酶）蛋白、JNK蛋白和环氧化酶-2（COX-2）蛋白的表达变化。结果：蹄叶橐吾醇化乙酸乙酯萃取物作用于LPS诱导的RAW264．7细胞，测定P-JNK，JNK，COX-2相对灰度值分别为：0．12±O．03，0．48±0．03，0．18±0．04，无药物作用的LPS诱导的RAW264．7细胞，测定P-JNK，JNK，COX-2，相对灰度值分别为：0．68±0．05，0．83±0．04，0．58±0．04，两组数据比较具有明显差异（P〈O．01）。蹄叶橐吾醇化乙酸乙酯萃取物抑制LPS诱导的RAW264．7细胞增殖，下调p-JNK，JNK，COX-2等炎性蛋白的表达。结论：蹄叶橐吾醇化乙酸乙酯萃取物抗炎机制通过JNK信号通路来完成。
Objective： To study the anti-inflammatory mechanism and effects of Ligularia fischeri alcoholized ethyl acetate extract through＇the c-Jun N-terminal kinase （JNK） pathway. Method： MTT method was used to assay the toxic concentration of L. fischeri aleoholized ethyl acetate extract （ concentration range 0-640 mg · L-1） in RAW264.7 cells, density of which was 5 × 10-4 cells/mL. The safe and effective concentration of JNK inhibitor SP600125 was 25, 12.5, 6. 25 μmol-L-1, which was incubated with cells for 24 hours. The viability was measured on 12, 24, 36, 48 hour. Western-blot was used to observe the expression of p-JNK, JNK and cyclo-oxgenase 2 （COX-2） protein. Result： The relative gray values of p-JNK, JNK, COX-2 were 0. 12 ±0.03, 0.48 ±0.03, 0. 18 ±0.04, and the relative gray values without treatment of LPS were 0.68 ± 0.05, 0.83 ±0.04, 0.58 ±0.04, there was a difference （P 〈 0.01 ）. L. fischeri alcoholized ethyl acetate extracts inhibited proliferation of RAW264.7 cellsinduced by LPS, and decreased the expression of p-JNK, JNK, COX-2 and other inflammatory proteins. Conclusion： The anti-inflammatory mechanism of L. fischeri alcoholized ethyl acetate extract is through JNK pathway.
出处
《中国实验方剂学杂志》
CAS
北大核心
2014年第12期183-187,共5页
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
基金
齐齐哈尔市科技局项目(SF2010-05)
关键词
蹄叶橐吾醇化乙酸乙酯萃取物
C-JUN氨基末端激酶
抗炎机制
炎症通路
Ligularia fischeri alcoholized ethyl acetate extract
c-Jun N-terminal kinase
anti-inflammatory mechanism
inflammatory pathway
