摘要
利用SYBR GreenⅡ荧光定量PCR技术,建立了剑尾鱼CYP1A1基因mRNA水平的定量分析方法。从苯并芘浸泡诱导后的剑尾鱼肝脏中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得标准品质粒10倍梯度稀释后构建标准曲线并进行熔解曲线分析。用苯并芘(20μg/L)对剑尾鱼进行诱导,在第1、3、5、7、9、11天分别取肝脏,RT-PCR检测剑尾CYP1A1基因的相对表达量。建立了剑尾鱼CYP1A1基因表达的检测方法和定量标准曲线,构建的剑尾鱼CYP1A1和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为10～26、12～26,扩增效率分别为100.53%、98.40%;建立的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数r2均在0.99以上;熔解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,表明扩增产物特异性非常好,组内变异系数为0.15%～0.83%,组间变异系数为0.86%～1.66%。利用本方法对剑尾CYP1A1基因的相对表达量进行检测,结果表明苯并芘可显著诱导剑尾鱼CYP1A1基因的表达。诱导组剑尾鱼肝脏中CYP1A1相对表达量随着时间呈现先上升后下降的趋势,呈倒"U"形;对照组的CYP1A1相对表达量很低,随时间无明显变化。
出处
《江苏农业科学》
CSCD
北大核心
2011年第6期77-81,共5页
Jiangsu Agricultural Sciences
基金
科技部公益项目(编号:2004DIB1J029)
