基于重组酶聚合酶扩增-CRISPR/Cas12a的沙门氏菌可视化检测方法的建立 被引量：3

1

作者 黄建飞 陈晶 +3 位作者 张倩 肖承荣 吴燕蕙 赖心田 《食品安全质量检测学报》 2025年第8期122-130,共9页

目的建立基于重组酶聚合酶扩增-CRISPR/Cas12a的沙门氏菌可视化检测方法。方法本研究将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术与成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白12a(clustered regularly interspaced... 目的建立基于重组酶聚合酶扩增-CRISPR/Cas12a的沙门氏菌可视化检测方法。方法本研究将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术与成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)系统相结合,以沙门氏菌invA作为目标基因,设计并合成RPA引物和CRISPR引导RNA(CRISPR-derived RNA,crRNA),通过荧光法和试纸条两种方法读取结果。对优化的RPA-CRISPR/Cas12检测体系进行特异性和灵敏度实验,并应用于食品样本检测。结果本研究成功研制纳米金核酸试纸条,建立的RPA-CRISPR/Cas12a体系可在1.5 h内特异性完成沙门氏菌的检测,灵敏度为80 CFU/mL。利用此方法对21个食品样本进行检测,荧光法、试纸条法与国家标准法检测结果完全一致,沙门氏菌检出率为4.8%。结论本研究建立的沙门氏菌RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法具有高特异性和灵敏度,在沙门氏菌的现场快速检测方面具有应用价值。 展开更多

关键词 沙门氏菌 成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白12a 试纸条 重组酶聚合酶扩增 可视化检测

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松茸DNA检测试剂及基因可视化试纸条的研究

2

作者 周亭亭 李嘉宜 +4 位作者 张佳睿 李明成 尹荣 高丽君 黄鑫 《特产研究》 2025年第6期123-129,共7页

本研究旨在建立松茸DNA指纹鉴定技术,研制特异性高、稳定性好的松茸DNA检测试剂,实现基因检测试纸条可视化检测。本试验将样品提取DNA,并采用交叉试验和控制变量法进行聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)参数优化,包括退火... 本研究旨在建立松茸DNA指纹鉴定技术,研制特异性高、稳定性好的松茸DNA检测试剂,实现基因检测试纸条可视化检测。本试验将样品提取DNA,并采用交叉试验和控制变量法进行聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)参数优化,包括退火时间T、退火温度D和循环数X。PCR产物进行DNA双向测序,以验证引物的特异性和准确性;通过建立松茸DNA指纹鉴定技术,并对松茸及其伪品进行真伪鉴定;研发松茸DNA检测试剂,并对该试剂进行性能评价,进行引物基因检测试纸条的可视化检测。结果表明,采用本研究建立DNA提取方法提取DNA A_(260)/A_(280)平均值为1.73,质量浓度平均值为225 ng/L;PCR最优参数D为55℃、T为30 s、X为26;通过Blast比对,DNA双向测序序列与松茸基因同源性为100%;采用该技术可成功鉴定松茸及其常见伪品;松茸DNA检测试剂具有良好的特异性、重现性和稳定性;可视化试纸条可区分松茸及其部分伪品,直观简便。本研究所建立的松茸DNA指纹鉴定技术和松茸DNA检测试剂以及可视化试纸条,具有特异性强、准确度高、操作简单等特点,可作为松茸鉴定的可行可信方法。 展开更多

