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猪捷申病毒荧光RT-RAA检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 孙志华 林青 +4 位作者 康龙滨 王隆柏 周伦江 俞道进 陈秋勇 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期130-133,共4页
为快速检测猪捷申病毒(PTV),根据PTV 5′UTR基因保守序列设计特异性引物和探针,优化荧光逆转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)反应条件和体系,并通过特异性、敏感性、重复性试验和临床应用对RT-RAA进行评价。结果表明,在37℃恒温反应22 mi... 为快速检测猪捷申病毒(PTV),根据PTV 5′UTR基因保守序列设计特异性引物和探针,优化荧光逆转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)反应条件和体系,并通过特异性、敏感性、重复性试验和临床应用对RT-RAA进行评价。结果表明,在37℃恒温反应22 min即可完成对PTV核酸扩增,最低检出限度为30.1 copies/μL;与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)均无交叉反应;重复性试验显示,组内和组间变异系数均小于5%;23份临床样品检测显示PTV阳性率为21.74%(5/23),检测结果与RT-qPCR一致。说明建立的PTV荧光RT-RAA检测方法具有简便、高效、稳定等优点,为PTV的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪捷申病毒 荧光逆转录重组酶介导等温扩增 检测方法
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猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪δ冠状病毒三重RT-qPCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 陈千林 李绍梅 +5 位作者 张邑帆 牟豪 刘明妮 杨柳 郭庆勇 付利芝 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第5期905-912,共8页
猪肠道冠状病毒(SeCoV)包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV),是引起仔猪严重腹泻的主要病原体,给养猪业造成了巨大的损失。为快速、准确地检测和鉴别这3种病毒,本研究建立了一种三重实时荧光... 猪肠道冠状病毒(SeCoV)包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV),是引起仔猪严重腹泻的主要病原体,给养猪业造成了巨大的损失。为快速、准确地检测和鉴别这3种病毒,本研究建立了一种三重实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)方法,用于同时检测PEDV、TGEV和PDCoV。根据PEDV M基因、TGEV ORF 1b基因和PDCoV ORF 1b基因的保守序列分别设计了特异性引物和探针。优化反应条件后,成功建立了一种能同时检测PEDV、TGEV和PDCoV的三重RT-qPCR方法。该方法对这3种病毒具有良好的特异性,与猪场常见的猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪A群轮状病毒(PoRVA)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等均无交叉反应。对重组质粒pTOPO-PEDV 128、pTOPO-TGEV 116和pTOPO-PDCoV 125线性模板的检测极限分别为16.835、17.610、17.020拷贝/μL。组内、组间变异系数均小于5%,且组间差异不显著(P>0.05)。与标准方法的符合性比较结果显示,三重RT-qPCR的检测符合率为100%,在35份组织样本的检测中,17份呈PEDV阳性,阳性率为48.57%(17/35),TGEV和PDCoV的检测结果均为阴性,未检测到混合感染。结果表明,建立的三重RT-qPCR方法特异、灵敏、稳定、快捷,可同时用于PEDV、TGEV和PDCoV的临床检测和鉴别诊断,为猪腹泻冠状病毒的检测和流行病学调查提供了一种高效、可靠的技术手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 传染性胃肠炎病毒 猪德尔塔冠状病毒 三重rt-qPCR 检测方法
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Travel time tomography by ray tracing using the fast sweeping method
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作者 Huai-gu Tang Ren-jun Xie +3 位作者 Yi Wu Chang-suo Zhou Jun-liang Yuan Wei Qin 《Applied Geophysics》 SCIE CSCD 2024年第4期697-714,879,共19页
This paper presents a gradient-descent travel time tomography method for solving the acoustictype velocity model inversion problem.Similarly to the adjoint-state method,the proposed method is based on the Eikonal equa... This paper presents a gradient-descent travel time tomography method for solving the acoustictype velocity model inversion problem.Similarly to the adjoint-state method,the proposed method is based on the Eikonal equation,enabling simultaneous calculation of contributions from all common-source receivers to the gradient.This overcomes the inefficiency inherent in conventional