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pPICZαA-CDK2重组质粒的构建及表达 被引量：4

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摘要 目的:构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的胞外分泌型pPICZαA-CDK2重组质粒,利用毕赤酵母表达体系表达CDK2蛋白。方法:从人白细胞中提取总RNA,逆转录后采用聚合酶链反应扩增出CDK2基因,并将其插入pPICZαA质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌JM109进行克隆。重组质粒pPICZαA-CDK2转化毕赤酵母菌株GS115,甲醇诱导酵母细胞进行蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况及抗原性。结果:PCR电泳及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到表达载体中;重组质粒转入酵母菌GS115,酵母经甲醇诱导表达后经SDS-PAGE检测发现在34000左右有条带,Western-Blot检测发现有与CDK2单抗结合蛋白。结论:成功构建重组质粒,初步判断CDK2全长蛋白在毕赤酵母中表达成功且抗原性良好。
作者 黄宪章 张战锋 谢诗园 李朝霞 李林 陈炜烨 何敏 庄俊华
机构地区 广东省中医院检验科 广州医学院检验系 中山大学附属第三医院检验科
出处 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第16期2917-2919,共3页 The Journal of Practical Medicine
基金 广东省自然科学基金(编号:10151040701000031 07004832) 广东省科技计划项目(编号:2010B060900069)
关键词 细胞周期蛋白依赖激酶2 重组质粒 毕赤酵母
分类号 R346 [医药卫生—基础医学]
  • 相关文献

参考文献4

二级参考文献9

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共引文献3

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引证文献4

二级引证文献11

实用医学杂志
2011年 第16期

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