摘要
本研究拟阐明力达霉素(LDM)与抗Ⅳ型胶原酶单抗小型化免疫偶联物Fab'-LDM的抗肿瘤侵袭转移作用。采用Boyden小室体外侵袭实验,检测Fab'-LDM免疫偶联物对人纤维肉瘤HT-1080细胞侵袭能力的影响;进一步采用明胶酶谱实验研究其对MMP-2和MMP-9分泌的影响,以及RT-PCR法检测其对TIMP-1 mRNA表达水平的影响;应用裸鼠体内移植人纤维肉瘤HT-1080模型,探讨Fab'-LDM对肿瘤的生长抑制作用。Boyden小室体外侵袭结果表明,Fab'-LDM对HT-1080侵袭转移存在剂量依赖性抑制作用:Fab'-LDM(5和10 nmol.L-1)的侵袭抑制作用分别达到(60±12)%和(79±11)%。明胶酶谱实验证实,Fab'-LDM偶联物(5和10 nmol.L-1)对MMP-2和MMP-9型明胶酶分泌的抑制作用达到(42±8)%、(54±6)%和(57±3)%、(87±1)%。同时RT-PCR检测显示,10 nmol.L-1 Fab'-LDM显著提高TIMP-1 mRNA表达水平。体内实验显示,与对照相比,Fab'片段组、LDM组和Fab'-LDM组的肿瘤生长抑制率分别为:(30±13)%、(74±22)%和(86±26)%,对HT-1080移植瘤的生长均具有显著抑制作用;其中,Fab'-LDM偶联物的抑瘤率最高,与LDM组相比有显著差异(P=0.045)。Fab'-LDM偶联物在体内和体外均对肿瘤侵袭转移有抑制作用,有望成为新型抗肿瘤侵袭转移的生物治疗剂。
This study is to investigate the tumor invasion and metastasis inhibition effects of the immunoconjugate composed of lidamycin and anti-type IV collagenase monoclonal antibody Fab＇ fragment.Boyden chamber assay was used to evaluate the influence of Fab＇-LDM on HT-1080 cells invasion ability,gelatinase spectrum was used to measure the change of invasion factor MMP-2 and MMP-9＇s secretion,and RT-PCR was adopted to determine TIMP-1 mRNA expression level.The immunoconjugate inhibition of tumor in situ metastasis was also tested in nude mice.The Fab＇-LDM conjugates had dose-dependent inhibition effect on HT-1080 cells＇ invasion.At the concentrations of 5 and 10 nmol-L-1,the Fab＇-LDM inhibited the invasion by（60 ± 12） % and（79 ± 11） % respectively.At the concentration of 5 and 10 nmol-L-1,the Fab＇-LDM inhibited the secretion of MMP-2 by（42 ± 8） % and（54 ± 6） % and that of MMP-9 by（57 ± 3） % and（87 ± 1） %,respectively.RT-PCR indicated that conjugates increased the anti-invasion factor TIMP-1 level.The in vivo experiment showed that,compared with the control group,the tumor inhibition rate in Fab＇,Fab＇-LDM,and LDM group equaled to（30 ± 13） %,（86 ± 26） %,（74 ± 22） % respectively.In conclusion,Fab＇-LDM could inhibit the invasion and metastasis of tumor and it might be a new tumor biotherapy agent.
出处
《药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期1462-1465,共4页
Acta Pharmaceutica Sinica
基金
国家自然科学基金资助项目(30701031)
江苏大学高级人才启动基金资助项目(06jdg045)