travel time tomography methods,which rely on a two-point ray tracing process.By directly calculating Fréchet derivatives,our method avoids the complex derivation processes associated with the adjoint-state method.The key to calculating the Fréchet derivatives is to calculate a so-called ray-path term.Consequently,compared to the adjoint-state method,the proposed method can explicitly obtain the ray paths,resulting in a more concise and intuitive derivation process.Furthermore,our method retains the benefits of the adjoint-state method,such as speed,low memory usage,and robustness.This paper focuses on elucidating the principles and algorithms for calculating the raypath term based on the fast sweeping method.The algorithms could be further speeded up by using parallel computational techniques.Synthetic tests demonstrate that our proposed travel time tomographic method accurately calculates ray paths,regardless of the complexity of the model and recording geometry. 展开更多
关键词 TOMOGRAPHY velocity model building ray tracing fast-sweeping method
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基于N基因的RT-LAMP技术检测PEDV、TGEV、PDCoV三种猪腹泻冠状病毒的研究 被引量:1
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作者 邓可辉 陈志飞 +6 位作者 俞婷 王志林 王修武 郭智轩 李松倍 魏文康 贺东生 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期70-79,共10页
本研究成功建立了检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)3种猪冠状病毒的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为现场快速诊断提供技术支持。根据GenBank公布的PEDV、TGEV、PDCoV的N基因保守序... 本研究成功建立了检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)3种猪冠状病毒的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为现场快速诊断提供技术支持。根据GenBank公布的PEDV、TGEV、PDCoV的N基因保守序列作为靶序列设计了3套LAMP检测引物,并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样品检测,分别建立了3种快捷、敏感的猪冠状病毒RT-LAMP检测方法。结果显示:所建立的PEDV、TGEV、PDCoV 3种冠状病毒RT-LAMP检测方法的最佳反应温度分别为65℃、63℃、63℃,3种检测方法均可在45 min左右完成恒温扩增,扩增出特异性阶梯状条带,且不依赖于PCR仪等昂贵设备,仅需普通恒温装置即可反应。所建立的检测方法对PEDV、TGEV、PDCoV分别可以达到的检测下限为20、23、10拷贝/μL,敏感性较好;所建立的3种检测方法分别只检测出PEDV、TGEV、PDCoV,且与常见的猪源性病毒均无交叉反应,特异性好。用所建立的3种RT-LAMP检测方法对45份猪腹泻病料进行检测,PEDV、TGEV、PDCoV阳性率分别为33.33%(15/45)、22.22%(10/45)、13.33%(6/45),均比常规RT-PCR检测阳性率高。与常规RT-PCR相比较,本研究建立的方法操作简便快速、经济,且检测设备门槛低,更适用于基层临床检测。 展开更多
关键词 冠状病毒 反转录环介导等温扩增 检测方法
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月季3种病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用
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作者 李振锋 袁志豪 +4 位作者 陆月霞 罗云 黄冬华 王国平 蔡丽 《山西农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期1-9,共9页
[目的]月季是我国重要的观赏花卉,李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、月季潜隐病毒1(rose cryptic virus 1,RCV1)是侵染月季的主要病毒,与其它病毒复合侵染月季... [目的]月季是我国重要的观赏花卉,李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、月季潜隐病毒1(rose cryptic virus 1,RCV1)是侵染月季的主要病毒,与其它病毒复合侵染月季时,对其生长和发育可造成严重影响。本文旨在建立灵敏、便捷地检测月季中这3种病毒的RT-LAMP检测方法。[方法]本研究以病毒CP基因为靶序列设计特异性引物,建立侵染月季的PNRSV、ASGV和RCV1的RT-LAMP检测方法,并对反应体系中Mg^(2+)浓度和dNTP使用浓度、反应温度和反应时间进行了优化,并对反应灵敏度和特异性进行了检测。[结果]该方法在恒温条件(61℃)下即可对目标病毒实现可视化特异性检测,检测体系中Mg^(2+)和dNTP最佳使用浓度分别为5.0 mmol/L和1.2 mmol/L;本研究所建立的RT-LAMP检测方法,RCV1、PNRSV和ASGV可以检测到病毒的最低浓度分别为3.19×10^(5)、6.44×10^(4)和4.04×10^(4)拷贝/μL,灵敏度是RT-PCR的100~1000倍,而且检测体系具有很好的反应特异性,与侵染月季的其它病毒之间不存在交叉反应;使用该RT-LAMP检测方法随机对田间19个样品进行检测,可通过颜色变化,能准确检测出样品中的目标病毒,而无需借助琼脂糖凝胶电泳或其它专门仪器。[结论]该方法可通过直接添加染料实现可视化,具有快速、便捷、特异性好特点,适用于侵染月季的PNRSV、ASGV和RCV1的快速诊断及田间监测。 展开更多