关键词 松茸DNA检测试剂 DNA测序 可视化试纸条

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试纸目测比色法快速检测末梢血糖 被引量：4

3

作者 赵春艳 冯波 +6 位作者 刘薇群 吴颖燏 胡洁 陈婕 张晶 朱嘉鹛 冯晓萍 《解放军护理杂志》 2010年第14期1114-1115,共2页

目的探讨目测比色法检测末梢血糖水平的可行性。方法同时采用试纸目测比色法和快速血糖仪检测手指末梢血糖,由被测患者和护士同时读取目测值。结果共检测201例患者,对同一血标本,患者目测血糖值、护士目测血糖值和快速血糖仪所测值之间... 目的探讨目测比色法检测末梢血糖水平的可行性。方法同时采用试纸目测比色法和快速血糖仪检测手指末梢血糖,由被测患者和护士同时读取目测值。结果共检测201例患者,对同一血标本,患者目测血糖值、护士目测血糖值和快速血糖仪所测值之间差异无统计学意义(P<0.05),且试纸目测比色法的测量误差与患者年龄无相关性(P>0.05)。结论试纸目测比色法能准确反映患者的末端血糖值,且不受患者的年龄影响。 展开更多

关键词 血糖试纸 目测比色法 末梢血糖 监测 评估

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水产品中甲醛快速显色试纸的构筑与应用 被引量：1

4

作者 武斌 陈宣伊 +4 位作者 洪雨蒙 章双洛 郑剑 张宜明 王东辉 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1986-1994,共9页

为实现水产品中甲醛含量的现场快速检测,本研究基于溶胶-凝胶法将高碘酸钾、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)构筑于滤纸表面,制得纳米显色前体物;利用4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂(AHMT)甲醛显色反应原理,使甲醛与AHMT在纳米显色前... 为实现水产品中甲醛含量的现场快速检测,本研究基于溶胶-凝胶法将高碘酸钾、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)构筑于滤纸表面,制得纳米显色前体物;利用4-氨基-3-联氨-5-巯基-1,2,4-三氮杂茂(AHMT)甲醛显色反应原理,使甲醛与AHMT在纳米显色前体物表面富集缩合并经高碘酸钾氧化,最终形成蓝紫色纳米显色复合物;通过自行开发的SHotPic 1.0软件分析试纸显色程度,快速得到待测水产品中的甲醛含量。结果表明,甲醛含量与试纸显色深浅呈线性关系,相关系数达0.9719;纳米显色复合物在底物富集效应及纳米限域效应共同作用下显色蓝移并加深;试纸显色后经软件半定量可快速检测样品中甲醛含量,最低检出限为0.34 mg·kg^(-1)。本研究可为新型纳米显色剂开发和食品中有害化合物的快速直读显色分析提供理论指导和实践参考。 展开更多

关键词 溶胶-凝胶 纳米显色剂 试纸 甲醛 快速检测

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非洲猪瘟病毒可视化重组酶辅助扩增检测方法的建立与初步应用 被引量：5

5

作者 岳怀宁 李艳蕊 +6 位作者 张亚楠 苏恺 袁晨 逯纪成 孙泰然 薛文阁 宋勤叶 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期19-25,共7页

为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)重组酶辅助扩增(RAA)与核酸检测试纸条相结合的可视化RAA检测方法,本试验根据ASFV的B646L基因(编码p72蛋白)保守区设计特异性的引物和探针,通过优化引物和探针浓度、反应温度和反应时间,确定反应的最佳体系... 为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)重组酶辅助扩增(RAA)与核酸检测试纸条相结合的可视化RAA检测方法,本试验根据ASFV的B646L基因(编码p72蛋白)保守区设计特异性的引物和探针,通过优化引物和探针浓度、反应温度和反应时间,确定反应的最佳体系和扩增条件;检测建立的可视化RAA方法的特异性和灵敏性,分析建立方法与非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒对临床样品检测结果的符合率。结果显示,建立的可视化RAA方法的反应体系为25μL,在38℃恒温条件下反应20 min即可在5 min内读取结果;与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)等均不发生交叉反应;单个反应可检测到48.75拷贝的病毒核酸。初步临床应用结果显示,建立的可视化RAA方法与商品化的非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒检测结果一致,其阴性和阳性符合率均为100%。本试验成功建立的基于ASFV B646L基因的可视化恒温扩增方法具有反应时间短、特异性和灵敏度高、操作便捷等优势,适合现场快速检测和诊断,具有进一步开发潜力。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 B646L基因 重组酶辅助扩增技术 可视化 核酸检测试纸条

