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BSL-3实验室医疗废弃物专用包装袋的封口方式及层数对高压灭菌效果的影响 被引量:8
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作者 甄维 蔡琨 +4 位作者 史海月 张靖 韩卫芳 周为民 武桂珍 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期30-33,共4页
目的对感染性废物的包装给出一个合理的包装层数和封口方式,在指定的高压灭菌程序下,达到更好的高压灭菌效果。方法在指定的高压程序P4、P9下,针对医疗废弃物专用包装袋采用不同的包装层数和封口方式(包装层数分别为单层、双层、三层;... 目的对感染性废物的包装给出一个合理的包装层数和封口方式,在指定的高压灭菌程序下,达到更好的高压灭菌效果。方法在指定的高压程序P4、P9下,针对医疗废弃物专用包装袋采用不同的包装层数和封口方式(包装层数分别为单层、双层、三层;封口方式分别是轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口);通过用生物指示剂对内部感染性废物的上部、中部、底部进行检测,评价不同组合方式下的高压灭菌效果。结果1)在P4高压程序下,三层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、下部的生物指示剂的阴性率分别为上部是100%、0%、0%,中部是45%、0%、0%,底部都是0%。二层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、底部的生物指示剂的阴性率分别为上部是100%、85%、0%,中部是67%、20%、0%,底部是10%、0%、0%。一层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、底部的生物指示剂的阴性率分别为上部是100%、100%、0%,中部是70%、45%、0%,底部是12.5%、0%、0%。(2)在P9高压程序下,三层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、底部的生物指示剂的阴性率分别为上部均是100%,中部是100%、100%、70%,底部是100%、100%、30%。二层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、底部的生物指示剂的阴性率分别为上部均是100%,中部均是100%,底部是100%、100%、60%。一层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、底部的生物指示剂的阴性率分别均为100%。结论高压感染性废物时,采用单层医疗废弃物专用包装袋,不封口的方式进行高压,高压灭菌效果最好。必须封口时,应尽量避免将医疗废弃物专用包装袋的袋口封的过紧,以免由于蒸汽不能完全渗透,导致感染性废物达不到完全灭菌。 展开更多
关键词 BSL-3实验室 高压灭菌 医疗废弃物专用包装袋
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妊娠期糖尿病与B族链球菌感染的关联性
2
作者 黄柳华 周宁 +5 位作者 周子聪 吴清华 肖维威 沈晨光 朱利 赵卫 《实用医学杂志》 北大核心 2026年第2期342-347,共6页
目的阐明妊娠期糖尿病(GDM)患者合并B族链球菌(GBS)感染的临床特点以及对妊娠结局的影响,分析糖化血红蛋白(HbA_(1c))、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)在GDM患者合并GBS感染及其并发症绒毛膜羊膜炎的预测价... 目的阐明妊娠期糖尿病(GDM)患者合并B族链球菌(GBS)感染的临床特点以及对妊娠结局的影响,分析糖化血红蛋白(HbA_(1c))、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)在GDM患者合并GBS感染及其并发症绒毛膜羊膜炎的预测价值。方法回顾性选取2023年1月至2024年12月佛山市南海区妇幼保健院收治的277例诊断为GDM的住院孕妇,其中GDM患者合并GBS感染为阳性组(n=75);GDM患者未合并GBS感染为对照组(n=202)。比较两组孕妇在年龄等临床资料和妊娠结局的区别,采用多因素logistic回归分析,探讨GDM患者发生GBS感染的危险因素,以及GDM合并GBS感染者发生绒毛膜羊膜炎的危险因素;并采用受试者工作(ROC)曲线评估相关指标的预测价值。