摘要
对甜槠Castanopsis eyrei进行遗传多样性研究的过程中,为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR扩增结果,利用正交设计对Mg2+,dNTP,引物,Taq酶,牛血清蛋白(BSA)和模板DNA等6种因素5个水平进行筛选和优化。确定甜槠ISSR-PCR最适宜反应体系为:10μL反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol.L-1Tris-HCl,pH 9.0,50 mmol.L-1KCl,10 g.L-1TritonX-100),1.7 mmol.L-1Mg2+,0.25 mmol.L-1dNTP,8.34 nkatTaqDNA聚合酶,1.5 g.L-1牛血清白蛋白,6 pmol引物,12 ng模板DNA。甜槠扩增时引物UBC846的最适退火温度为56.3℃。
Obtaining the stable and repeatable ISSR-PCR amplification result is the basic work to study genetic diversity of Castanopsis eyrei. The ISSR-PCR amplification system was optimized by using orthogonal design in six factors and five levels （Mg^2＋, dNTP, primer, Taq DNA polymerase, bovine serum albumin and template DNA）. The suitable reaction conditions of ISSR-PCR were shown as follows： 1 × Taq buffer （10 mmol·L^-1 Tris - HCl, pH 9.0, 50 mmol·L^-1 KCl, 10 g·L^-1 TritonX-100, 1.7 mmol·L^-1 Mg^2＋, 0.25 mmol·L^-1 dNTP, 8.34 nkat Taq DNA polymerase, 1.5 g·L^-1 bovine serum albumin, 6 pmol primer, 12 ng template DNA in 10 μL reaction volume. The optimal annealing temperature for primer UBC 846 was 56.3 ℃.
出处
《浙江林学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期516-520,共5页
Journal of Zhejiang Forestry College
基金
浙江省自然科学基金资助项目(Y504220)