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基于胶体金侧向层析原理的大米中痕量镉现场快速检测方法 被引量：2

6

作者 王冉冉 姚丽 +2 位作者 姚帮本 陈伟 陈赵然 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2023年第8期60-65,88,共7页

目的:建立一种可实现对大米中镉元素现场快速检测的胶体金试纸条检测方法。方法:基于侧向免疫层析技术,对胶体金试纸条一系列影响检测性能的参数进行系统优化。结果:所制备的胶体金试纸条对大米中镉元素的检测达到了可视化检测限为10 n... 目的:建立一种可实现对大米中镉元素现场快速检测的胶体金试纸条检测方法。方法:基于侧向免疫层析技术,对胶体金试纸条一系列影响检测性能的参数进行系统优化。结果:所制备的胶体金试纸条对大米中镉元素的检测达到了可视化检测限为10 ng/g的水平。在实际应用中,此方法样品前处理过程操作简单,低浓度酸直接提取并稀释后即可用于试纸条检测。结论:胶体金试纸条快速检测方法适用于大米镉的现场快速筛检。 展开更多

关键词 大米 镉 现场快速检测 胶体金试纸条 可视化检测 低浓度酸

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DSN结合CHA用于miRNA的可视化检测 被引量：1

7

作者 王奎宇 卜胜君 +4 位作者 王月 常洪标 孙秀伟 张红梅 万家余 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期13-16,20,285,共6页

为了研究灵敏特异、方便快捷的新型microRNA(miRNA)检测技术,试验采用双链特异性核酸酶(DSN)结合CHA(catalyzed hairpin assembly)恒温核酸扩增技术产生的双重信号放大方法,以试纸条作为信号输出方式用于miRNA的检测,将含有miRNA识别部... 为了研究灵敏特异、方便快捷的新型microRNA(miRNA)检测技术,试验采用双链特异性核酸酶(DSN)结合CHA(catalyzed hairpin assembly)恒温核酸扩增技术产生的双重信号放大方法,以试纸条作为信号输出方式用于miRNA的检测,将含有miRNA识别部分和CHA启动序列的复合探针与靶标miRNA结合后,DSN循环反应酶切释放CHA的启动序列T-trigger并引发CHA反应,最终产物可在试纸条检测线上留下红线。结果表明:本体系最低检测限可达到7.66 pmol/L,灵敏性好,且除靶标miRNA-21外,其余非特异性靶标均不能使试纸条留下红线,即使单碱基也能够被很好地区分,特异性强。说明本研究成功建立了等温、灵敏、特异的miRNA检测新方法,可用于miRNA的便携分析。 展开更多

关键词 microRNA(miRNA) 双链特异性核酸酶(DSN) CHA 试纸条 可视化检测

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基于PCR-核酸试纸条快速鉴定鹿茸及其伪品的实验研究 被引量：8

8

作者 徐宁 邵博宇 +7 位作者 于文莹 迟凯月 马玉贺 马秋贺 艾金霞 李明成 高丽君 夏薇 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第18期1528-1534,共7页

目的 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)与核酸试纸条相结合的方法,实现鹿茸真伪的可视化检测。方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate, SDS)碱变性法提取正品及伪品鹿茸样品基因组DNA,通过查找细胞色素C氧... 目的 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)与核酸试纸条相结合的方法,实现鹿茸真伪的可视化检测。方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate, SDS)碱变性法提取正品及伪品鹿茸样品基因组DNA,通过查找细胞色素C氧化酶亚基I(COI)特异性位点,应用Primer 3.0软件设计鹿茸特异引物,摸索PCR最佳反应体系及条件,建立PCR-核酸试纸条及琼脂糖凝胶电泳鉴定鹿茸真伪的最优条件。同时,通过克隆测序,验证鹿茸真伪鉴定的准确性。结果 本实验中正品鹿茸在PCR-核酸试纸条上均出现两条带,阴性对照及伪品出现一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合,且试纸条检测的灵敏度可达1 ng·μL^(-1)。对9个市售鹿茸样品检测,正品鹿茸5个,合格率为45%。结论 自主构建的PCR-核酸试纸条检测方法简单、快速、特异性较好,可在较短时间内实现鹿茸真伪的可视化检测,检测结果稳定,为中药材鉴定提供又一新的方法。 展开更多