结果阳性组的HbA_(1c)、NLR、PLR水平显著升高,胎膜早破及宫内窘迫的发生率亦明显增加,差异有统计学意义(均P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,HbA_(1c)(OR=2.574,95%CI:1.355~4.889)、NLR(OR=1.545,95%CI:1.318~1.811)是GDM患者发生GBS感染的独立危险因素(均P<0.05)。同时,NLR(OR=1.694,95%CI:1.242~2.190)是合并GBS感染的GDM患者发生绒毛膜羊膜炎的独立危险因素。ROC曲线结果显示,基于NLR和HbA_(1c)构建的联合预测模型,预测GDM患者发生GBS感染的曲线下面积(AUC)为0.800(95%CI:0.741~0.859),NLR预测绒毛膜羊膜炎的AUC为0.855(95%CI:0.760~0.951)。PLR与GBS感染及其并发症无显著相关性(P>0.05)。结论GDM患者合并GBS感染会增加孕妇不良妊娠结局的风险,较高水平的HbA_(1c)、NLR是GDM患者发生GBS感染的独立危险因素,NLR对GDM合并GBS感染者发生绒毛膜羊膜炎有预测价值。建议加强高危妊娠管理,避免不良妊娠结果和降低围产期母婴感染的几率。 展开更多
关键词 妊娠期糖尿病 B族链球菌 妊娠结局 中性粒细胞与淋巴细胞比值 糖化血红蛋白 绒毛膜羊膜炎
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血浆游离DNA检测对非小细胞肺癌靶向治疗相关基因筛选及患者预后预测的研究 被引量:1
3
作者 邓绮玲 宋迪 +3 位作者 奚可欣 谢晓婷 吴小延 赵卫 《中国癌症杂志》 北大核心 2025年第4期355-364,共10页
背景与目的:肿瘤患者血浆游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)高通量检测广泛用于肿瘤靶向治疗相关基因的筛选。本研究探讨cfDNA中Ⅰ类及Ⅱ类靶向治疗相关基因变异类型及数量与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患癌预后的关系... 背景与目的:肿瘤患者血浆游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)高通量检测广泛用于肿瘤靶向治疗相关基因的筛选。本研究探讨cfDNA中Ⅰ类及Ⅱ类靶向治疗相关基因变异类型及数量与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患癌预后的关系。方法:收集2021年—2023年在中山大学肿瘤防治中心进行血浆cfDNA高通量测序项目的NSCLC患者的测序结果及临床资料,并对入组患者从2021年6月1日采集血浆当天开始截至2024年5月27日进行生存随访,并使用GraphPad Prism 8.0及SPSS Statistics 25.0对患者生存期与临床资料及测序结果中Ⅰ类与Ⅱ类靶向治疗相关基因类型及数目进行单因素及多因素统计学分析(伦理批号:B2024-359-01)。结果:313例NSCLC患者中确诊时分期Ⅰ期25例(7.98%)、Ⅱ期20例(6.39%)、Ⅲ期38例(12.14%)和Ⅳ期230例(73.48%);组内NSCLC分型包含腺癌(90.10%),鳞癌(5.11%),大细胞癌(2.87%)及其他分型(1.92%);入组的NSCLC患者血浆cfDNA中Ⅰ类与Ⅱ类靶向治疗相关基因数及占比分别为:0个(25.24%)、1个(17.57%)、2个(19.17%)、3个(14.38%)、4个(8.31%)、5个及以上(15.34%)。患者血浆cfDNA高通量测序检测结果中,突变频率最高的3个基因分别为EGFR、TP53、ERBB2基因,其中EGFR基因突变频率为36.04%,TP53基因突变频率为30.63%,ERBB2基因突变频率为4.95%。患者生存期不仅与热点靶向基因表达情况相关,与血浆cfDNA高通量测序中Ⅰ类和Ⅱ类靶向相关位点基因变异个数也呈正相关。经过治疗后无靶向治疗相关基因的位点变异比有靶向治疗相关基因的位点变异的患者的生存期长,死亡风险可降低63.2%。而单纯一个基因位点变异比多个驱动基因位点变异的患者的生存期长,死亡风险更低,所测得的Ⅰ类及Ⅱ类靶向治疗药物在3个基因数以内,基因数目越少,患者的生存期越长。结论:血浆cfDNA高通量测序中Ⅰ类和Ⅱ类靶向相关位点基因变异个数对经过治疗后的NSCLC患者的生存期有影响。血浆cfDNA高通量测序检测可作为患者预后的评估指标。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 血浆游离DNA 高通量测序 基因突变位点 靶向治疗药物筛选 生存分析
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Antiviral agents for dengue virus
