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重组人vWF A3-GPI融合蛋白在CHO细胞膜上的表达及其生物学活性 被引量:1
1
作者 谭虎 黄岚 +1 位作者 晋军 赵晓辉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期296-299,共4页
目的在CHO中表达人vWFA3-GPI融合蛋白并测定其生物学活性,以期获得能够锚定至细胞表面,并引导其黏附于受损血管壁的分子。方法构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-vWFA3-GPI,转染CHO细胞。采用流式细胞术和免疫荧光激光共聚焦显微镜观察其对... 目的在CHO中表达人vWFA3-GPI融合蛋白并测定其生物学活性,以期获得能够锚定至细胞表面,并引导其黏附于受损血管壁的分子。方法构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-vWFA3-GPI,转染CHO细胞。采用流式细胞术和免疫荧光激光共聚焦显微镜观察其对细胞膜的锚定作用。应用CCK8法测定其结合胶原的能力及经不同浓度PI-PLC处理后的变化情况。结果vWFA3-GPI融合蛋白能够锚定在CHO细胞膜上,并具有很好的胶原结合活性;PI-PLC处理后,其胶原结合活性降低,降低程度与PI-PLC浓度成正比。结论CHO中高效表达的人vWFA3-GPI融合蛋白具有良好的生物学功能,能有效地锚定至细胞表面,并保持良好的胶原结合效应,可作为引导细胞黏附于受损血管壁的分子。 展开更多
关键词 血管性假血友病因子 糖基化磷脂酰肌醇 胶原 融合蛋白
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A novel vWF A3-GPI modified EPCs to enhance its adhesion ability to collegen 被引量:1
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作者 Tan Hu Song Yaoming Jin Jun Zhao Xiaohui Huang Lan 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2011年第4期191-203,共13页
Objective:To gain purified recombination protein rGPI-vWF A3 which can guide endothelial progenitor cells (EPCs) gathering to the internal surface of the injured vessels theoretically and analyze its bioactivity in vi... Objective:To gain purified recombination protein rGPI-vWF A3 which can guide endothelial progenitor cells (EPCs) gathering to the internal surface of the injured vessels theoretically and analyze its bioactivity in vitro. Methods: The plasmid vector of vWF A3 fusion protein which contained GPI structure was constructed and recombination protein rGPI-vWF A3 was expressed and its bioactivity was analyzed by ELISA and FCM. Results: Fusion protein vWF A3-GPI was expressed and purified by immunoaffinity chromatography and it could stably anchored on the surface of EPCs and showed its biological activities of collagen conjunction. Conclusion: These findings represent a novel strategy in EPC transplantation treatment for vessel injury. 展开更多
关键词 vwf a3-GPI Protein endothelial progenitor cells COLLAGEN
原文传递
抗VWF-A3区特异性单抗SZ-123单链抗体的构建和表达
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作者 王菲菲 赵益明 +3 位作者 江淼 姚拾秀 李雪美 阮长耿 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第6期874-878,共5页
目的以能与vWF-A3区特异结合的单克隆抗体SZ-123为模板,构建其单链抗体,为深入研究vWF-A3结构与功能的关系提供有力的工具。方法通过逆转录及多聚酶链反应,扩增并克隆单抗SZ-123的可变区基因VH、VL,经测序后加入连接肽,构建成SZ-123单... 目的以能与vWF-A3区特异结合的单克隆抗体SZ-123为模板,构建其单链抗体,为深入研究vWF-A3结构与功能的关系提供有力的工具。方法通过逆转录及多聚酶链反应,扩增并克隆单抗SZ-123的可变区基因VH、VL,经测序后加入连接肽,构建成SZ-123单链抗体(SZ-123 ScFV),并在大肠杆菌中进行表达。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot方法验证SZ-123 ScFV的免疫原性。结果 VH、VL可变区基因符合小鼠抗体可变区特征,SZ-123 ScFV基因拼接正确。表达产物除少量为分泌型外,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体蛋白的20%。经过变性和复性后,获得具有生物活性的高纯度单链抗体片段。结论成功表达了SZ-123单链抗体,该小分子抗体具有特异结合vWF-A3区的能力。 展开更多
关键词 vwf-a3 单链抗体(ScFv) 原核表达
原文传递
人vW因子A3区基因在大肠杆菌中表达及其生物学活性的研究 被引量:3
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作者 祝怀平 王迎春 +3 位作者 季顺东 白霞 江淼 阮长耿 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期199-203,共5页
血管性血友病因子 (vWF)是介导血小板粘附到细胞外基质的桥梁 ,在血栓形成过程中发挥重要作用 ,可通过阻断vWF与细胞外基质的结合而阻断血小板的粘附。本研究目的是研究一种抗血栓形成的新疗法。应用RT PCR方法从人脐带内皮细胞中克隆vW... 血管性血友病因子 (vWF)是介导血小板粘附到细胞外基质的桥梁 ,在血栓形成过程中发挥重要作用 ,可通过阻断vWF与细胞外基质的结合而阻断血小板的粘附。本研究目的是研究一种抗血栓形成的新疗法。应用RT PCR方法从人脐带内皮细胞中克隆vWFA3区基因并在大肠杆菌中表达 ;应用胶原结合试验及竞争抑制实验分析rvWF A3蛋白的生物学活性。结果表明 :表达的重组蛋白量占菌体总蛋白的 4 6 % ,包涵体经过变性、纯化和复性 ,获得重组蛋白 (rvWF A3) ;rvWF A3具有很好的胶原结合活性 ,且能竞争性抑制野生型vWF与胶原结合。结论 :大肠杆菌中高效表达的rvWF A3具有良好的生物学功能 ,可作为阻断剂用于干预vWF介导的血小板黏附过程 。 展开更多
关键词 vwf rvwf-a3 胶原 血栓 血小板
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