关键词 聚合酶链式反应 鹿茸 核酸试纸条 可视化 DNA指纹

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氯霉素和土霉素可视化适配体检测试纸研究与制备 被引量：1

9

作者 王红旗 郑嘉 +5 位作者 刘继红 王俊艳 曹成 尹海燕 刘雪平 王冕 《传感技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1099-1108,共10页

为实现多抗生素的便捷、可视化检测,本文以核酸适配体作为分子识别元件,采用ISM技术进行定向进化,利用碳点纳米材料作换能器,采用链置换信号传导技术和表面临近杂交信号的输出策略,研制出了氯霉素和土霉素可视化检测试纸。结果显示,氯... 为实现多抗生素的便捷、可视化检测,本文以核酸适配体作为分子识别元件,采用ISM技术进行定向进化,利用碳点纳米材料作换能器,采用链置换信号传导技术和表面临近杂交信号的输出策略,研制出了氯霉素和土霉素可视化检测试纸。结果显示,氯霉素和土霉素可视化适配体检测试纸是一种signal-on比色型传感器,检测带的亮度与靶标的浓度正相关。经液质联用法确证,该检测试纸的灵敏度为:土霉素≥24.6μg/L,氯霉素>10.26μg/L。实验结果证明该检测试纸具有经济、快捷、高特异性的优点,有望为政府部门的抗生素风险评估、滥用监管和基层用户的质量控制提供技术支撑。 展开更多

关键词 适配体传感器 可视化检测 检测试纸 抗生素 土霉素 氯霉素

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城市快速路中央分隔带线性空间布局形式的视觉刺激对驾驶行为的影响 被引量：6

10

作者 朱秋晨 吴付威 +1 位作者 白骅 李宇慧 《中国公路学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第11期239-251,共13页

为探究城市快速路中央分隔带线性空间布局形式的视觉刺激对驾驶行为的影响,通过图像语义分割技术量化景观构成要素,并用SILAB软件平台构建虚拟仿真场景,开展模拟驾驶试验。测试路段限速值分别为50 km·h^(-1)和70 km·h^(-1)。... 为探究城市快速路中央分隔带线性空间布局形式的视觉刺激对驾驶行为的影响,通过图像语义分割技术量化景观构成要素,并用SILAB软件平台构建虚拟仿真场景,开展模拟驾驶试验。测试路段限速值分别为50 km·h^(-1)和70 km·h^(-1)。试验获取了41名被试对中央分隔带布局形式视觉刺激的眼动和车辆运行指标以及驾驶疲劳的主观评价,以分析不同中央分隔带布局形式视觉刺激下各特征参数的变化规律。采用注视点信息熵作为布局形式视觉刺激度的量化指标,并使用ROC曲线方法为表征不同中央分隔带布局形式视觉刺激的驾驶行为指标确立了舒适性阈值,根据不同中央分隔带布局形式下的驾驶行为指标及阈值,建立了舒适性综合判别模型。研究结果表明:单次扫视时长、注视次数、车道横向偏移距离受布局形式视觉刺激的影响较大;与车速50 km·h^(-1)相比,当车速为70 km·h^(-1)时,扫视频率低,单次扫视时长短,注视次数少,平均眨眼持续时间长;注视点信息熵与视觉刺激度相关;由车辆运行特征分析可知,排列式的中央分隔带布局形式由于景观单调、视觉刺激过低会导致驾驶人出现反应迟缓、疲劳,影响行车安全;规则式布局形式视觉刺激过高,环境的复杂性、新奇性、意外性等特征过于显著,会导致驾驶人难以集中注意力,从而威胁行车安全;而自然式的布局形式不仅能够改善城市快速路景观环境的单调性,还能够提供适宜的视觉刺激。研究成果能够改善中央分隔带布局形式及提高驾驶安全性提供一定的理论依据。 展开更多