4
作者 Yinghan Jiang Yanran Wang +5 位作者 Yaqun Xu Yuxin Tian Mengyuan Zhao Chenguang Shen Yang Yang Minghui Yang 《Virologica Sinica》 2025年第6期865-873,共9页
Dengue virus(DENV)is a mosquito-borne pathogen responsible for a spectrum of illnesses,including dengue fever,dengue hemorrhagic fever,and dengue shock syndrome.Nearly half of the global population is at risk of DENV ... Dengue virus(DENV)is a mosquito-borne pathogen responsible for a spectrum of illnesses,including dengue fever,dengue hemorrhagic fever,and dengue shock syndrome.Nearly half of the global population is at risk of DENV infection,making it a pressing public health issue worldwide.The limited cross-protection among the four DENV serotypes(DENV1-4)and the phenomenon of antibody-dependent enhancement(ADE)have posed significant challenges to the development of effective dengue vaccines.Furthermore,there are currently no specific antiviral treatments available.This review provides an overview of DENV's key characteristics,clinical manifestations,and recent advancements in antiviral drug development-including the repurposing of approved drugs,peptidebased antiviral agents,therapeutic antibodies,natural products with antiviral potential,and host factor inhibitors-aiming to offer critical insights to inform strategies for managing and preventing dengue outbreaks. 展开更多
关键词 Dengue virus Peptides drugs Antiviral agents FLAVIVIRUS
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当前传入我国风险较大的几种新发传染病 被引量:13
5
作者 李小波 黄吉城 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期182-187,共6页
近年来,国际新发、烈性传染病疫情发生的频率大大加快,对我国的影响也日益加大。西尼罗病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、尼帕病毒、布氏锥虫、裂谷热病毒等多种人兽共患病原体均曾引起过人间或动物间较大规模的暴发流... 近年来,国际新发、烈性传染病疫情发生的频率大大加快,对我国的影响也日益加大。西尼罗病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、尼帕病毒、布氏锥虫、裂谷热病毒等多种人兽共患病原体均曾引起过人间或动物间较大规模的暴发流行。随着我国对外经贸、人员往来的日趋频繁,上述传染病疫情存在传入我国并引起国内地方性流行的巨大风险,应引起我国高度关注。 展开更多
关键词 风险 新发传染病 流行
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立 被引量:3
6
作者 孙琦 王湘雨 +3 位作者 陈诗琪 司徒莉芳 赵卫 万成松 《生命科学研究》 CAS CSCD 2015年第1期54-58,共5页