关键词 月季 病毒 rt-LAMP 检测方法
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Estimating interaction between surface water and groundwater in a permafrost region of the northern Tibetan Plateau using heat tracing method 被引量:1
6
作者 TanGuang Gao Jie Liu +5 位作者 TingJun Zhang ShiChang Kang ChuanKun Liu ShuFa Wang Mika Sillanpaa YuLan Zhang 《Research in Cold and Arid Regions》 CSCD 2020年第2期71-82,共12页
Understanding the interaction between groundwater and surface water in permafrost regions is essential to study flood frequencies and river water quality, especially in the high latitude/altitude basins. The applicati... Understanding the interaction between groundwater and surface water in permafrost regions is essential to study flood frequencies and river water quality, especially in the high latitude/altitude basins. The application of heat tracing method,based on oscillating streambed temperature signals, is a promising geophysical method for identifying and quantifying the interaction between groundwater and surface water. Analytical analysis based on a one-dimensional convective-conductive heat transport equation combined with the fiber-optic distributed temperature sensing method was applied on a streambed of a mountainous permafrost region in the Yeniugou Basin, located in the upper Heihe River on the northern Tibetan Plateau. The results indicated that low connectivity existed between the stream and groundwater in permafrost regions.The interaction between surface water and groundwater increased with the thawing of the active layer. This study demonstrates that the heat tracing method can be applied to study surface water-groundwater interaction over temporal and spatial scales in permafrost regions. 展开更多
关键词 surface water GROUNDWATER PERMAFROST heat tracing method TIBETAN Plateau
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人星状病毒和人札幌病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
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作者 林鹏 吴毓薇 +6 位作者 赵昕宇 蒋富凤 万强 薛亮 徐环 蔡芷荷 吴清平 《微生物学通报》 北大核心 2025年第4期1810-1829,共20页
【背景】人星状病毒(human Astrovirus,HAstV)和人札幌病毒(human Sapovirus,HuSaV)是引起人类急性胃肠炎的重要病原体,尤其对婴幼儿、老年人和免疫力低下等人群造成严重的威胁。目前尚无疫苗和特异性手段防控病毒的感染与传播,因此加... 【背景】人星状病毒(human Astrovirus,HAstV)和人札幌病毒(human Sapovirus,HuSaV)是引起人类急性胃肠炎的重要病原体,尤其对婴幼儿、老年人和免疫力低下等人群造成严重的威胁。目前尚无疫苗和特异性手段防控病毒的感染与传播,因此加强检测对防控病毒的传播具有重要的意义。【目的】建立能同时检测HAstV和HuSaV的双重荧光定量RT-PCR方法,为HAstV和HuSaV的快速检测和流行病学调查提供技术支持。【方法】针对HAstV和HuSaV保守区域基因序列,设计特异性检测引物和探针并优化反应体系,建立HAstV和HuSaV双重荧光定量RT-PCR检测方法,并分析其特异性、敏感性和重复性。【结果】HAstV和HuSaV双重荧光定量RT-PCR检测方法针对HAstV和HuSaV最低检测线分别为15 copies/μL和2.1 copies/μL;与其他常见的食源性病毒、致病菌和乳酸菌无交叉反应;批内和批间重复性试验变异系数均小于3.5%。采用人工模拟不同浓度的病毒污染牡蛎样品,结果显示HAstV和HuSaV双重荧光定量RT-PCR检测方法能检测出所有受污染的牡蛎样品,与阳性对照组检测结果差异不显著(P>0.05);利用所建立的HAstV和HuSaV双重荧光定量RT-PCR检测方法检测不同食品样品的HAstV和HuSaV,其阳性率分别为10.83%和0%。【结论】本研究建立的HAstV和HuSaV双重荧光定量RT-PCR检测方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,适用于食品样品中HAstV和HuSaV的快速检测及大规模流行病学调查。 展开更多