关键词 交通工程 城市快速路 虚拟仿真眼动试验 驾驶行为 视觉刺激 中央分隔带布局形式

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基于纳米金星的层析试纸条用于检测HIV-DNA（英文） 被引量：1

11

作者 吕思嘉 操婷伟 +2 位作者 文为 张修华 王升富 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期517-524,共8页

构建了基于纳米金星(AuNSs)的快速、简单且可视化的横向流层析试纸条(LFTS),并用于检测人类免疫缺陷病毒的DNA。采用一步法合成AuNSs,并对其进行生物功能化,目标物与DNA修饰的AuNSs结合。该复合物通过碱基互补配对原则被捕获在测试线上... 构建了基于纳米金星(AuNSs)的快速、简单且可视化的横向流层析试纸条(LFTS),并用于检测人类免疫缺陷病毒的DNA。采用一步法合成AuNSs,并对其进行生物功能化,目标物与DNA修饰的AuNSs结合。该复合物通过碱基互补配对原则被捕获在测试线上,依据测试线上纳米金星颜色的变化进行定性和半定量分析,使用便携式读条器在最佳实验条件下进行定量分析。该方法的线性范围为0.2～50 nmol/L,检出限为0.14 nmol/L。相同条件下,该方法比传统纳米金试纸条的灵敏度约高5倍。该方法可用于人血清中HIV DNA的检测,结果良好。 展开更多

关键词 纳米金星 层析试纸条 人类免疫缺陷病毒的DNA (HIV-DNA ) 可视化检测

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食用油酸价和过氧化值快速检测试纸法的评价 被引量：3

12

作者 李文智 《粮油食品科技》 2002年第5期40-41,共2页

试验了用于快速检测食用油酸价和过氧化值的目测试纸。采用试纸法和国标法同时检测各类食用油样本的检测试验的比较,结果符合率高,统计学无显著差异。认为酸价和过氧化值试纸法具有快速、准确、方便等优点。

关键词 食用油 酸价 过氧化值 检测 试纸法 评价

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利用环介导等温扩增结合核酸试纸条技术快速检测粪便艰难梭菌的方法研究 被引量：2

13

作者 骆益华 吴丽娜 +3 位作者 吴俊 赵明 邵飞琴 张伟群 《中国现代医生》 2022年第23期47-50,共4页

目的 研究利用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)结合核酸试纸条技术建立艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)的快速检测方法,为艰难梭菌检测提供一种快速检测的方法。方法 收集2016年1月至2017年12月杭州... 目的 研究利用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)结合核酸试纸条技术建立艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)的快速检测方法,为艰难梭菌检测提供一种快速检测的方法。方法 收集2016年1月至2017年12月杭州市临安区第一人民医院临床感染性腹泻患者的粪便标本201份。根据艰难梭菌毒素A基因特异序列设计引物,选择6条最佳引物,用LAMP环介导等温扩增曲线、钙黄绿素目视法和核酸试纸条测试实验结果,再优选反应体系,最后检测粪便中的艰难梭菌。结果 LAMP法能在60℃条件下扩增1h检出艰难梭菌,对1株艰难梭菌和7株非艰难梭菌检测,只有艰难梭菌能检出阳性扩增,设计的引物具有良好的特异性。脱氧核糖核酸(deoxyribo nucleic acid,DNA)检出限为0.8pg/μl。结论 LAMP结合核酸试纸条技术快速检测粪便艰难梭菌具有敏感度高、操作简便、特异性强、可视化、方便快捷的特点,适用于艰难梭菌的快速检测。 展开更多

