摘要
目的 采用RNA干扰（RNAi）技术沉默转化生长因子β1（TGF-β1）基因,观察RNAi的基因沉默效应及对人膀胱癌细胞株（EJ细胞株）中血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响.方法 构建基因TGF-β1特异性小干扰RNA （siRNA）表达载体,反转录（RT）-PCR及ELISA筛选出抑制效率最高的靶序列,分成EJ细胞组、对照组（TGF-β1组）、重组质粒组（TGF-β1siRNA表达载体组）3组转染,Western印迹检测各组细胞VEGF蛋白表达水平.结果 成功构建基因TGF-β1特异性siRNA表达载体,RT-PCR及ELISA筛选出最佳抑制效果的序列[TGF-β1相对mRNA表达水平为0.92-0.19;ELISA检测的蛋白表达水平为（50 ±6） pg/ml];转染后各组的VEGF蛋白表达水平为EJ细胞组（0.86 ±0.18） pg/ml,对照组（1.15 ±0.29） pg/ml,重组质粒组（0.45 ±0.16） pg/ml,重组质粒组明显低于EJ细胞组和对照组（均P＜0.05）.结论 抑制TGF-β1基因能下调VEGF基因的表达,TGF-β1基因可能通过诱导VEGF基因的表达实现对膀胱肿瘤血管生成的调控.
Objective To employ RNA interference technology to silence transforming growth factor-β1 （TGF-β1） gene to examine the gene silencing effects of RNAi on the expression of vascular endothelial growth factor （VEGF） in human bladder cancer cell lines （EJ）.Methods The TGF-β1 genespecific siRNA expression vector was constructed.And the most efficiently suppressed target sequences were screened through reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） and enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.The samples were divided into 3 groups of EJ,control （TGF-β1） and recombinant plasmid （TGF-β1 siRNA expression vector）.And the expression level of VEGF protein was detected by Western blot.Results TGF-β1 gene-specific siRNA expression vector was constructed successfully.TGF-β1 relative mRNA expression was 0.92 ± 0.19 and the protein expression level （50 ±6） pg/ml.The protein expression level of EJ group after transfection was （0.86 ± 0.18） pg/ml,control group （1.15 ± 0.29） pg/ml and recombinant plasmid group （0.45 ±0.16） pg/ml （both P＜0.05）.Conclusions An inhibition of TGF-β1 gene down-regulates the expression of VEGF.And TGF-β1 may regulate angiogenesis of bladder tumor through an induction of VEGF gene expression.
出处
《中华医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第16期1274-1276,共3页
National Medical Journal of China
基金
四川省卫生厅科研项目（100479）
关键词
膀胱肿瘤
转化生长因子
血管内皮生长因子
RNA干扰
Urinary bladder neoplasms
Transforming growth factors
Vascular endothelial growth factors
RNA interference
