摘要
采用L9(34)正交试验设计方法,对草地早熟禾(Poa pratensis)基因组DNA SRAP-PCR反应体系中的TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物及dNTP四因素的用量进行优化,并比较不同模板DNA用量对扩增的影响,建立草地早熟禾SRAP-PCR最佳反应体系,同时,利用该体系对SRAP引物进行筛选。结果表明,草地早熟禾SRAP-PCR最佳反应体系为Taq DNA聚合酶1.0U、Mg2+1.75mmol.L-1、引物0.25μmol.L-1、dNTP 220μmol.L-1、40ng模板DNA、2μL 10×PCR buffer,总体积20μL。运用该体系从100对SRAP引物中筛选出43对引物能够产生清晰稳定的扩增条带且多态性丰富。优化体系的建立及引物的筛选可为今后利用SRAP标记技术对草地早熟禾进行遗传多样性分析、图谱构建、种质资源鉴定奠定技术基础。
An orthogonal design was used to optimize a SRAP-PCR system for Poa pratensis with 4 factors（Mg2＋,dNTP,primer and Taq polymerase） at 3 levels plus the concentration of template DNA.The optimized SRAP-PCR system was： 2 μL 10 × PCR buffer,40 ng template DNA,Mg2＋1.75 mmol·L-1,dNTP 220 μmol·L-1,primer 0.25 μmol·L-1,Taq DNA polymerase 1.0 U in a total of 20 μL reaction mixtures.With the optimized system,43 primer combinations were selected among 100 primer combinations,which produced abundant polymorphism bands.This study optimized SRAP-PCR system and selected the proper primers in P.pratensis,which would play an important role in genetic diversity analyses,map construction,germplasm identification in P.pratensis with SRAP markers.
出处
《草业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期411-416,共6页
Pratacultural Science
基金
国家"十二五"支撑项目(2011BAD17B01)