关键词 环介导等温扩增 艰难梭菌 钙黄绿素目视法 核酸试纸条 敏感度 特异性

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食用油酸价和过氧化值快速检测试纸法的评价 被引量：5

14

作者 李文智 《广西轻工业》 2002年第3期39-40,共2页

试验了用于快速检测食用油酸价和过氧化值的目测试纸。采用试纸法和国标法同时检测各类食用油样本的检测试验的比较 ,结果符合率高 ,统计学无显著差异。认为酸价和过氧化值试纸法具有快速、准确。

关键词 食用油 酸价 过氧化值 快速检测试纸法 评价

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管辖区内食用油酸价和过氧化值监测分析 被引量：3

15

作者 杜小川 袁宏 +1 位作者 同京拴 姬峰 《中国卫生监督杂志》 2009年第4期349-351,共3页

目的为了掌握辖区内饮食摊点正在使用油的食用油酸价和过氧化值的现状。采用了快速检测食用油酸价和过氧化值的目测试纸法,并对高温加热的油进行20分钟取样一次的监测,以便为职能监管部门提供科学数据。方法目测试纸法进行筛查,有三份... 目的为了掌握辖区内饮食摊点正在使用油的食用油酸价和过氧化值的现状。采用了快速检测食用油酸价和过氧化值的目测试纸法,并对高温加热的油进行20分钟取样一次的监测,以便为职能监管部门提供科学数据。方法目测试纸法进行筛查,有三份样品同时作了对比实验。结果2个月监测160个数据,超标1份,含量为25meq/kg.结论;高温加热油对酸价和过氧化值两项指标影响不大,酸价和过氧化值试纸法具有快速、准确、方便等优点。 展开更多

关键词 食用油 酸价 过氧化值 试纸 目测 比色

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食用油酸价和过氧化值快速检测试纸法的评价 被引量：2

16

作者 李文智 《四川粮油科技》 2002年第3期51-53,共3页

试验了用于快速检测食用油酸价和过氧化值的目测试纸。采用试纸法和国标法同时检测各类食用油样本的检测试验的比较 ,结果符合率高 ,统计学无显著差异。认为酸价和过氧化值试纸法具有快速、准确。

关键词 食用油 酸价 过氧化值 快速检测 试纸法 评价

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平贝母PCR-核酸试纸条快速检测方法的建立和评价

17

作者 马玉贺 商聪慧 +7 位作者 马秋贺 李涛 刘悦 潘蓓珍 高丽君 李明成 夏薇 曲永梅 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1773-1778,共6页

本研究针对平贝母的ITS2序列设计特异性鉴别引物,优化反应体系及条件,构建PCR-核酸试纸条实现可视化检测平贝母。通过分子克隆及测序技术,构建平贝母DNA阳性对照品,制定质量标准。对建立的方法进行性能评价,检测其灵敏度、特异性和重复... 本研究针对平贝母的ITS2序列设计特异性鉴别引物,优化反应体系及条件,构建PCR-核酸试纸条实现可视化检测平贝母。通过分子克隆及测序技术,构建平贝母DNA阳性对照品,制定质量标准。对建立的方法进行性能评价,检测其灵敏度、特异性和重复性,对市售样品进行真伪鉴定。结果显示,基于ITS2序列可对平贝母及其混伪品进行区分。正品平贝母PCR产物滴定于试纸条上显示T、C线两条带,伪品与阴性对照只显示C线一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合。特异性为100%,PCR-核酸试纸条灵敏度可达0.1 ng·μL^(-1),高于凝胶电泳检测10倍。16个平贝母市售样品中11个合格,5个不合格。综上,本研究建立的平贝母PCR-核酸试纸条检测方法特异、快速、精准、可视化,可为平贝母检测提供新的技术思路。 展开更多

关键词 平贝母 分子克隆 ITS2序列 核酸试纸条 可视化

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天麻PCR‑层析试纸条快速可视化检测方法的建立与评价

18

作者 马秋贺 马玉贺 +9 位作者 刘悦 李涛 刘昂 徐子强 柴金军 王艳茹 高丽君 夏薇 李明成 曲永梅 《上海中医药杂志》 CSCD 2024年第3期79-85,共7页

