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负载miRNA-27b的BMSCs来源的外泌体治疗实验性骨关节炎 被引量：15
1
作者 苏永蔚 周山健 +4 位作者 肖大伟 田大川 罗华 刘丹平 綦慧 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期726-734,共9页
[目的]探讨负载miRNA-27b的间充质干细胞来源的外泌体(MSC-27b-Exos)对炎症环境下的软骨细胞的保护作用。[方法]体外利用10 ng/ml白介素-1β(IL-1β)建立软骨细胞炎症环境模型,采用超速离心法收集外泌体,分别以80μg/ml的MSC-27b-Exos,... [目的]探讨负载miRNA-27b的间充质干细胞来源的外泌体(MSC-27b-Exos)对炎症环境下的软骨细胞的保护作用。[方法]体外利用10 ng/ml白介素-1β(IL-1β)建立软骨细胞炎症环境模型,采用超速离心法收集外泌体,分别以80μg/ml的MSC-27b-Exos,普通外泌体MSC-Exos、inhibitor沉默的MSC-27boff-Exos作用炎症环境下的软骨细胞,并设PBS处理为对照组,检测各处理组软骨细胞凋亡水平,Western blot检测软骨细胞中MMP-13,及凋亡蛋白Caspase的表达水平。体内实验:20只雄性SD大鼠随机分为4组,建立创伤性骨关节炎(post-traumatic osteoarthritis, PTOA)模型,分别注射等量的MSC-miR27b-Exos、MSC-miR27b^(off)-Exos,并设立单纯PBS组和假手术组,6周后取材,观察关节软骨形态;ELISA检测关节液中IL-1β、TNF-α的含量;免疫组化对比各组Ⅱ型胶原表达。[结果]体外实验中,MSC-27b-Exos组的软骨细胞增殖能力较MSC-miR27b^(off)-Exos组增强,较空白组明显旺盛(P<0.05),在炎症环境下软骨细胞凋亡明显减弱(P<0.05),MSC-27b-Exos组软骨细胞中cleave-Caspase-9水平降低(P<0.05),cleave-Caspase-3水平降低(P<0.05),MMP-13相对含量减少。SD大鼠体内实验显示, MSC-27bExos组对软骨缺损修复效果优于空白组和MSC-miR27b^(off)-Exos组。MSC-27b-Exos组关节液中IL-1β、TNF-α的含量低于空白组,明显低于MSC-27b^(off)-Exos组。[结论]在实验型SD大鼠PTOA模型中,利用MSC-27b-Exos关节腔内注射具有明显抗炎的作用和减缓关节软骨退行性变。 展开更多
关键词 间充质干细胞 外泌体 骨关节炎 miR-27b 基质金属蛋白酶13(MMP-13)
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关节镜联合富含血小板血浆治疗半月板体部及后根部损伤的术后疗效 被引量：18
2
作者 闫理想 张正 +3 位作者 张德志 宋猛 綦慧 刘丹平 《昆明医科大学学报》 CAS 2020年第3期50-56,共7页
目的对人体膝关节半月板体部及后根部损伤类型的研究,探讨关节镜下缝合联合关节腔内注射富含血小板血浆(prp)在半月板损伤治疗中的价值,并对手术效果进行分析。方法选取2016年7月至2018年10月因半月板体部及后根部损伤就诊于锦州医科大... 目的对人体膝关节半月板体部及后根部损伤类型的研究,探讨关节镜下缝合联合关节腔内注射富含血小板血浆(prp)在半月板损伤治疗中的价值,并对手术效果进行分析。方法选取2016年7月至2018年10月因半月板体部及后根部损伤就诊于锦州医科大学附属第一医院的94例患者,根据治疗方法的不同分成二组:其中关节镜下缝合联合关节腔内注射prp47例设置为prp组,关节镜下半月板缝合47例设置为缝合组。二组均接受门诊及电话随访12个月,在最后一次随访时利用Lysholm评分,视觉模拟评分法(VAS评分),IKDC2000评分评估患者膝关节功能,并观察膝关节活动度及术后优良率。结果术后12个月,PRP组末次随访时Lysholm总评分(94.04±7.55)分高于缝合组(89.17±7.18)分差异有统计学意义(P<0.05)。