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miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH23'非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达 被引量：2
1
作者 刘萃萃 王璐璐 +4 位作者 赵卫卫 彭攸 王玉平 孙振亮 冯景 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期368-372,共5页
目的重组过表达EZH2基因3'非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名称,并对其进行... 目的重组过表达EZH2基因3'非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar和TargetScan无法预测。Real-time PCR发现,与乳腺癌细胞MCF-7相比,正常乳腺细胞株HBL-100中miR-217、miR-329-1、miR-487b高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b及miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论在重组过表达EZH2 3'-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组织中存在差异表达。 展开更多
关键词 乳腺癌 EZH2 慢病毒文库 EZH2
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EZH2基因3'非翻译区慢病毒载体构建及重组体筛选 被引量：1
2
作者 赵卫卫 彭攸 +5 位作者 李晓娇 卢晓佳 王玉平 刘萃萃 王璐璐 冯景 《检验医学》 CAS 2013年第6期511-515,共5页
目的构建携带人EZH2基因3'非翻译区(3'UTR)的慢病毒筛选载体并实现该重组体在人乳腺癌MCF-7中稳定整合,为下一步MicroRNAs(miRNAs)筛选奠定基础。方法从组织中提取并用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出EZH2基因3'UTR... 目的构建携带人EZH2基因3'非翻译区(3'UTR)的慢病毒筛选载体并实现该重组体在人乳腺癌MCF-7中稳定整合,为下一步MicroRNAs(miRNAs)筛选奠定基础。方法从组织中提取并用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出EZH2基因3'UTR,构建携带EZH2基因3'UTR的重组慢病毒载体CTX-Lentivirus-EZH2 3'UTR,脂质体法将重组的慢病毒载体和包装载体混合物共转染工具细胞293T细胞,包装产生慢病毒颗粒。用裂解液裂解病毒颗粒,根据慢病毒载体上的CMV启动子表达量检测病毒滴度。用慢病毒颗粒感染乳腺癌MCF-7细胞后,通过嘌呤霉素筛选稳定整合的乳腺癌细胞MCF-7,用Real-Time PCR和Western blotting方法检测EZH2基因3'UTR是否整合入细胞MCF-7中。结果 PCR扩增检测阳性菌落和测序结果证实,EZH2基因3'UTR成功定向克隆到慢病毒载体上。Real-Time PCR检测病毒滴度为4.3×109拷贝/mL。筛选稳定整合MCF-7细胞的最佳浓度为0.2μg/mL。重组慢病毒转导MCF-7后,Real-Time PCR和Western blotting方法分别检测EZH2基因3'UTR整合到乳腺癌细胞MCF-7基因组中。慢病毒感染实验组和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建携带EZH2基因3'UTR慢病毒筛选载体,实现重组体在乳腺癌MCF-7细胞中稳定整合。 展开更多
关键词 EZH2 非翻译区 慢病毒载体 MCF-7
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多基因甲基化对散发性乳腺癌的诊断价值 被引量：2
3
作者 王玉平 吕军 +4 位作者 陈咏梅 汤显斌 谢飞 张吉才 冯景 《郧阳医学院学报》 2010年第6期491-499,499,共6页
目的:探讨血清表观遗传学改变即DNA甲基化对散发性乳腺肿瘤的诊断价值。方法:用甲基化特异PCR检测了102例散发性乳腺癌患者及20例健康对照者血清BRCA1,p16和14-3-3 sigma基因甲基化状况。结果:102例散发性乳腺癌患者血清中p16基因甲基... 目的:探讨血清表观遗传学改变即DNA甲基化对散发性乳腺肿瘤的诊断价值。方法:用甲基化特异PCR检测了102例散发性乳腺癌患者及20例健康对照者血清BRCA1,p16和14-3-3 sigma基因甲基化状况。结果:102例散发性乳腺癌患者血清中p16基因甲基化率为29%,BRCA1为32%,14-3-3 sigma为82%,与肿瘤分级和ER受体表达明显相关。p16基因甲基化与组织分型有关,p16与BRCA1基因甲基化和PR相关,14-3-3 sigma基因甲基化与淋巴结转移有关。70%p16、75.8%BRCA1甲基化患者显示血清CEA水平升高,69.7%显示CA153水平升高。多因素分析发现,血清BRCA1和/或p16甲基化可以预示预后不良,死亡风险指数达6.0。结论:散发性乳腺癌患者BRCA1/p16基因甲基化作为肿瘤标志物明显优于蛋白类(CEA、CA153)标志物。 展开更多
关键词 基因甲基化 散发性乳腺癌 肿瘤标志物
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EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达及意义 被引量：7
4
作者 武萍萍 陶然 +7 位作者 彭攸 赵卫卫 刘萃萃 王璐璐 胡朝晖 王玉平 孙振亮 冯景 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期50-55,共6页
