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1,25-(OH)_(2)D_(3)通过lncRNA-uc.412抑制TGF-β1诱导的系膜细胞增殖的机制研究 被引量：1
1
作者 安梦如 黄婵 +5 位作者 王锦 王银妃 盛晓静 张爱青 甘卫华 殷勤 《皖南医学院学报》 CAS 2021年第4期315-318,323,共5页
目的:研究1,25二羟基维生素D 3[1,25-(OH)_(2)D_(3)]通过长链非编码RNA uc.412(lncRNA-uc.412)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠系膜细胞增殖的可能机制。方法:用TGF-β1、1,25-(OH)_(2)D_(3)、SIS3分别干预系膜细胞,用lncRNA-uc... 目的:研究1,25二羟基维生素D 3[1,25-(OH)_(2)D_(3)]通过长链非编码RNA uc.412(lncRNA-uc.412)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠系膜细胞增殖的可能机制。方法:用TGF-β1、1,25-(OH)_(2)D_(3)、SIS3分别干预系膜细胞,用lncRNA-uc.412过表达慢病毒转染系膜细胞,MTT法、流式细胞术检测系膜细胞增殖率,RT-PCR法检测ki67、p27、PCNA及lncRNA-uc.412的表达,Western blot检测smad3及p-smad3的表达。结果:①与TGF-β1组相比,1,25-(OH)_(2)D_(3)+TGF-β1干预后的ki67、PCNA、lncRNA-uc.412的表达下调,p27的表达上调(P<0.01),细胞增殖率下降(P<0.01);②TGF-β1+SIS3组p-smad3蛋白表达、lncRNA-uc.412的表达量较TGF-β1组下降(P<0.01);③与过表达lncRNA-uc.412组比较,过表达lncRNA-uc.412+1,25-(OH)_(2)D_(3)组的ki67、PCNA的表达下调,p27的表达上调(P<0.01)。结论:1,25-(OH)_(2)D_(3)可抑制TGF-β1诱导的大鼠系膜细胞增殖,其机制可能与1,25-(OH)_(2)D_(3)阻滞细胞周期及下调lncRNA-uc.412的表达水平有关。 展开更多
关键词 1 25二羟基维生素D_(3) 长链非编码RNA uc.412 转化生长因子Β1 系膜细胞 增殖
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长链非编码RNA uc.412介导转化生长因子-β1诱导的系膜细胞自噬的机制研究 被引量：3
2
作者 黄婵 王锦 +3 位作者 安梦如 赵唐明 张爱青 甘卫华 《徐州医科大学学报》 CAS 2021年第6期424-429,共6页
目的探究长链非编码RNA uc.412(long non-coding RNA uc.412,LncRNA uc.412)在转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)诱导的系膜细胞自噬中的作用及相关机制。方法用TGF-β1(10μg/L)干预大鼠系膜细胞,Western blot法... 目的探究长链非编码RNA uc.412(long non-coding RNA uc.412,LncRNA uc.412)在转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)诱导的系膜细胞自噬中的作用及相关机制。方法用TGF-β1(10μg/L)干预大鼠系膜细胞,Western blot法检测自噬标志物LC3、p62的蛋白表达,Real-time PCR法检测LncRNA uc.412的表达;采用LncRNA uc.412过表达慢病毒转染系膜细胞并用Real-time PCR法检测转染效率,分别采用Western blot法和Real-time PCR法检测LC3和p62在蛋白水平和mRNA水平表达变化;用TGF-β1(10μg/L)和Smad3特异性磷酸化抑制剂SIS3(1μmol)干预系膜细胞,Western blot法检测pSmad3的蛋白表达,Realtime PCR法检测LncRNA uc.412的表达。结果与对照组相比,TGF-β1组LC3Ⅱ/Ⅰ、p62表达上调(P<0.05),LncRNA uc.412表达增加(P<0.05);过表达LncRNA uc.412组LC3和p62在蛋白和mRNA水平高于对照组和病毒空载组(P<0.05);与对照组相比,TGF-β1组p Smad3蛋白和LncRNA uc.412表达上调(P<0.05);与TGF-β1组相比,TGF-β1+SIS3组p Smad3蛋白和LncRNA uc.412表达下降(P<0.05)。结论LncRNA uc.412可能作为TGF-β1/Smad3通路的下游效应分子促进系膜细胞自噬,并且为慢性肾脏病的诊治提供新的思路。 展开更多
关键词 长链非编码RNA uc.412 转化生长因子-Β1 系膜细胞 自噬
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lncRNA-uc.412重组质粒构建及在大鼠肾小球系膜细胞中的转染 被引量：2
3
作者 陈俊宇 顾欣雨 +3 位作者 顾靖钏 鱼敏逸 甘卫华 张爱青 《山东医药》 CAS 2019年第24期9-12,共4页