"超级细菌"耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是诱发连续腹膜透析患者腹膜炎的常见细菌,且治疗困难。目前缺少MRSA腹膜炎动物模型。腹腔注射2×10^9-2×10^10CFU/mL 7组不同浓度... "超级细菌"耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是诱发连续腹膜透析患者腹膜炎的常见细菌,且治疗困难。目前缺少MRSA腹膜炎动物模型。腹腔注射2×10^9-2×10^10CFU/mL 7组不同浓度的MRSA感染小鼠,观察小鼠死亡时间,测定肝脏与脾脏细菌定植量,进行肝、脾病理分析,确定适宜的建模浓度。研究发现,小鼠感染细菌浓度最小致死剂量为每只2×10^9CFU,最适建模浓度为每只1.4×10^9CFU。结果表明建立了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型,为MRSA致腹膜炎的致病机制研究、疫苗的研制提供实验基础。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 腹膜炎 小鼠模型
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分子诊断实验室去除核酸污染的方法学研究 被引量:26
7
作者 李云龙 张健 +5 位作者 魏艳秋 贾晓娟 李小燕 谭立明 刘文军 杨利敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期673-679,共7页
核酸检测因具有良好的灵敏度和特异性而被广泛应用于体外诊断、动植物商品检疫、法医鉴定等领域。然而操作过程中易受到核酸污染导致的假阳性结果,严重影响了检测准确性。因此寻找一种有效的防止和清除核酸污染的方案对于实验室正常运... 核酸检测因具有良好的灵敏度和特异性而被广泛应用于体外诊断、动植物商品检疫、法医鉴定等领域。然而操作过程中易受到核酸污染导致的假阳性结果,严重影响了检测准确性。因此寻找一种有效的防止和清除核酸污染的方案对于实验室正常运转及保障检测结果的可靠性具有重要意义。文中比较了几种不同清除核酸污染的方法,确认了84消毒液和PCRguard试剂可有效清除液体中及不同材质表面的核酸污染。另外,84消毒液和PCRguard试剂配合使用,可很好地解决核酸气溶胶污染。研究结果对于分子诊断实验室日常预防核酸污染及清除已发生的气溶胶污染提出了解决方案。 展开更多
关键词 核酸检测 PCR 气溶胶 核酸污染
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肠出血型大肠埃希菌O157:H7 espF基因缺失株和回补株的构建 被引量:1
8
作者 华颖 孙琦 +5 位作者 王湘雨 杜艳丽 邵娜 张其威 赵卫 万成松 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1546-1551,共6页
目的利用Red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的esp F基因及其核苷酸片段;建立以p BAD 33质粒为载体的esp F基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段,将抗性打靶片段电转入含有PKD46质粒的EDL933w,在PKD 4... 目的利用Red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的esp F基因及其核苷酸片段;建立以p BAD 33质粒为载体的esp F基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段,将抗性打靶片段电转入含有PKD46质粒的EDL933w,在PKD 46介导的重组系统帮助下,打靶片段和菌体esp F基因发生同源重组,PCR和测序验证;PCR扩增esp F及其核苷酸片段的整个ORF区序列,将其克隆入p BAD33质粒,分别将重组质粒转入相应的缺失株,以构建出相应的回补突变株。采用RT-PCR的方法验证在相应的回补突变株中esp F及其核苷酸片段是否转录。结果构建了esp F基因及其核苷酸片段缺失的EHEC O157:H7 EDL933w突变菌株和相应的回补株,且esp F基因及其核苷酸片段在回补株中均发生转录。结论本研究运用Red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌O157:H7 esp F基因缺失株,并建立以p BAD33质粒为载体的EHEC O157:H7基因回补方法,为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中esp F基因的调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 espF基因 同源重组 突变株 基因回补