目的探讨EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达特点及与主要临床病理参数的关系。方法采用免疫组化SP法,检测131例三阴性乳腺癌、78例非三阴性乳腺癌及65例癌旁组织中EZH2及DNMT1的表达情况。采用多因素logistic回归分析EZH2及DNMT1阳性... 目的探讨EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达特点及与主要临床病理参数的关系。方法采用免疫组化SP法,检测131例三阴性乳腺癌、78例非三阴性乳腺癌及65例癌旁组织中EZH2及DNMT1的表达情况。采用多因素logistic回归分析EZH2及DNMT1阳性表达有关的因素,Spearman等级相关分析三阴性乳腺癌中EZH2及DNMT1表达的相关关系。结果 EZH2蛋白在三阴性乳腺癌组织、非三阴性乳腺癌组织和癌旁组织的阳性表达率分别为86.3%、89.7%和40.0%;DNMT1蛋白在三种组织中的阳性表达率分别为63.4%、66.6%和44.6%;两种蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于癌旁组织(P<0.05);两种蛋白在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织间表达差异无统计学意义。在三阴性乳腺癌中,EZH2阳性表达与肿瘤组织学分级、肿瘤直径、淋巴结是否转移有关(P<0.05),DNMT1的表达与肿瘤组织学分级、淋巴结是否转移有关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,肿瘤组织学分级为影响EZH2及DNMT1表达的最主要因素;三阴性乳腺癌中DNMT1与EZH2的表达呈正相关(r=0.34,P<0.01)。结论 EZH2与DNMT1的高表达与三阴性乳腺癌的分化、生长、转移有关,且两者在三阴性乳腺癌中的表达呈正相关,其联合检测可能对三阴性乳腺癌的预后判断更有价值。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 组蛋白甲基转移酶同源序列2增强子 DNA甲基转移酶1 免疫组织化学
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EZH2蛋白在三阴性乳腺癌中的表达及意义 被引量：3
5
作者 武萍萍 梁志强 +2 位作者 李仁哲 陶然 冯景 《检验医学与临床》 CAS 2020年第12期1644-1647,共4页
目的探索组蛋白甲基转移酶同源序列2增强子(EZH2)蛋白在三阴性乳腺癌中的表达特点及其与主要临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学SP法,检测2010年12月至2019年5月山东省济宁市第一人民医院和广州金域检验中心三阴性、非三阴性乳... 目的探索组蛋白甲基转移酶同源序列2增强子(EZH2)蛋白在三阴性乳腺癌中的表达特点及其与主要临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学SP法,检测2010年12月至2019年5月山东省济宁市第一人民医院和广州金域检验中心三阴性、非三阴性乳腺癌及三阴性乳腺癌患者的癌旁组织中EZH2蛋白的表达情况。采用SPSS20.0统计软件进行数据分析,采用χ2检验比较三阴性乳腺癌患者不同临床病理特征与EZH2表达情况的关系,采用多因素logistic回归分析与EZH2蛋白阳性表达有关的病理特征。结果EZH2蛋白在三阴性、非三阴性乳腺癌组织和癌旁组织的阳性表达率分别为84.7%、79.8%和40.0%;该蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);在三阴性乳腺癌中,EZH2蛋白阳性表达与组织学分级、肿瘤直径、淋巴结转移有关,其中组织学分级为影响EZH2蛋白表达的主要因素。结论EZH2蛋白的高表达与三阴性乳腺癌与分化、生长、转移有一定的关系,检测该蛋白可能对三阴性乳腺癌的预后判断更有价值。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 非三阴性乳腺癌 EZH2 免疫组织化学
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人EZH2基因编码区及3'非翻译区融合蛋白重组慢病毒表达载体构建及其在293T细胞中的表达 被引量：4
6
作者 彭攸 赵卫卫 +4 位作者 李晓娇 王玉平 卢晓佳 邬美玉 冯景 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2012年第24期8151-8155,共5页
目的构建携带人EZH2基因编码区(coding region,CDS)及3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)融合红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)重组慢病毒表达载体,使mCherry-EZH2融合蛋白在293T细胞中稳定表达。方法运用I... 目的构建携带人EZH2基因编码区(coding region,CDS)及3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)融合红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)重组慢病毒表达载体,使mCherry-EZH2融合蛋白在293T细胞中稳定表达。方法运用In-Fusion定向克隆技术构建人EZH2基因CDS区及3'UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体,测序无误后抽提质粒,转染293T细胞,包装病毒,测定病毒滴度。Western blot检测mCherry-EZH2的表达。结果测序证实重组慢病毒表达载体基因序列完全正确;病毒颗粒包装成功,滴度为1.59×109IU/ml;Western blot检测293T细胞中可以表达mCherry-EZH2融合蛋白。结论成功构建人EZH2基因CDS区及3'UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体及病毒,其mCherry-EZH2可以在293T细胞中稳定表达。为进一步分析可能调控EZH2基因CDS区及3'UTR表达的miRNA奠定前期实验基础。 展开更多
关键词 3’非翻译区 EZH2基因 红色荧光蛋白 慢病毒载体
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