VAS术后评分PRP组(1.00±0.00)分与缝合组(1.55±0.50)分相比,PRP组显著改善(P<0.05)。IKDC2000评分PRP组随访时(86.89±1.78)分与缝合组(85.26±1.66)分相比差异无统计学意义(P>0.05)。末次随访膝关节活动度PRP组(135.60±4.35)分较缝合组(124.98±6.85)分改善明显,差异有统计学意义(P<0.05)。术后12个月,PRP组的优良率(87.50%)和缝合组优良率(85.11%)相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论关节镜下半月板缝合联合术后关节腔内注射富含血小板血浆,有效闭合撕裂缘之间距离,有效促进缝合术后半月板的愈合,在膝关节疼痛及活动度的改善方面作用显著,治疗方法及术后治疗效果可靠。 展开更多
关键词 半月板撕裂 关节镜 缝合修补术 富含血小板血浆
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膝关节半月板体部及后根部损伤关节镜下缝合术疗效分析 被引量：3
3
作者 闫理想 张正 +3 位作者 宋猛 张德志 卢伟 刘丹平 《锦州医科大学学报》 CAS 2020年第2期80-85,共6页
目的探讨关节镜下缝合修复术在半月板体部及后根部损伤治疗中的价值,并对手术效果进行分析。方法回顾性分析2016年9月至2018年9月因半月板体部及后根部损伤就诊于锦州医科大学附属第一医院的86例患者。根据手术方法不同分为缝合组和部... 目的探讨关节镜下缝合修复术在半月板体部及后根部损伤治疗中的价值,并对手术效果进行分析。方法回顾性分析2016年9月至2018年9月因半月板体部及后根部损伤就诊于锦州医科大学附属第一医院的86例患者。根据手术方法不同分为缝合组和部分切除组,各43例。2组均接受门诊及电话随访14个月,在最后一次随访时利用Lysholm评分、IKDC2000评分评估患者膝关节功能,并观察术后优良率及并发症发生率。结果术后14个月随访结果显示:缝合组Lysholm总评分(92.26±7.58)高于部分切除组(82.95±7.46)差异有统计学意义(P<0.05)。IKDC2000评分缝合组(90.00±3.07)高于部分切除组(75.72±5.44)差异有统计学意义(P<0.05)。膝关节活动度缝合组(136.44±3.36)较部分切除组(124.60±7.00)改善明显,差异有统计学意义(P<0.05)。缝合组的优良率(88.37%)明显高于部分切除组(69.77%),差异有统计学意义(P<0.05)。两组并发症发生率相比(χ2=2.205,P=0.138)差异无统计学意义(P>0.05)。结论关节镜下半月板缝合修复术,为半月板的愈合提供了稳定可靠的愈合条件,治疗方法及治疗效果可靠。 展开更多
关键词 半月板损伤 关节镜 缝合修复术 部分切除术
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干细胞外泌体对骨质疏松大鼠骨生成的影响 被引量：5
4
作者 綦惠 黄霸 +4 位作者 杰永生 郑蕊 舒雄 陈磊 刘丹平 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期726-730,共5页
[目的]探讨间充质干细胞源性外泌体对骨质疏松大鼠骨生成的调节作用。[方法]体外获取和鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)以及BMSCs源性外泌体(exosomes derived from BMSCs,BMSC-Exos)。采用CCK8法... [目的]探讨间充质干细胞源性外泌体对骨质疏松大鼠骨生成的调节作用。[方法]体外获取和鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)以及BMSCs源性外泌体(exosomes derived from BMSCs,BMSC-Exos)。采用CCK8法检测BMSC-Exos对BMSCs增殖的影响,碱性磷酸酶活性分析BMSC-Exos对BMSCs成骨转化的作用。成年雌性SD大鼠随机分成三组,OVX组与OVX+Exos组行双侧卵巢切除术,前者尾静脉注射PBS,后者尾静脉注射BMSC-Exos;而Control组为假手术组,仅切开背部皮肤后缝合,术后不给予任何药物。