关键词 人星状病毒 人札幌病毒 双重荧光定量rt-PCR检测方法
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A型牛轮状病毒SYBR Green I RT-qPCR检测方法的建立
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作者 焦迪 王瑞 +8 位作者 郝艳霞 张晓倩 崔强 王海艳 陈林军 延涵 罗晓平 李军燕 赵治国 《中国动物检疫》 2025年第9期69-76,共8页
A型牛轮状病毒(BRV-A)是引起牛腹泻的重要病原之一,对养牛业危害最大。为建立一种针对BRV-A的快速、高通量、低成本检测方法,根据BRV-A的VP6基因保守区设计特异性引物,建立了检测BRV-A的SYBR Green I RT-qPCR方法。该方法对浓度梯度为4.... A型牛轮状病毒(BRV-A)是引起牛腹泻的重要病原之一,对养牛业危害最大。为建立一种针对BRV-A的快速、高通量、低成本检测方法,根据BRV-A的VP6基因保守区设计特异性引物,建立了检测BRV-A的SYBR Green I RT-qPCR方法。该方法对浓度梯度为4.41×10^(8)~4.41×10^(2) copies/μL质粒标准品的扩增Ct值与拷贝数浓度呈良好的线性关系,熔解曲线为单峰;与其他引起牛腹泻的常见病原无交叉反应,最低检测限为4.41×10^(1) copies/μL,批内、批间重复性试验Ct值变异系数均低于1%;对临床粪便样品的阳性检出率高于地方标准中的PCR方法,且检测结果符合性较好。综上,本研究建立的BRV-A SYBR Green I RT-qPCR检测方法灵敏、特异、稳定,且操作简单、成本低,为临床样品的大规模BRV-A检测及其感染的早期诊断提供了技术支撑。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 SYBR Green I荧光rt-PCR 检测方法
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A群轮状病毒和塞内卡病毒双重RT-qPCR检测方法的建立及应用
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作者 刘星 罗霆宇 +5 位作者 张玉 李凯丽 尹博曌 李昌文 夏长友 高彩霞 《实验动物科学》 2025年第3期30-37,共8页
目的 建立A群轮状病毒(PoRVA)和塞内卡病毒(SVA)双重RT-qPCR检测方法,并对其进行初步应用。方法 通过比对A群轮状病毒和塞内卡病毒毒株序列,选取PoRVA NSP3基因、SVA VP1基因保守区域分别设计引物和探针,建立PoRVA和SVA双重RT-qPCR检测... 目的 建立A群轮状病毒(PoRVA)和塞内卡病毒(SVA)双重RT-qPCR检测方法,并对其进行初步应用。方法 通过比对A群轮状病毒和塞内卡病毒毒株序列,选取PoRVA NSP3基因、SVA VP1基因保守区域分别设计引物和探针,建立PoRVA和SVA双重RT-qPCR检测方法。随后对方法的特异性和敏感性进行检测;取浓度为10~6~10^(3)copies/μL 10倍系列稀释的重组质粒标准品,每个浓度做3个平行,重复检测3次,计算组内和组间变异系数,评估方法的重复性和稳定性;用建立的双重RT-qPCR检测方法与《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》和《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》的检测方法进行比对,并检测15份猪粪便样品和35份猪肛拭子样品,评估该方法的实际应用性。结果 建立的双重RT-qPCR方法在10~9~10~1 copies/μL范围Ct值与质粒浓度呈线性关系,PoRVA标准曲线Slope为-3.085,r^(2)值为0.993,扩增效率为110.956%,SVA标准曲线Slope为-3.085,r^(2)值为0.993,扩增效率为110.935%,可检测到的PoRVA和SVA最低限均为10~1 copies/μL;且与其他7种实验猪常见病原不发生交叉反应;重复检测10~6~10^(3 )copies/μL质粒标准品,组内变异系数小于0.15%,组间变异系数小于1.50%。用建立的双重RT-qPCR方法与《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》和《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》方法检测15份猪粪便样品和35份猪肛拭子样品,结果显示,RT-qPCR检测出PoRVA阳性100%(50/50),SVA阳性66%(33/50),《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》检测阳性率100%(50/50),《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》检测阳性率24%(12/50),阳性符合率达到100%。结论 本研究建立的双重RT-qPCR检测方法可以有效地检测PoRVA和SVA,可为猪群的疫病检测和日常监测提供技术支撑。 展开更多
关键词 A群轮状病毒 塞内卡病毒 双重rt-qPCR检测方法建立及应用
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Deviation of the Lagrangian particle tracing method in the evaluation of the Southern Hemisphere annual subduction rate
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作者 Kai LIU Shan GAO Fan WANG 《Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2022年第3期891-906,共16页