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全球生物产业发展现状及我国生物材料进出口监管状况 被引量:5
9
作者 李小波 黄吉城 陈晓东 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第13期1825-1827,共3页
二十一世纪是生物的世纪,近年来,全球生物医药产业发展迅猛,给全人类带来了巨大的福祉。与此同时,随着生物产业的快速发展,越来越多的生物材料跨境运输给各国监管带来了很大挑战[1]。如何在保证生物材料快速流通的同时,有效防范其潜在... 二十一世纪是生物的世纪,近年来,全球生物医药产业发展迅猛,给全人类带来了巨大的福祉。与此同时,随着生物产业的快速发展,越来越多的生物材料跨境运输给各国监管带来了很大挑战[1]。如何在保证生物材料快速流通的同时,有效防范其潜在生物安全隐患,正成为各国在大力发展生物产业的同时不得不面临的问题[2]。 展开更多
关键词 生物材料 检疫 进出口
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A型肉毒毒素(BoNT/A)表位多肽单克隆抗体的制备及其效价评定 被引量:3
10
作者 韦耀 韩朋 +3 位作者 周旋 孙琦 张宝 万成松 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2013年第18期3510-3513,共4页
目的获得高效价A型肉毒毒素(BoNT/A)表位多肽单克隆抗体。方法利用DNASTAR分析软件,结合Expasy网络服务器,综合参考多参数预测B细胞抗原表位;以多肽作为抗原制备BoNT/AHc表位多肽单克隆抗体,并进行效价鉴定。结果以合成多肽(P1... 目的获得高效价A型肉毒毒素(BoNT/A)表位多肽单克隆抗体。方法利用DNASTAR分析软件,结合Expasy网络服务器,综合参考多参数预测B细胞抗原表位;以多肽作为抗原制备BoNT/AHc表位多肽单克隆抗体,并进行效价鉴定。结果以合成多肽(P1&P2)分别免疫Balb/c小鼠,获得两株单克隆抗体,经鉴定分别是IgG和IgM,效价为10-5~10-6;检测抗体结果显示,纯度较高,特异性好。结论本研究制备出了特异性好、效价较高的A型肉毒毒素单克隆抗体,为获得抗A型肉毒毒素的快速现场检测提供技术支持。 展开更多
关键词 A型肉毒毒素 单克隆抗体 效价
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2013年广东国境口岸入境发热患者的虫媒传染病检测情况分析 被引量:2
11
作者 李小波 黄吉城 +2 位作者 苏锦坤 方盛藩 郑夔 《华南预防医学》 2015年第4期395-396,共2页
目的 对广东国境口岸入境发热患者的虫媒传染病发病情况进行分析,为口岸虫媒传染病防控提供理论指导。方法 收集2013年全年广东国境口岸入境所有发热患者血液样本,以实时荧光RT-PCR法检测登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病病毒、埃博拉病... 目的 对广东国境口岸入境发热患者的虫媒传染病发病情况进行分析,为口岸虫媒传染病防控提供理论指导。方法 收集2013年全年广东国境口岸入境所有发热患者血液样本,以实时荧光RT-PCR法检测登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病病毒、埃博拉病毒、西尼罗病毒核酸;抗凝血涂片镜检,检测疟原虫。结果 2013年度共收集400份广东入境发热患者血液样本,其中的195份抗凝血样本中检出21例输入性恶性疟疾阳性病例,检测阳性率为10.8%;从205份血清中检测出14例输入性登革热病例(阳性率为6.8%)和1例输入性基孔肯雅热阳性病例(阳性率为0.5%)。85.7%的登革热患者(12/14)均来自东南亚地区,85.7%的疟疾患者(18/21)均来自非洲地区,1例基孔肯雅热患者来自东南亚地区(菲律宾)。登革热病例中12例男性,2例女性,年龄为20∽50岁,均有发热症状;疟疾阳性患者全部为男性,年龄为28∽50岁,均有发热症状。结论2013年广东口岸虫媒传染病患者体征各有特点,但均具有发热的共同体征;来自东南亚的旅客传播登革热的风险最大,来自非洲的旅客携带疟疾病原的风险最大;检验检疫部门应大力加强口岸传染病防控力度,严防虫媒传染病传入我国并引起国内疫情暴发。 展开更多
关键词 虫媒病毒 传染病 流行病学
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小鼠结核分枝杆菌耐药模型的建立与评价 被引量:1
