摘要
目的 :筛选并克隆一个承载分子 ,研究其在肽抗生素及其他小分子活性肽融合表达中的应用。 方法 :根据肽抗生素为小分子活性肽 ,通常带正电荷的特性 ,从绿脓杆菌噬菌体 (PaP3)基因组中筛选一承载分子 ,构建其与肽抗生素hPAB β的融合蛋白表达载体 ,确认该承载分子能在大肠杆菌中融合表达肽抗生素后 ,再选择一组不同来源、不同大小、不同等电点的小肽分子作为研究对象 ,分别构建它们与承载分子的融合蛋白表达载体 ,转化大肠杆菌进行表达。根据表达情况 ,分析所选择的承载分子融合表达生物活性小肽的能力。 结果 :从PaP3基因组中成功地筛选到ORF 30编码的 1 6 2个氨基酸组成的蛋白作为承载分子 (PaP3.30 ) ;构建该承载分子与肽抗生素hPAB β的融合蛋白表达质粒pQE PaP30 hPAB β,在大肠杆菌中表达的融合蛋白占细菌总蛋白的 30 %以上 ;对所选择的不同来源 (人、蜜蜂、爪蟾、大肠杆菌 )、不同大小(相对分子质量为 70 0～5 30 0 )、不同等电点 (pⅠ 2 .9～ 1 2 )的六种小肽分子PaP3.30 ,均能实现其在大肠杆菌中高效融合表达 ,表达量为细菌总蛋白的 35 %～4 4 %。 结论 :所筛选的承载分子PaP3.30具有很强的融合表达小分子活性肽的能力 。
Objective:To screen and clone a carrier molecule for the expression of small bioactive peptides at high levels. Methods: A carrier molecule, PaP3.30, was screened out from the genome of Pseudomonas aeruginosa phage PaP3 and its gene was cloned by PCR method and inserted into pQE 32 expression plasmid, this recombinant plasmid was named pQE PaP30. The peptide antibiotics hPAB β gene was then inserted into pQE PaP30 and induced to express the fusion protein in Escherichia coli . The ability of PaP3.30 to express other bioactive peptides was evaluated by fusing 6 different origins, varies in sizes and isoelectric points selected peptides to it. Results: After fused to PaP3.30, the peptide antibiotics hPAB β could express as fusion protein above 30% of total bacterial proteins. Six selected peptides were also expressed by the level of 35%～44% total bacterial proteins when fused to carrier molecule, PaP3.30. Conclusion: The new carrier molecular, PaP3.30, is versatile in the expression of small bioactive peptides.
出处
《医学研究生学报》
CAS
2004年第7期577-580,共4页
Journal of Medical Postgraduates
基金
国家自然科学基金资助项目 (批准号 :3 0 171119)
军队"十五"医药卫生重点课题资助项目 (批准号 :0 1Z0 70 )
国家"863"基金资助项目 (批准号 :2 0 0 2A2 14 2 11)
关键词
承载分子
肽抗生素
活性小肽
融合表达
Carrier molecule
Peptide antibiotics
Small bioactive peptides
Fusion expression
