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题名变异链球菌luxS基因敲除重组质粒的构建
被引量：3
- 1
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作者
童忠春
马丽芳
倪龙兴
侯波
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机构
西安第四军医大学口腔医院牙体牙髓病科
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出处
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期182-185,共4页
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文摘
目的:构建一个含有抗卡那霉素基因和变异链球菌luxS基因上下游区同源序列的重组质粒,以便以后转化入变异链球菌进行luxS的敲除。方法:设计引物,以质粒pEGFP-N1为模板,进行PCR得到抗卡那霉素的DNA片断,再以变异链球菌的DNA为模板,PCR得到luxS基因上下游序列,最后将这3段DNA片断分别按顺序插入到pMD19-T载体的多克隆酶切位点中,转化大肠杆菌的感受态中,通过在卡那霉素和氨苄青霉素的培养基进行筛选。结果:kana+基因和luxS基因两侧同源序列成功连入到pMD19-T载体相应酶切位点,酶切、测序结果正确。结论:成功构建变异链球菌luxS基因敲除重组质粒,为将来构建变异链球菌luxS突变株打下基础。
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关键词
变异链球菌
LUXS基因
pmd19-t载体
pEGFP-N1质粒
pmd19-tUKD
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Keywords
Streptococcus mutans
luxS gene
vector pmd19-t
Plasmid pEGFP-N1
pmd19-tUKD
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分类号
R780.2
[医药卫生—口腔医学]
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题名东方山羊豆GoMIPS双元表达载体的构建及鉴定
被引量：1
- 2
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作者
李春艳
刘建宁
高洪文
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机构
山西省农业科学院畜牧兽医研究所
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
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出处
《家畜生态学报》
北大核心
2013年第1期25-28,共4页
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基金
山西省农业科学院畜牧兽医研究所基金项目(YGG0853)
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文摘
从东方山羊豆(Galega.orientalis L.)中克隆出的GoMIPS(肌醇-1-磷酸合成酶)基因序列设计合成1对带有NcoI和SpeI酶切位点的引物,用RT-PCR方法从东方山羊豆幼嫩叶片总RNA中扩增出GoMIPS基因的cDNA序列,经纯化后,克隆至pMD19-T载体上,构建pMD-MIPS的中间载体,测序鉴定。然后用NcoI和SpeI限制性酶对含有目的基因的pMD-MIPS和pCAMBIA1302空载体进行双酶切,通过酶切鉴定和测序分析表明,已成功构建了CaMV35S启动子驱动GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1302-MIPS。
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关键词
东方山羊豆(Galega.orientalis
L.)
GoMIPS
pmd19-t
pCAMBIA1302
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Keywords
Galega. orientalis L.
GoMIPS （inositol -1- phosphate synthase）
pmd19-t vector
pCAMBIA1302 vector
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分类号
S811.6
[农业科学—畜牧学]
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题名贵州白香猪Gadd45G的cDNA克隆与序列分析
- 3
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作者
乜玉丽
许厚强
赵佳福
张勇
陈祥
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机构
高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室/贵州大学贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室
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出处
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期141-144,共4页
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基金
转基因生物新品种培育科技重大专项子项目(2009ZX08009-139B)
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文摘
采用试剂盒提取RNA和RT-PCR法获得贵州白香猪Gadd45G基因cDNA序列,构建了贵州白香猪Gadd45G基因的pMD19亚克隆载体,并对该重组质粒进行测序分析,为贵州白香猪作为模式动物提供理论基础,为构建Gadd45G基因真核表达载体和转基因猪研究奠定基础。PCR、双酶切鉴定结果表明,已成功克隆的贵州白香猪Gadd45G基因的cDNA序列长度为480 bp。测序结果显示,贵州白香猪Gadd45G基因cDNA序列与普通猪、人类、家鼠、牛的同源性分别为99.6%、89.6%、90.2%、91.2%,氨基酸同源性分别为98.8%、95.6%、95.0%、96.2%。序列分析表明,贵州白香猪Gadd45G基因编码序列与普通猪相比,有两处发生碱基突变,其中一处为错义突变(第385处的G→A突变)使氨基酸由丙氨酸突变成苏氨酸。
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关键词
贵州白香猪
Gadd45基因
pmd19-t载体
克隆
序列分析
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Keywords
Guizhou Bai Xiang pig
Gadd45G gene
pmd19-t vector
cloning
sequence analysis
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分类号
Q344.12
[生物学—遗传学]
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题名利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体
被引量：3
- 4
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作者
耿晓姗
刘秦
党会杰
武军政
罗丽娟
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机构
海南大学农学院
海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地
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出处
《热带生物学报》
2016年第2期232-236,共5页
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基金
国家自然科学基金(31360575)
海南大学优秀研究生学位论文培育计划(M8K3124001003002)
+1 种基金
"木薯和橡胶糖代谢
耐贫瘠和抗病抗理"项目(ZXBJH-XK001)
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文摘
高效低背景T-载体的构建可显著提高克隆PCR产物的效率。笔者介绍1种在实验室常规条件下简单快捷制备高效低背景T载体的方法。将含有限制酶Xcm I酶切位点的ccd B致死基因作为插入DNA片段连接到p MD19-T Simple Vector骨架上得到重组质粒,通过菌落PCR、酶切分析及测序验证正确的重组质粒经限制酶Xcm I酶切即得到T-载体。该T-载体含有的ccd B致死基因可以降低载体自连的背景干扰,提高了T-A克隆效率,具有较高的阳性克隆率,继承了p MD19-T Simple Vector的优点,与普通T-载体相比,还具有高效、低背景的优越性。整个操作过程简易可行,具备一定的应用前景。
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关键词
高效
低背景
ccdB基因
pmd19-t
SIMPLE
vector
T-载体
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Keywords
high efficiency
low background
ccdB gene
pmd19-t Simple vector
T-vector
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分类号
Q782
[生物学—分子生物学]
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