术后取股骨进行HE染色和Micro-CT观察。[结果]BMSCs具有成骨、成脂和成软骨分化能力。BMSC-Exos呈近似圆形,表达CD63、CD81和CD9。体外实验部分,BMSC-Exos与BMSCs共培养24 h和48 h,BMSCs增殖显著增强(P<0.05)。成骨诱导7 d后,BMSC-Exos组碱性磷酸酶活性明显上调。体内实验部分,OVX组骨密度(bone mineral density,BMD)下降(P<0.05),骨小梁稀疏,变细,间隙增大,注射BMSC-Exos后,BMD显著升高(P<0.05),骨小梁增粗,数量增多。[结论]BMSC-Exos能够促进骨生成,对骨质疏松具有一定程度的治疗作用。 展开更多
关键词 间充质干细胞 外泌体 骨质疏松
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骨髓间充质干细胞源性外泌体对体外培养的软骨细胞增殖和迁移的调节作用 被引量：7
5
作者 綦惠 刘丹平 +4 位作者 田大川 肖大伟 苏永蔚 李海乐 舒雄 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期40-45,共6页
目的:探讨骨髓间充质干细胞源性外泌体对体外培养的软骨细胞增殖和迁移的调节作用。方法:体外分别培养新西兰兔的骨髓间充质干细胞(BMSCs)和软骨细胞;超高速离心法收集BMSCs源性外泌体(BMSC-Exos);透射电镜观察BMSC-Exos的形状和大小;We... 目的:探讨骨髓间充质干细胞源性外泌体对体外培养的软骨细胞增殖和迁移的调节作用。方法:体外分别培养新西兰兔的骨髓间充质干细胞(BMSCs)和软骨细胞;超高速离心法收集BMSCs源性外泌体(BMSC-Exos);透射电镜观察BMSC-Exos的形状和大小;Western blot鉴定BMSC-Exos表面标记;MTT法检测不同剂量的BMSC-Exos对软骨细胞增殖的调节作用,以及给予IL-1β刺激后软骨细胞增殖的变化;荧光显微镜下观察软骨细胞对BMSC-Exos的摄取;划痕试验分析BMSC-Exos对软骨细胞迁移的调节作用。结果:获取的BMSC-Exos呈近似球形,直径40～100 nm,表面表达CD63和CD81。40μg/mL、80μg/mL和120μg/mL含量的外泌体均可显著促进软骨细胞增殖(P<0.05),80μg/mL与120μg/mL含量外泌体的作用没有显著差异。BMSC-Exos能够被软骨细胞摄取。BMSC-Exos与软骨细胞共培养,划痕愈合率由44%上升至63%(P<0.05)。结论:BMSC-Exos能够促进体外培养的软骨细胞增殖和迁移,具有作为一种新型非细胞治疗方法替代MSCs细胞治疗方法的可能。 展开更多
关键词 外泌体 间充质干细胞 软骨细胞
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联合应用软骨再生支架与突变型HIF-1α修饰BMSCs分泌的外泌体对晚期软骨缺损修复的促进作用 被引量：8
6
作者 田大川 李海乐 +4 位作者 肖大伟 周山健 苏永蔚 刘丹平 綦惠 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期216-222,共7页
目的:探讨突变型低氧诱导因子1α(HIF-1α)修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的外泌体对软骨细胞的保护作用,阐明其联合软骨再生支架促进晚期软骨缺损修复的可能机制。方法:采用超速离心法从野生型HIF-1α和突变型HIF-1α修饰的BMSCs中... 目的:探讨突变型低氧诱导因子1α(HIF-1α)修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的外泌体对软骨细胞的保护作用,阐明其联合软骨再生支架促进晚期软骨缺损修复的可能机制。方法:采用超速离心法从野生型HIF-1α和突变型HIF-1α修饰的BMSCs中分别提取外泌体(BMSCs-ExoWT与BMSCs-ExoMU),同时对其进行鉴定。