The classical Lagrangian particle tracing method is widely used in the evaluation of the ocean annual subduction rate.However,our analysis indicates that in addition to neglecting the effect of mixing,there are two po... The classical Lagrangian particle tracing method is widely used in the evaluation of the ocean annual subduction rate.However,our analysis indicates that in addition to neglecting the effect of mixing,there are two possible deviations in the method:one is an overestimation due to not considering that the amount of subducted water at the source location may be inadequate during the late winter of the first year when the mixed layer becomes shallow;the other one is an underestimation due to the neglect of the effective subduction caused by strong vertical pumping.Quantitative analysis shows that these two deviations mainly exist in the low-latitude subduction areas of the South Pacific and South Atlantic.The two deviations have very similar distribution areas and can partially off set each other.However,the overall deviation is still large,and the maximum relative deviation ratio can reach 50%;therefore,it cannot be ignored. 展开更多
关键词 subduction rate Lagrangian particle tracing method mixed layer tropical water eastern subtropical mode water
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猪捷申病毒TaqMan RT-qPCR方法的建立
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作者 季崇稳 仇德洋 +3 位作者 张铭洋 李岩 王海燕 李根 《中国动物检疫》 2025年第9期64-68,76,共6页
为了建立一种快速灵敏的猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)定量分析检测方法,针对PTV 5'端非编码区保守区域设计合成特异性引物和TaqMan探针,经过正交试验优化反应条件,建立了PTV TaqMan RT-qPCR方法。结果显示:该方法仅对PTV出... 为了建立一种快速灵敏的猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)定量分析检测方法,针对PTV 5'端非编码区保守区域设计合成特异性引物和TaqMan探针,经过正交试验优化反应条件,建立了PTV TaqMan RT-qPCR方法。结果显示:该方法仅对PTV出现特异性扩增反应,与其他常见混合感染病原无交叉反应;对PTV-8质粒标准品的最低检测限为1.51×10^(1) copies/μL,批内、批间变异系数均小于2%;应用本研究建立的方法与其他研究建立的检测方法同时检测临床采集的192份粪便样品,两种方法的阳性和阴性符合率均为100%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好,为PTV的基础研究、疫苗研发和监测提供了技术支撑。 展开更多
关键词 猪捷申病毒 检测方法 荧光定量rt-qPCR
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经典型和新型鹅呼肠孤病毒的双重RT-qPCR检测方法的建立和应用
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作者 尹政浩 魏无缺 +5 位作者 梁昭平 李雨泽 徐杭 陆泳锟 梅堃 黄淑坚 《广东畜牧兽医科技》 2025年第3期96-104,共9页
鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus, GRV)包括经典型(GRV)和新型鹅呼肠孤病毒(Novel Goose reovirus, NGRV),两者在流行病学特征和病毒基因序列上存在差异。目前针对这两种类型病毒的敏感、特异的检测方法尚未完善,使得准确诊断和及时干预变... 鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus, GRV)包括经典型(GRV)和新型鹅呼肠孤病毒(Novel Goose reovirus, NGRV),两者在流行病学特征和病毒基因序列上存在差异。目前针对这两种类型病毒的敏感、特异的检测方法尚未完善,使得准确诊断和及时干预变得十分困难。为了区分GRV和NGRV,建立了一种基于染料法(SYBR Green I)的双重RT-qPCR检测方法。结果显示:该方法通过熔解曲线可区分GRV(79.5℃)和NGRV(86.5℃),对常见的水禽流行疫病均未出现扩增,最低检出为6.466×10^(1)拷贝/μLGRV和4.979×10^(1)拷贝/μLNGRV,组内与组间变异系数均小于0.55%。结果表明,这个研究所建立基于染料法的双重RT-qPCR检测方法可以快速准确地确定感染鹅群中不同型的GRV,为疾病的早期诊断、流行病学监测和有效防控提供支持。 展开更多
关键词 鹅呼肠孤病毒 GRV和NGRV 染料法 rt-qRCR 熔解曲线
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A COVID-19 rapid antigen test employing upconversion nanoparticles
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作者 Le Zhang Jiajia Zhou +15 位作者 Olga Shimoni Shihui Wen Amani Alghalayini Yuan Liu Meysam Rezaeishahmirzadi Jiayan Liao Mahnaz Maddahfar Roger Hunt Murdo Black Matt DJohansen Phil MHansbro Lin Zhang Martina Stenzel Majid Warkiani Stella MValenzuela Dayong Jin 《Smart Molecules》 2025年第1期92-100,共9页