12
作者 康健 王丽梅 +7 位作者 王平 赵勇 张薇 韩文东 丁悦娜 孙志平 柏银兰 徐志凯 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2011年第4期320-323,I0020,共5页
目的建立小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染小鼠模型。方法 30只BALB/c雌性小鼠经尾静脉感染结核分枝杆菌耐利福平株每只106CFU,观察小鼠一般状况,并分别在感染后6周、10周、14周处死小鼠,进行脾、肺组织病理切片、抗酸染色、计脏器... 目的建立小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染小鼠模型。方法 30只BALB/c雌性小鼠经尾静脉感染结核分枝杆菌耐利福平株每只106CFU,观察小鼠一般状况,并分别在感染后6周、10周、14周处死小鼠,进行脾、肺组织病理切片、抗酸染色、计脏器荷菌数。结果感染后小鼠体重呈逐渐上升趋势,脏器病理变化随时间推移由急性炎症逐渐转为慢性炎症反应,抗酸染色均为阳性,脏器荷菌数与感染剂量相对应,并至少可持续14周。结论成功建立了小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染动物模型,为其进一步用于结核病防治研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 模型 近交系小鼠
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登革病毒血清型特异单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:1
13
作者 刘杨 张元 +4 位作者 魏艳秋 贾晓娟 陈启军 刘文军 杨利敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2206-2215,共10页
登革病毒(Dengue virus,DENV)是全球传播最为广泛的虫媒病毒,由于缺乏快速鉴别感染病毒血清型的诊断技术,导致异型交叉感染引起重症登革出血热病例居高不下。为实现免疫学方法快速鉴别诊断不同血清型DENV感染,本研究采用哺乳动物细胞293... 登革病毒(Dengue virus,DENV)是全球传播最为广泛的虫媒病毒,由于缺乏快速鉴别感染病毒血清型的诊断技术,导致异型交叉感染引起重症登革出血热病例居高不下。为实现免疫学方法快速鉴别诊断不同血清型DENV感染,本研究采用哺乳动物细胞293T表达并纯化了4种DENV血清型NS1蛋白,免疫小鼠后通过杂交瘤技术制备了针对NS1蛋白的单克隆抗体。利用酶联免疫吸附方法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay,IFA)、免疫斑点杂交试验(Dot blotting)以及蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)确认所制备的单克隆抗体能够有效识别天然病毒NS1以及重组NS1蛋白。获得的单克隆抗体包含2株可识别1–4型DENV NS1蛋白的通用型抗体及3株分别针对DENV-1、DENV-2和DENV-4的血清型特异抗体。以所制备的DENV NS1抗体为基础,采用双抗体夹心ELISA可快速鉴别不同血清型DENV。DENV血清型特异单克隆抗体的制备和甄别DENV血清型ELISA方法的建立为快速鉴别感染DENV血清型的临床诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 登革病毒 NS1蛋白 单克隆抗体 血清型特异
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大肠杆菌O157:H7体内多聚磷酸盐的DAPI荧光定量检测 被引量:1
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作者 杜艳丽 韩宗利 +1 位作者 王湘雨 万成松 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期344-350,共7页
