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Cloning and Bioinformatics Analysis of trxB Gene in Vibrio alginolyticus HY9901
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作者 Yuyan HE Xuelian LIN +3 位作者 Zhihang CHEN Xiaoxin WEN Jianyi WEI Huanying PANG 《Agricultural Biotechnology》 2025年第2期1-5,共5页
[Objectives]This study was conducted to investigate the functional characteristics of the trxB gene in Vibrio alginolyticus.[Methods]A pair of specific primers was designed based on the trxB gene sequence of V.alginol... [Objectives]This study was conducted to investigate the functional characteristics of the trxB gene in Vibrio alginolyticus.[Methods]A pair of specific primers was designed based on the trxB gene sequence of V.alginolyticus for PCR cloning of its full-length sequence.Systematic bioinformatics analyses were conducted to predict the physicochemical properties,secondary structure,and tertiary structure of the encoded protein.[Results]The trxB gene is 960 bp in length,encoding 319 amino acid residues.The deduced protein has a predicted molecular weight of 34.32 kDa and an isoelectric point(pI)of 4.77.Analysis of the amino acid sequence revealed a distinct signal peptide cleavage site at the N-terminus,with no transmembrane domains.The functional sites are as follows:1 N-glycosylation site,1 cAMP-and cGMP-dependent protein kinase phosphorylation site,4 protein kinase C phosphorylation sites,7 casein kinase II phosphorylation sites,1 tyrosine kinase phosphorylation site,11 N-myristoylation sites,1 prenyl group binding site,3 microbody C-terminal targeting signal sites,and 1 xanthine nucleotide-disulfide oxidoreductase class II active site.Subcellular localization prediction indicated the highest probability(44.4%)for endoplasmic reticulum localization.The TrxB amino acid sequence of V.alginolyticus shares 97.2%-98.4%homology with other Vibrio species,and they were clustered within the same subgroup.Secondary structure prediction showed proportions of random coils(31.97%),alpha-helices(31.66%),extended strands(25.08%),and beta turns(11.29%).The tertiary structure model exhibited 88.68%similarity to template 5vt3.1.A.[Conclusions]This study elucidated the characterization of the TrxB protein in V.alginolyticus,laying a theoretical foundation for the development of outer membrane protein subunit vaccines against this pathogen. 展开更多
关键词 Vibrio alginolyticus Gene cloning trxb gene Bioinformatics analysis
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融合蛋白FliC-Pfs25在trxB和gor基因双突变大肠埃希菌中的表达
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作者 钱锋 刘晓 +3 位作者 李梦梦 陈勇 蒋琳 徐沪济 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期357-361,共5页
目的检测恶性疟原虫表面蛋白25(Plasmodium falciparum surface protein 25,Pfs25)与鼠伤寒沙门菌1相鞭毛蛋白(phase 1 flagellin of Salmonella enterica serovar Typhimurium,FliC)的融合蛋白FliC-Pfs25,在硫氧还蛋白还原酶基因(thior... 目的检测恶性疟原虫表面蛋白25(Plasmodium falciparum surface protein 25,Pfs25)与鼠伤寒沙门菌1相鞭毛蛋白(phase 1 flagellin of Salmonella enterica serovar Typhimurium,FliC)的融合蛋白FliC-Pfs25,在硫氧还蛋白还原酶基因(thioredoxin reductase gene,trxB)和谷胱甘肽还原酶基因(glutathione reductase gene,gor)双突变大肠埃希菌Origami2(DE3)中的表达。方法将含有Pfs25和FliC基因的重组质粒pET28a(+)-fliC-pfs25转化Origami2(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白FliC-Pfs25,破菌上清经Ni-Sepharose纯化,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将纯化的融合蛋白配制成不同的疫苗制剂免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠免疫血清中抗Pfs25抗体水平。结果融合蛋白FliC-Pfs25在Origami2(DE3)中以可溶性形式表达;纯化的融合蛋白可被两个抗Pfs25的单抗mAb 1A6和mAb 4D10识别;融合蛋白与铝佐剂结合在小鼠中激发出抗Pfs25的抗体应答,但Origami2(DE3)表达的FliCPfs25与抗Pfs25单抗的反应以及在小鼠中激发抗Pfs25抗体的能力,均弱于大肠埃希菌BL21(DE3)表达的FliCPfs25。结论融合蛋白FliC-Pfs25在大肠埃希菌Origami2(DE3)中成功获得表达,但trxB和gor两个基因的突变未显示出能够提高该融合蛋白在大肠埃希菌中的表达量。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 表面蛋白25 鼠伤寒沙门菌 1相鞭毛蛋白 trxb基因 gor基因 大肠埃希菌 表达
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重组人BMP6在大肠杆菌中可溶表达、纯化及活性分析 被引量:12
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作者 雷荣悦 乔玉欢 +2 位作者 闫继东 杨爽 朱天慧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期452-459,共8页
BMP6是一种调节成骨细胞和成软骨细胞分化的骨诱导因子,在修复各种骨缺损方面具有很好的应用潜力。有诱骨活性的BMP6是多二硫键的二聚体蛋白,疏水性极强容易聚集沉淀。为了在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的重组人BMP6(rhBMP6),构建... BMP6是一种调节成骨细胞和成软骨细胞分化的骨诱导因子,在修复各种骨缺损方面具有很好的应用潜力。有诱骨活性的BMP6是多二硫键的二聚体蛋白,疏水性极强容易聚集沉淀。为了在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的重组人BMP6(rhBMP6),构建了具有TRX、GST、MBP、CBD融合标签和His6标签的rhBMP6成熟肽原核表达载体,调节诱导温度和IPTG浓度,比较不同融合标签和诱导条件对目的蛋白表达量和溶解性的影响。结果表明,MBP最能有效的增强rhBMP6的溶解性,诱导条件对溶解性影响较小。大肠杆菌BL21 trxB(DE3)这种硫氧还蛋白还原酶缺陷菌株为rhBMP6二硫键在胞质中形成提供了合适的氧化还原环境。MBP和BL21 trxB(DE3)相结合在细胞质中高效可溶表达出了BMP6融合蛋白二聚体。表达产物经亲和层析和凝胶排阻层析纯化后,能诱导成肌细胞系C2C12向成骨细胞方向转化。 展开更多
关键词 BMP6 MBP BL21 trxb(DE3) 可溶性
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