The COVID-19 pandemic has underscored the critical need for rapid and accurate diagnostic tools.Current methods,including Polymerase Chain Reaction and rapid antigen tests(RAT),have limitations in speed,sensitivity,an... The COVID-19 pandemic has underscored the critical need for rapid and accurate diagnostic tools.Current methods,including Polymerase Chain Reaction and rapid antigen tests(RAT),have limitations in speed,sensitivity,and the requirement for specialized equipment and trained personnel.Nanotechnology,particularly upconversion nanoparticles(UCNPs),offer a promising alternative due to their unique optical properties.UCNPs can convert low-energy near-infrared light into higher-energy visible light,making them ideal for use as optical probes in single molecule detection and point of care applications.This study,initiated in early 2020,explores the opportunity of using highly doped UCNPs(40%Yb^(3+)/4%Er^(3+))in lateral flow assay(LFA)for the early diagnosis of COVID-19.The UCNPsbased LFA testing demonstrated a minimum detection concentration of 100 pg/mL for SARS-CoV-2 antigen and 10^(5)CCID_(50)/mL for inactivated virus.Clinical trials,conducted in Malaysia and Western Australia independently,showed that the technique was at least 100 times more sensitive than commercial RAT kits,with a sensitivity of 100%and specificity of 91.94%.The development process involved multidisciplinary collaborations,resulting in the Virulizer device,an automated strip reader for point-of-care testing.This work sets a reference for future development of highly sensitive and quantitative RAT,aiming for the Limits of Detection in the range of sub-ng/mL. 展开更多
关键词 analytical methods BIOSENSOR LUMINESCENCE trace analysis
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B亚型禽偏肺病毒可视化荧光RT-LAMP方法的建立
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作者 赵俊柯 谢芝勋 +7 位作者 余丹 张艳芳 谢志勤 范晴 尹文巧 杨冰怡 黄青红 喻华英 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期92-98,共7页
为了能快速鉴别B亚型禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus B,aMPVB)与其他禽类常见病毒,试验基于aMPVB F基因的保守区域设计一套特异性环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplilication,LAMP)引物,包括外引物F3和B3,内引物FIP(F1c+... 为了能快速鉴别B亚型禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus B,aMPVB)与其他禽类常见病毒,试验基于aMPVB F基因的保守区域设计一套特异性环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplilication,LAMP)引物,包括外引物F3和B3,内引物FIP(F1c+F2)和BIP(B1c+B2),环引物Floop和Bloop,其中FIP的5′端用淬灭基团BHQ2标记,同时在F3、B3之间引入1条探针FD,其3′端用CY5荧光基团标记,建立可视化荧光RT-LAMP方法,对该方法进行反应条件优化及特异性、敏感性检测,并利用该方法对临床样品进行检测。结果表明:建立的可视化荧光RTLAMP方法的最佳探针复合物浓度为0.32μmol/L,最佳反应温度为63℃;该方法仅能检测到aMPVB,其他17种禽类常见病毒均呈阴性;对aMPVB的最低检出限为1.2×10^(2)copies/μL,敏感性是普通PCR方法(1.2×10^(3)copies/μL)的10倍。该方法的反应时间为60 min,约为普通PCR方法的一半,大大提高了检测效率。利用该方法对采自广西地区的23份临床样本进行检测,结果与普通PCR方法完全一致。说明该方法能够快速、准确地检测aMPVB,特异性好,敏感性高,具有良好的实际应用价值。 展开更多
关键词 禽偏肺病毒 荧光rt-LAMP 可视化 FD探针 检测方法