目的通过聚合酶链式反应(PCR)与层析试纸条结合的方法,实现天麻快速可视化真伪鉴别,并对其检测效果进行评价。方法采用一步法提取天麻及其伪品基因组DNA,应用NCBI数据库设计天麻特异性引物。采用DNA分子克隆技术制备天麻阳性质粒,作为... 目的通过聚合酶链式反应(PCR)与层析试纸条结合的方法,实现天麻快速可视化真伪鉴别,并对其检测效果进行评价。方法采用一步法提取天麻及其伪品基因组DNA,应用NCBI数据库设计天麻特异性引物。采用DNA分子克隆技术制备天麻阳性质粒,作为天麻阳性对照品。建立PCR-层析试纸条法鉴定天麻真伪,摸索最优实验条件,并进行方法学评价。结果①样品DNA提取的纯度符合要求,最优的PCR反应引物浓度为1μmol/L,循环为29次。②分子克隆的天麻阳性质粒序列与天麻DNA分子标记特异性指纹区片段序列同源性为98%,可作为天麻PCR-层析试纸条法的阳性对照品。③PCR-层析试纸条法的方法学评价结果显示:天麻对照药材在试纸条上出现两个条带,伪品和阴性对照品出现1个条带,与琼脂糖凝胶电泳法结果一致,特异性良好;PCR-层析试纸条法较琼脂糖凝胶电泳法的灵敏度高100倍,天麻DNA浓度为10-1 mg/L时,试纸条仍有模糊条带;在第3、6、9、12个月采用PCR-层析试纸条法进行检测,检测结果与预期一致,稳定性良好;混合样品验证显示,PCR-层析试纸条法的最低检测限为10%,而琼脂糖凝胶电泳法的最低检测限为50%。④采用PCR-层析试纸条法对15份市售天麻样品进行检测,鉴别出3个伪品,与琼脂糖凝胶电泳法结果一致。结论所构建的PCR-层析试纸条检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便快速,可在短时间内实现鉴定结果的可视化,检测结果准确、稳定,为道地药材天麻的真伪鉴别提供了新方法。 展开更多

关键词 天麻 聚合酶链式反应 试纸条 分子克隆 可视化鉴定 中药研究

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快速鉴定松茸及其制品的可视化核酸试纸条方法建立 被引量：1

19

作者 朱建宇 尹荣 +2 位作者 王艳双 常明珠 周亭亭 《食品科技》 CAS 北大核心 2024年第5期342-348,共7页

松茸(Tricholoma matsutake)是一种稀有、珍贵的野生食用菌,至今还无法人工栽培,目前菌菇市场中存在大量假冒松茸商品。文章建立了快速鉴定松茸及其制品的可视化核酸试纸条法。该方法设计特异性引物,通过聚合酶链式反应(Polymerase Chai... 松茸(Tricholoma matsutake)是一种稀有、珍贵的野生食用菌,至今还无法人工栽培,目前菌菇市场中存在大量假冒松茸商品。文章建立了快速鉴定松茸及其制品的可视化核酸试纸条法。该方法设计特异性引物,通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增特异性鉴定松茸特异性基因标志物,优化扩增条件为退火温度63 ℃、15个循环。扩增产物使用胶体金核酸试纸条检测,松茸样本均出现2条红色条带,同时凝胶电泳验证可扩增出352 bp特异性DNA片段。其他菌类及空白对照均在质控线出现1条红色条带,检测线无显色条带,且凝胶电泳无扩增条带,结果特异良好。该方法灵敏度高、稳定性强,模板DNA的最低检出量为0.1 ng/μL,检测试纸条可在常温保存至少12个月。所建立的松茸特异性基因标志物成分检测的可视化核酸试纸条方法检测性能优异,结果稳定可视、操作简便,适用于松茸原料和加工制品的现场检测。 展开更多

关键词 松茸 快速鉴定 聚合酶链式反应 核酸试纸条 可视化检测

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