在体外,采用白细胞介素1β(IL-1β)诱导软骨细胞发生炎症反应,分别将等量PBS、BMSCs-ExoWT(80mg·L-1)和BMSCs-ExoMU(80mg·L-1)分别与炎症反应下的软骨细胞共培养,实验分为空白组、炎症组、BMSCs-ExoWT组和BMSCs-ExoMU组,利用Hoechst33342染色检测各组软骨细胞凋亡小体数目;应用Western blotting法检测各组软骨细胞中AKT/p-AKT、ERK/p-ERK和p38/p-p38表达水平。12只新西兰兔随机分为4组,建立兔膝关节软骨缺损模型,分别将等量的生理盐水、支架+生理盐水、支架+BMSCs-ExoWT和支架+BMSCs-ExoMU作用于4组兔软骨缺损处。术后6周取材,通过大体观察、苏木素-伊红(HE)染色和蕃红O-固绿染色观察和比较各组软骨缺损的修复效果。结果:成功提取并鉴定BMSCs-ExoWT与BMSCs-ExoMU,电镜观察外泌体形态为近圆形,直径为40~100nm;Western blotting法显示两者分别表达特异性蛋白CD63和CD81。在体外实验中,炎症环境下BMSCs-ExoMU组软骨细胞凋亡小体数目低于炎症组和BMSCs-ExoWT组(P<0.01);Western blotting法,BMSCs-ExoMU组和BMSCs-ExoWT组软骨细胞中p-ERK1和p-ERK2水平低于炎症组(P<0.05),p-AKT和p-p38水平高于炎症组(P<0.05);且BMSCs-ExoMU的作用强于BMSCs-ExoWT(P<0.05)。在兔膝关节晚期软骨缺损模型中,支架+BMSCs-ExoMU组缺损处修复效果优于空白组、支架组和支架+BMSCs-ExoWT组。结论:软骨支架与BMSCs-ExoMU共同作用于软骨缺损处可促进缺损修复。 展开更多
关键词 软骨再生支架 骨髓间充质干细胞 外泌体 软骨缺损 软骨细胞 白细胞介素1Β
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BMP-2转染间充质干细胞上清对软骨的影响 被引量：3
7
作者 黄霸 苏永蔚 +3 位作者 高艺萌 罗华 刘丹平 綦惠 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期1692-1697,共6页
[目的]观察从腺病毒-骨形态发生蛋白-2-绿色荧光蛋白(Ad-BMP-2-GFP)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)获取的含有BMP-2的上清对软骨细胞体外凋亡和体内再生的影响。[方法]通过Ad-BMP-2-GFP转染BMSCs使BMP-2高表达,采用冰冻干燥法浓缩BMSCs细... [目的]观察从腺病毒-骨形态发生蛋白-2-绿色荧光蛋白(Ad-BMP-2-GFP)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)获取的含有BMP-2的上清对软骨细胞体外凋亡和体内再生的影响。[方法]通过Ad-BMP-2-GFP转染BMSCs使BMP-2高表达,采用冰冻干燥法浓缩BMSCs细胞上清至10倍浓度,过滤后-20℃储存备用。体外实验:加入IL-1β(18 ng/ml)建立软骨细胞体外炎症环境,施加转染后和未转染浓缩上清,并以PBS处理为空白对照组,流式细胞术检测各处理组软骨细胞凋亡水平。体内实验:20只雄性新西兰大白兔随机分为4组,除假手术组外,其他3组建立兔膝关节软骨缺损模型,分别注射等量的纯生理盐水、转染组和未转染的培养上清。6周后取材,通过大体标本和番红O固绿染色观察关节软骨缺损修复效果。[结果]体外实验显示,转染上清组的软骨细胞凋亡水平较未转染上清组和空白对照组明显减弱(P<0.05);体内实验显示,转染上清组对软骨缺损修复效果优于未转染上清组和单纯生理盐水组。[结论]通过Ad-BMP-2-GFP转染BMSCs,获取含有BMP-2的上清可以抑制体外炎症环境下软骨细胞凋亡,促进体内软骨缺损修复。 展开更多
关键词 间充质干细胞 BMP-2 基因转染 培养上清 细胞凋亡 再生
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两种方法治疗股骨干髓内钉固定后骨不连的荟萃分析 被引量：8
8
作者 罗华 薛锋 +2 位作者 苏永蔚 赵勇 吴鸣 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期525-529,共5页