目的应用荧光剂DAPI探索一种直接定量大肠杆菌O157:H7无机多聚磷酸盐(polyP)的可靠方法。方法提取并纯化大肠杆菌O157:H7野生株DNA,DAPI与DNA、polyP45结合,测定360 nm和415 nm激发光的发射光谱;应用共聚焦显微镜,观察细菌DAPI-DNA和DAP... 目的应用荧光剂DAPI探索一种直接定量大肠杆菌O157:H7无机多聚磷酸盐(polyP)的可靠方法。方法提取并纯化大肠杆菌O157:H7野生株DNA,DAPI与DNA、polyP45结合,测定360 nm和415 nm激发光的发射光谱;应用共聚焦显微镜,观察细菌DAPI-DNA和DAPI-polyP复合物荧光,验证DAPI检测polyP的可行性;细菌液氮速冻溶解、-80℃速冻溶解、-20℃速冻溶解、60℃加热10 min、Triton x-100作用、室温下放置后倍比稀释涂平板,观察6种方法对细菌存活的影响;与DAPI作用后,测定荧光值,确定细胞膜通透性的最佳前处理方法;建立标准曲线,测定EHEC野生株、ppk1两个突变株polyP含量。结果应用360 nm激发波长,DAPI-DNA最大发射波长为460 nm;应用415 nm激发波长,DAPI-polyP最大发射波长为550 nm;应用405 nm激发光,收集DAPI-DNA蓝色荧光(425~475 nm),应用488 nm激发光,收集DAPI-polyP绿色荧光(500~560 nm);最佳细菌前处理方法为-80℃速冻后室温下自然溶解;标准曲线为Y=1849X+127.5(R2=0.991),测定各株菌polyP量,其中野生株显著高于ppk1缺失突变株。结论 DAPI荧光定量检测方法具有直接、可靠、易于操作、定量检测等特点,可为进一步研究polyP在肠出血型大肠埃希菌O157:H7中的作用提供技术支持。 展开更多
关键词 无机多聚磷酸盐 DAPI染色 大肠杆菌O157:H7
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三级生物安全实验室操作病原微生物的体会 被引量:1
15
作者 康健 王平 +4 位作者 柏银兰 王丽梅 韩文东 孙志平 徐志凯 《山西医科大学学报(基础医学教育版)》 2011年第5期448-450,共3页
根据生物安全的的分级,结合我国病原生物学实验室的现状,阐述如何在三级生物安全实验室操作病原微生物,实验室出现问题应如何处理,对今后明确操作各种病原微生物的生物安全等级、掌握实验安全技术提供借鉴作用。
关键词 病原微生物 实验室建设 三级生物安全
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中药注射剂对SARS作用的实验研究
16
作者 王满霞 孙刚 王笑红 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期130-131,共2页
为研究中药注射剂BA和JI对SARS病毒的作用,按照国家食品药品监督管理局制定的细胞模型筛选抗SARS病毒药物试验的技术要求,进行了实验研究。三批试验结果显示,BA对SARS病毒无明显的抑制作用,而JI对SARS病毒有较好的抑制作用,其平均半数... 为研究中药注射剂BA和JI对SARS病毒的作用,按照国家食品药品监督管理局制定的细胞模型筛选抗SARS病毒药物试验的技术要求,进行了实验研究。三批试验结果显示,BA对SARS病毒无明显的抑制作用,而JI对SARS病毒有较好的抑制作用,其平均半数抑制浓度为4.4~12.5ul/ml,对SARS病毒抑制率为50%~95.8%,平均治疗指数为5.15。 展开更多
关键词 SARS病毒 注射液 VERO E6细胞
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9%过氧化氢在生物安全三级实验室终末消毒中的应用 被引量:10
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作者 曾志强 杨孝祥 +2 位作者 蒋国斌 刘威龙 张明霞 《中国热带医学》 CAS 2020年第7期649-652,共4页
目的观察9%过氧化氢及相应的过氧化氢发生器对生物安全三级实验室的空间表面消毒灭菌效果,同时探讨生物安全柜,房间排风高效过滤器原位消毒的最佳灭菌方案。方法同时采用枯草芽孢杆菌和嗜热脂肪芽孢杆菌作为生物指示剂(1×106CFU/... 目的观察9%过氧化氢及相应的过氧化氢发生器对生物安全三级实验室的空间表面消毒灭菌效果,同时探讨生物安全柜,房间排风高效过滤器原位消毒的最佳灭菌方案。方法同时采用枯草芽孢杆菌和嗜热脂肪芽孢杆菌作为生物指示剂(1×106CFU/片),使用9%浓度的过氧化氢对生物安全三级实验室的空间表面和实验室的关键防护设备(生物安全柜和高效过滤器)进行不同时间(1.5、3.5、5 h)的消毒效果验证,确定最有效的消毒方法。结果保持室温20~25℃,相对湿度小于55%,使用9%过氧化氢,1.5 h消毒方法可以将房间空间表面的枯草芽孢杆菌和嗜热脂肪芽孢载体完全杀灭,但是无法将生物安全柜高效过滤器和房间的排风高效过滤器的枯草芽孢杆菌和嗜热脂肪芽孢载体完全杀灭;使用9%过氧化氢,3.5、5 h消毒方法可以将房间空间表面,生物安全柜和房间的排风高效过滤器的芽孢杆菌载体完全杀灭。结论 9%过氧化氢和配套的CLEANCube过氧化氢发生器可用于生物安全三级实验室的终末消毒,经过多次消毒验证,最佳条件为:9%过氧化氢,3.5 h。 展开更多
