摘要
用RTPCR技术从人肝总RNA中分离扩增了人谷胱甘肽硫转移酶A1基因的cDNA序列,克隆至大肠杆菌表达质粒pET23b,采用蛋白表达筛查法及DNA测序证明该cDNA序列完全正确。重组质粒pET23bhgst转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导获得高效表达的可溶性hGSTA1产物,其表达量约为大肠杆菌可溶性总蛋白的40%。将hGSTA1cDNA亚克隆至乳酸乳球菌表达载体pMG36e,电穿孔法转化乳酸乳球菌MG1363获得hGSTA1乳酸乳球菌表达株。SDSPAGE及Western杂交分析表明该菌株表达预期大小的hGSTA1融合蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化获得的hGSTA1蛋白具有较高的谷胱甘肽硫转移酶活性。具hGSTA1酶活性的乳酸乳球菌工程菌可望应用于研制防癌保健乳制品。
Theglutathione S transferaseA1cDNAwasamplifiedfromhumanlivertotal RNAsbyRT PCRandwasclonedintoaEscherichiacoliexpressionvectorpET2 3b ,then therecombinantplasmidpET2 3bhgstwasintroducedintoE .coliBL2 1 (DE3)andinduced byIPTG ,thehigh levelexpressionofhGSTA1appearedintheE .colicells.ThecDNAen codinghGSTA1wassubclonedintopMG36e,alactococcalexpressionvector,andintroduced intoLactococcuslactisMG1 36 3byelectroporation .Inthepositivetransformants,thehGS TA1wasexpressedasafusionproteinwhichwasverifiedbySDS PAGEandWesternblot. ThehGSTA1frombothE .coliandL .lactiswaspurifiedbyaffinitychromatographyon glutathione agaroseandallshowedenzymaticactivity .Thepotentialapplicationofthere combinantLactococcuslactisinfunctionalfoodwasalsodisscussed .
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第2期132-138,共7页
Acta Microbiologica Sinica
基金
国家自然科学基金!( 3980 0 0 80 )
微生物资源国家重点实验室项目资助
关键词
乳酸乳球菌
hGSTA1
基因表达
受体系统
Glutathione S transferase ,Genecloningandexpression ,Lactococcuslactis
