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人重组粒细胞集落刺激因子突变体的构建、表达和其体内外生物学活性研究 被引量：5
1
作者 李芳 莫晓宁 +6 位作者 张颖妹 袁岚 饶严 范中玉 袁勇 曹志敏 马大龙 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期319-322,共4页
目的为提高人重组粒细胞集落刺激因子（ｈｕｍａｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ｒｈＧ－ＣＳＦ）的稳定性和活性，对ｒｈＧ－ＣＳＦ进行改造和体内、外活性研究。... 目的为提高人重组粒细胞集落刺激因子（ｈｕｍａｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ｒｈＧ－ＣＳＦ）的稳定性和活性，对ｒｈＧ－ＣＳＦ进行改造和体内、外活性研究。方法利用定向点突变技术，将人重组粒细胞集落刺激因子第１７位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列，ＤＮＡ序列分析证明后，在大肠杆菌中表达突变蛋白。利用Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞株ＮＦＳ－６０，对在不同温度及在人血浆中保存的Ｇ－ＣＳＦ蛋白（Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７）和野生型的Ｇ－ＣＳＦ进行活性测定。腹腔注射后小鼠外周血白细胞计数检测其体内生物学活性。结果ＤＮＡ序列分析表明１７位半胱氨酸突变为丙氨酸，并在大肠杆菌中表达成功Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７。纯化的突变蛋白对ＮＦＳ－６０细胞具有刺激活性；与野生型Ｇ－ＣＳＦ相比，在各种温度储存的突变蛋白保留更高的活性，与人血浆孵育５０小时后突变蛋白仍保持活性；小鼠一次性体内注射突变蛋白后外周血白细胞数明显高于野生型Ｇ－ＣＳＦ。结论Ｇ－ＣＳＦ突变体（Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７）较野生型的Ｇ－ＣＳＦ具有更高的体外稳定性和体内造血刺激活性。 展开更多
关键词 定点突变 zhg-csf 表达 生物学活性
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