血友病A、B诊断试剂盒的研制
出处
《中国输血杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第3期159-161,共3页
Chinese Journal of Blood Transfusion
参考文献12
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11.2缺FⅨ血浆(FⅨ-DP)将多人份混合新鲜血浆通过抗FⅨ单克隆抗体免疫亲和层析柱,FⅨ被吸附,流过液即为FⅨDP[5]。收取流过液,分装、冻干。用前以配套溶解液复溶。
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21.3活化部分凝血活酶试剂(APTT试剂)按参考文献[6]方法制备脑磷脂,分装、冻干,用前加高岭土悬液溶解、混合。1.4氯化钙(CaCl2)溶液。
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31.5稀释液0.05mol/L咪唑,0.1mol/L氯化钠,用1.0mol/L盐酸调pH至7.3。
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41.6正常人参比血浆由30份以上的健康人混合新鲜血浆(枸橼酸钠抗凝)分装、冻干制成。用前以蒸馏水复溶。
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51.7样品正常人及血友病A、B患者血浆。
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61.8FⅧ:C、FⅨ:C测定基本方法取经稀释液适当稀释的正常参比血浆或受检血浆0.1ml、FⅧ-DP(或FⅨ-DP)0.1ml、APTT试剂0.1ml,加入反应管中混匀,立即置37℃温育适当时间,然后加入经37℃预热的CaCl2溶液0.1ml,测定凝固时间。
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71.9温育曲线制作(不同温育时间样品凝固时间测定)对1/10稀释的正常参比血浆,按1.8中基本方法,测定温育时间分别为2、4、6、…、20min的凝固时间,以温育时间为横坐标,凝固时间为纵坐标制图,即得FⅧ:C或FⅨ:C测定实验的温育曲线。
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81.10实验条件的优化以不同浓度水平脑磷脂、高岭土和CaCl2作为设计因素,选用L4(23)正交表设计试验,根据1.9中温育曲线制作方法,分别按正交表的设计制作各编号试验的FⅧ:C和FⅨ:C温育曲线,根据曲线稳定时间长短对各编号试验结果评分并进行正交分析,选取能使稳定时间更长的试剂组合条件和该条件下温育曲线稳定段中部的温育时间,最终形成试剂盒的实验条件。
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91.11试剂盒的组装根据1.10选取的实验条件,分别将FⅧ:C和FⅨ:C检测所需的各种试剂装配成套,配以使用说明书。两种试剂盒中除缺凝血因子血浆不同,其余试剂均相同,即试剂盒由FⅧ-DP(或FⅨ-DP)、APTT试剂、CaCl2溶液,正常人参比血浆和稀释液组成。
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101.12FⅧ:C(或FⅨ:C)测定的标准曲线制作用自制试剂盒,分别测定1/5、1/10、1/20、…1/640稀释的正常参比血浆的凝固时间。分别视其对应FⅧ:C(FⅨ:C)百分活性为200%、100%、50％、…、1.56％。以正常参比血浆FⅧ:C(或FⅨ:C)百分活性为X(横坐标),对应的凝固时间为Y(纵坐标),按统计学方法作直线回归方程Y=a－blogX,并求出相关系数。
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