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VopD对副溶血弧菌功能表型的影响及其多克隆抗体的制备
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作者 许立慧 曹钰莹 +4 位作者 潘富强 李婉君 汤芳 戴建君 薛峰 《微生物学通报》 北大核心 2025年第9期4025-4037,共13页
【背景】副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是一种重要的人兽共患病病原菌,能够引发食源性肠胃炎。Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion systems,T3SS)是一种复杂的纳米机器,能够将效应蛋白递送至真核细胞。副溶血弧菌有2套Ⅲ型分泌系统... 【背景】副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是一种重要的人兽共患病病原菌,能够引发食源性肠胃炎。Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion systems,T3SS)是一种复杂的纳米机器,能够将效应蛋白递送至真核细胞。副溶血弧菌有2套Ⅲ型分泌系统(T3SS1和T3SS2),其中VopD作为T3SS1的易位子,参与效应蛋白的递送,然而VopD的具体生物学功能尚未阐明。【目的】进一步探讨VopD在副溶血弧菌致病机制中的作用,并系统评估对副溶血弧菌生物学特性的影响。【方法】以POR-3为基础菌株,通过同源重组法构建vopD基因缺失株与回补株,明确vopD缺失对副溶血弧菌生长能力、生物被膜形成能力、溶血活性以及细胞黏附能力的影响;同时,检测vopD缺失及回补株对HeLa细胞的毒性作用,并通过制备多克隆抗体检测VopD蛋白的分泌情况。【结果】vopD基因的缺失对副溶血弧菌的生长能力无显著影响,但显著降低了其生物被膜形成能力、溶血活性以及细胞黏附能力。相较于菌株POR-3,vopD基因缺失株对HeLa细胞的毒性作用在感染后60、90、120 min均显著下降,而回补株的毒性恢复至野生株水平;通过构建原核表达载体,诱导表达并纯化VopD蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,免疫印迹分析显示在vopD缺失株和T3SS1功能缺失株POR-2中未检测到分泌的VopD蛋白,并且菌株POR-3、RIMD 2210633以及vopD回补株中成功检测到VopD蛋白分泌,表明VopD蛋白由T3SS1分泌。【结论】vopD基因参与调控副溶血弧菌生物被膜形成、溶血活性和细胞黏附功能,同时影响副溶血弧菌对HeLa细胞的毒性作用,制备的多克隆抗体可有效检测细菌中VopD的分泌与表达。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 Ⅲ型分泌系统 vopd基因 生物学特性 多克隆抗体制备
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