目的 构建长链非编码RNA-uc.412(lncRNA-uc.412)的重组质粒,并观察其转染后在大鼠肾小球系膜细胞中的表达情况。方法 自大鼠系膜细胞中提取总RNA,根据lncRNA-uc.412的基因信息设计上下游引物,应用PCR技术与琼脂糖凝胶电泳获得扩增后分... 目的 构建长链非编码RNA-uc.412(lncRNA-uc.412)的重组质粒,并观察其转染后在大鼠肾小球系膜细胞中的表达情况。方法 自大鼠系膜细胞中提取总RNA,根据lncRNA-uc.412的基因信息设计上下游引物,应用PCR技术与琼脂糖凝胶电泳获得扩增后分离纯化的lncRNA-uc.412基因片段。将lncRNA-uc.412基因片段质粒与pRP[Exp]经双酶切处理后,通过凝胶电泳分离纯化,加入T4-DNA连接酶,即获得lncRNA-uc.412重组质粒。将lncRNA-uc.412重组质粒进行双酶切鉴定,检测目的基因片段大小;选取经双酶切鉴定连接成功的lncRNA-uc.412重组质粒,PCR扩增后进行双向测序。采用脂质体转染法转染lncRNA-uc.412重组质粒和空白质粒pRP[Exp]至大鼠肾小球系膜细胞,分别记为实验组和阴性对照组,采用RT-qPCR法检测lncRNA-uc.412在大鼠肾小球系膜细胞中的相对表达量。结果 lncRNA-uc.412重组质粒的双酶切鉴定结果显示,得到大小在200~300bp的特异性条带,与lncRNA-uc.412的长度相符。测序结果显示,lncRNA-uc.412重组质粒的碱基序列与理论预期序列一致。阴性对照组大鼠肾小球系膜细胞中lncRNA-uc.412的相对表达量记为1.00±0.00,实验组大鼠肾小球系膜细胞中lncRNA-uc.412的相对表达量为8.01±0.97,两组相比,P<0.05。结论 成功构建了lncRNA-uc.412重组质粒,并成功转染至大鼠肾小球系膜细胞。 展开更多
关键词 长链非编码RNA-uc.412 重组质粒 肾小球系膜细胞 细胞增殖 肾病
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长链非编码RNA uc.412在肾脏纤维化中的表达及作用
4
作者 文先丽 李善文 +4 位作者 赵雅洁 黄婵 朱仙艺 甘卫华 张爱青 《医学综述》 CAS 2021年第9期1807-1813,共7页
目的探讨长链非编码RNA uc.412(LncRNA uc.412)在肾脏纤维化中的作用及可能的作用机制。方法将12只雄性C57B/6小鼠随机分为对照组和单侧输尿管结扎(UUO)组,各6只。UUO组小鼠行左侧单侧输尿管结扎手术使其梗阻,构建肾脏纤维化模型;对照... 目的探讨长链非编码RNA uc.412(LncRNA uc.412)在肾脏纤维化中的作用及可能的作用机制。方法将12只雄性C57B/6小鼠随机分为对照组和单侧输尿管结扎(UUO)组,各6只。UUO组小鼠行左侧单侧输尿管结扎手术使其梗阻,构建肾脏纤维化模型;对照组小鼠行输尿管钝性分离但未进行结扎。于术后14 d处死小鼠,分别收集两组小鼠的血液及肾脏组织标本,检测血肌酐、血尿素氮;Masson染色检测肾脏纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测肾组织内LncRNA uc.412、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、胶原蛋白1(COL1)基因表达水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测肾组织中COL1蛋白的表达。体外培养大鼠系膜细胞,以TGF-β_(1)和siRNA处理细胞,应用qPCR法检测LncRNA uc.412表达,Western blot法检测细胞内α-SMA蛋白的表达。体外培养大鼠系膜细胞,以TGF-β_(1)、Smad3磷酸化特异性抑制剂SIS3处理细胞,qPCR法检测LncRNA uc.412表达水平。结果动物实验中,UUO组小鼠血肌酐和血尿素氮水平显著高于对照组[(135.6±4.1)μmol/L比(14.4±0.9)μmol/L,(23.4±2.2)mmol/L比(8.3±1.3)mmol/L](P<0.01),Masson染色显示UUO组纤维化改变明显。UUO组小鼠组织内LncRNA uc.412、α-SMA、TGF-β_(1)、COL1的mRNA高于对照组[(13.07±3.78)比(1.05±0.30),(13.03±2.20)比(1.16±0.54),(14.87±5.18)比(1.20±0.77),(188.61±34.79)比(1.03±0.25)](P<0.05),且UUO组COL1蛋白表达量明显高于对照组[(2.629±0.045)比(0.969±0.003)](P<0.01)。siRNA对TGF-β_(1)诱导大鼠系膜细胞中,TGF-β_(1)组LncRNA uc.412的表达高于对照组,TGF-β_(1)+25 nmol/L siRNA组、TGF-β_(1)+50 nmol/L siRNA组、TGF-β_(1)+75 nmol/L siRNA组低于TGF-β_(1)组(P<0.05);TGF-β_(1)组α-SMA蛋白表达高于对照组,TGF-β_(1)+siRNA组低于TGF-β_(1)组(P<0.05)。SIS3干预大鼠系膜细胞中,TGF-β_(1)组LncRNA uc.412表达高于对照组,TGF-β_(1)+SIS3组低于TGF-β_(1)组P<0.05)。结论LncRNA uc.412表达水平升高参与UUO模型肾脏纤维化的发生。TGF-β_(1)可能通过TGF-β_(1)/Smad3信号通路诱导系膜细胞LncRNA uc.412的表达增加,进而引起肾脏纤维化的改变。 展开更多
关键词 肾脏纤维化 单侧输尿管结扎 长链非编码RNA uc.412 转化生长因子-β_(1)
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