[目的]比较保留髓内钉附加侧板与更换髓内钉治疗股骨干骨折髓内钉固定后的骨不连的疗效。[方法]运用计算机检索EMBASE、PubMed、Cochrane Library、Clinical databases、中国知网和万方数据库,收集2018年4月前国内外公开发表的有关保留... [目的]比较保留髓内钉附加侧板与更换髓内钉治疗股骨干骨折髓内钉固定后的骨不连的疗效。[方法]运用计算机检索EMBASE、PubMed、Cochrane Library、Clinical databases、中国知网和万方数据库,收集2018年4月前国内外公开发表的有关保留髓内钉附加侧板与更换髓内钉治疗股骨干骨折髓内钉固定后的骨不连的临床疗效对比的文献。通过阅读标题、摘要与全文,剔除无关文献,严格评价纳入研究的方法学质量,并提取有关数据,并用RevMan5.3软件进行统计分析。[结果]本研究共纳入了19个研究报告,共有1 239位患者,其中保留髓内钉附加侧板治疗组608例,更换髓内钉治疗组634例。荟萃分析结果显示,保留髓内钉附加侧板组较更换髓内钉组手术时间更短(P<0.001),术中出血更少(P<0.001)。此外,保留髓内钉附加侧板组较更换髓内钉组骨不连愈合率更高(P<0.001)、骨不连的愈合时间更短(P<0.001),但是两组术后感染率方面差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]保留髓内钉附加侧板治疗股骨干骨折髓内钉固定后的骨不连相对于更换髓内钉具有更好的疗效。 展开更多
关键词 股骨干 骨不连 更换髓内钉 附加侧板 荟萃分析
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突变型低氧诱导因子-1α修饰骨髓间充质干细胞来源的外泌体联合软骨再生支架治疗家兔早期软骨缺损 被引量：2
9
作者 肖大伟 刘丹平 +3 位作者 田大川 周山健 李海乐 綦惠 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期888-891,共4页
目的 探讨突变型低氧诱导因子-1α（HIF-1α）修饰的骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源的外泌体（BMSC-Exo）对关节软骨损伤的修复作用.方法 BMSC和软骨细胞培养;超高速离心法提取突变型HIF-1 α修饰的BMSC分泌的外泌体（BMSC-Exomu）及正... 目的 探讨突变型低氧诱导因子-1α（HIF-1α）修饰的骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源的外泌体（BMSC-Exo）对关节软骨损伤的修复作用.方法 BMSC和软骨细胞培养;超高速离心法提取突变型HIF-1 α修饰的BMSC分泌的外泌体（BMSC-Exomu）及正常BMSC分泌的外泌体（BMSC-Exonor）;噻唑蓝（MTT）法检测软骨细胞活性;Western blot分析BMSC-Exos调节细胞凋亡过程中的作用.构建早期软骨缺损动物模型,并分为4组：单纯缺损组、支架植入治疗组、支架＋BMSC-Exonor组、支架＋BMSC-Exomu组.术后6周取材,通过大体观察、苏木素-伊红（HE）染色、蕃红O-快绿染色,比较各组软骨缺损的修复效果.结果 MTT法与Western blot结果显示,同对照组比较,BMSC-Exonor能对TNF-α介导的软骨细胞凋亡发挥作用,差异有统计学意义（P=0.006）.而BMSC-Exomu效果更为显著（P=0.001）.动物实验发现,与其他各组比较,支架＋BMSC-Exomu组的软骨修复作用最强、膝关节炎的症状较其他组均有明显好转,其损伤面透明软骨形成最多,软骨基质分泌最多.结论 在TNF-α诱导的软骨细胞凋亡中,与BMSC-Exonor比较,BMSC-Exomu对软骨细胞具有更强的保护作用.BMSC-Exo的应用对于家兔早期软骨缺损具有较好的辅助治疗效果. 展开更多
关键词 外泌体 低氧诱导因子-1Α 肿瘤坏死因子-α 细胞凋亡 软骨缺损
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