关键词 9%过氧化氢 生物安全实验室 CLEANCube过氧化氢发生器 终末消毒 芽孢菌片
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肠出血型大肠埃希菌O157:H7 ppk基因缺失株的构建及其生物学特性分析 被引量:2
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作者 韩朋 孙琦 +2 位作者 赵素慧 张其威 万成松 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期904-908,共5页
目的利用Red重组系统构建肠出血型大肠埃希菌(EHEC)O157:H7 ppk基因缺失株,并研究其生物特性。方法设计并合成一对同源臂引物,每条引物5'端与ppk基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源,扩增卡那霉素抗性基因片段;制备含有pKD46... 目的利用Red重组系统构建肠出血型大肠埃希菌(EHEC)O157:H7 ppk基因缺失株,并研究其生物特性。方法设计并合成一对同源臂引物,每条引物5'端与ppk基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源,扩增卡那霉素抗性基因片段;制备含有pKD46质粒的EHEC O157:H7 EDL933w感受态细菌,然后将该抗性基因片段电击转化入制备的感受态菌株中;利用pKD46介导的Red重组系统,通过同源重组替换EHEC O157:H7 EDL933w ppk基因,PCR和测序验证;通过革兰染色、测D600值、吉姆萨染色比较EHEC O157:H7 EDL933w野生株和突变株的形态结构、生长能力和黏附性。结果构建了ppk基因缺失并含有卡那霉素抗性的EHEC O157:H7 EDL933w突变菌株(EHEC O157:H7 EDL933wΔppk),初步探索了EHEC O157:H7 EDL933w野生株和突变株的生物学特性。结论本研究运用Red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌O157:H7 ppk基因缺失株,为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中ppk基因的调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 EHEC O157 H7 ppk基因 RED重组系统 基因突变
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鲍氏不动杆菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药性分析 被引量:4
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作者 王宝英 王洪 +7 位作者 孟凡飞 徐晖 付英梅 王金冬 方文娟 尤玉红 钟秀丽 张凤民 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期160-162,共3页
目的分析临床分离的鲍氏不动杆菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药特点及耐药机制。方法采用K-B纸片法测定33株鲍氏不动杆菌对喹诺酮类等21种抗菌药物的耐药性;用PCR技术扩增33株鲍氏不动杆菌的gyrA基因的耐药决定区,PCR产物经纯化后测序与GenB... 目的分析临床分离的鲍氏不动杆菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药特点及耐药机制。方法采用K-B纸片法测定33株鲍氏不动杆菌对喹诺酮类等21种抗菌药物的耐药性;用PCR技术扩增33株鲍氏不动杆菌的gyrA基因的耐药决定区,PCR产物经纯化后测序与GenBank中的标准序列比较,分析其突变情况。结果 33株鲍氏不动杆菌中,8株对环丙沙星耐药,占24.2%,4株对左氧氟沙星耐药占12.1%;对环丙沙星耐药的8个菌株均有gyrA基因突变,导致氨基酸变异为Ser-83→Leu,其中包括对左氧氟沙星耐药的4个菌株;所有对环丙沙星敏感的菌株未出现gyrA基因突变。结论 gyrA基因突变决定鲍氏不动杆菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药。 展开更多
关键词 鲍氏不动杆菌 喹诺酮类 GYRA基因
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