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Investigation into enhancing the sensitivity method for monitoring trace erosion product concentration in the ceramic channel of a Hall thruster
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作者 Wei XI Ximing ZHU +2 位作者 Bowen ZHENG Zhongxi NING Daren YU 《Plasma Science and Technology》 2025年第4期95-104,共10页
An optical emission spectroscopy(OES)method with a non-invasive measurement capability,without inducing disturbance to the discharge,represents an effective method for material monitoring.However,when the OES method i... An optical emission spectroscopy(OES)method with a non-invasive measurement capability,without inducing disturbance to the discharge,represents an effective method for material monitoring.However,when the OES method is employed to monitor the trace erosion product within the ceramic channel of a Hall thruster,it becomes challenging to distinguish between signal and noise.In this study,we propose a model filtering method based on the signal characteristics of the Hall thruster plume spectrometer.This method integrates the slit imaging and spectral resolution features of the spectrometer.Employing this method,we extract the spectral signals of the erosion product and working gas from the Hall thruster under different operating conditions.The results indicate that our new method performs comparably to the traditional method without model filtering when extracting atom signals from strong xenon working gas.However,for trace amounts of the erosion product,our approach significantly enhances the signal-to-noise ratio(SNR),enabling the identification of extremely weak spectral signals even under low mass flow rate and low-voltage conditions.We obtain boron atom concentration of 3.91×10^(-3) kg/m^(3) at a mass flow rate of 4×10^(-7) kg/s and voltage of 200 V while monitoring a wider range of thruster operating conditions.The new method proposed in this study is suitable for monitoring other low-concentration elements,making it valuable for materials processing,environmental monitoring and space propulsion applications. 展开更多
关键词 model filtering method optical emission spectroscopy Hall thruster advanced actinometry method trace erosion product concentration(Some figures may appear in colour only in the online journal)
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间充质干细胞端粒酶催化亚基RT-qPCR方法的建立
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作者 陈晓菲 李慧婷 +10 位作者 董莹莹 曹译丹 付欣悦 刘明月 张瑞瑞 王艳辉 王新乐 崔梦姗 张峒 庞琳 饶春明 《药物分析杂志》 北大核心 2025年第1期20-29,共10页
目的:建立一种简便、高效的端粒酶活性检测方法,用于评价间充质干细胞产品的成瘤性风险。方法:针对端粒酶催化亚基(TERT)的保守结构域设计特异性引物和探针,并对TERT基因的引物和探针进行优化筛选,同时设置内参基因的引物和探针,在一个... 目的:建立一种简便、高效的端粒酶活性检测方法,用于评价间充质干细胞产品的成瘤性风险。方法:针对端粒酶催化亚基(TERT)的保守结构域设计特异性引物和探针,并对TERT基因的引物和探针进行优化筛选,同时设置内参基因的引物和探针,在一个反应体系内使用双色荧光探针进行多重定量PCR反应,建立RT-qPCR探针法。应用该法对人间充质干细胞中是否表达TERT基因来间接判断细胞中是否存在端粒酶活性。结果:该方法可稳定特异地检测到阳性对照细胞293T/17的TERT基因,Ct平均值为23.96,RSD为1.5%。内参基因GAPDH均可以正常检出,Ct平均值为14.13,RSD为1.3%。阴性对照细胞MRC-5内参基因GAPDH可以正常检出,Ct平均值为12.81,RSD为0.46%,TERT基因未检出,该细胞端粒酶活性为阴性。人间充质干细胞HMSC内参基因GAPDH可以正常检出,Ct平均值为13.01,RSD为3.8%,TERT基因未检出,人间充质干细胞HMSC的端粒酶活性为阴性。结论:本研究建立的RT-qPCR探针法重复性好,特异性高,能够准确检测端粒酶阳性细胞催化亚基mRNA的转录。可用于间充质干细胞的端粒酶活性分析,间接评估间充质干细胞成瘤性风险。 展开更多
关键词 荧光定量rt-PCR探针法 端粒酶催化亚基 端粒酶活性 干细胞 成瘤性
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恒温荧光法及RT-PCR法检测南美白对虾常见病
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作者 赵龙飞 韩煜茹 +1 位作者 王万兴 蔡树东 《现代畜牧兽医》 2025年第2期27-30,共4页
试验旨在探究恒温荧光法及RT-PCR法检测南美白对虾常见3类疾病(病毒类、细菌类、寄生虫类)的应用效果。试验随机抽取3份虾苗样品,每份样品15~20头,采用RT-PCR法检测肝胰腺细小病毒(HPV)、对虾杆状病毒(BPV),恒温荧光法检测致急性肝胰腺... 试验旨在探究恒温荧光法及RT-PCR法检测南美白对虾常见3类疾病(病毒类、细菌类、寄生虫类)的应用效果。试验随机抽取3份虾苗样品,每份样品15~20头,采用RT-PCR法检测肝胰腺细小病毒(HPV)、对虾杆状病毒(BPV),恒温荧光法检测致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(Vp_(AHPND))、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、黄头病毒(YHV)、虹彩病毒(DIVI)、哈维氏弧菌(HVS)、桃拉病毒(TSV)、虾肝肠胞虫(EHP)、白斑综合征病毒(WSSV)。结果显示,恒温荧光法检测Vp_(AHPND)、IHHNV、YHV、DIVI、TSV、HVS、WSSV、EHP等8种病原结果均为阴性,凝胶电泳试验中未出现HPV、BPV条带,表明虾苗未携带上述病原。研究表明,RT-PCR法与恒温荧光法可快速有效地检测南美白对虾虾苗病原携带情况。 展开更多
关键词 南美白对虾 恒温荧光法 rt-PCR法
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An intersection method for locating earthquakes in complex velocity models 被引量:1
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作者 赵爱华 丁志峰 《Applied Geophysics》 SCIE CSCD 2007年第4期294-300,共7页
The intersection method is one of the basic approaches for locating earthquakes and is not only robust but also efficient. However, its location accuracy is not high, especially for focal depth because the velocity mo... The intersection method is one of the basic approaches for locating earthquakes and is not only robust but also efficient. However, its location accuracy is not high, especially for focal depth because the velocity model used for the conventional intersection method is based on homogeneous or laterally homogeneous media, which is too simple. In order to improve the accuracy, we have modified the existing intersection method. In the modified approach, the earthquake loci are not assumed to be circular or hyperbolic and calculation accuracy is improved using a minimum traveltime tree algorithm for tracing rays. The numerical model shows that the modified method can locate earthquakes in complex velocity models. 展开更多
关键词 Earthquake location intersection method ray tracing minimum traveltime tree algorithm
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猪传染性胃肠炎病毒RT-CPA检测方法构建及初步应用 被引量:1
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作者 赵子惠 陈伯祥 +3 位作者 王佳 成伟伟 杨明 李元新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期65-71,共7页
为开发一种猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列,设计了3对引物,使用构建的重组质粒作为标准阳性对照,通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条,成... 为开发一种猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列,设计了3对引物,使用构建的重组质粒作为标准阳性对照,通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条,成功建立了一种一步法TGEV RT-CPA检测方法。本实验筛选最优条件为:Mg^(2+)浓度1.0 mmol/L,dNTP浓度0.8 mmol/L,Betaine浓度1.0 mol/L,BstDNA聚合酶浓度8.0 U,反应温度63℃,反应时间60 min,AMV逆转录酶5 U。本研究的扩增产物通过凝胶电泳显示出梯形条带,证明了其对TGEV的特异性检测和重复性良好,灵敏度高达10拷贝/μL。初步应用显示,该方法与TGEV抗原快速检测试剂盒的符合率超过90%,显示了高灵敏度。TGEV RT-CPA方法免去了RNA提取和cDNA合成的步骤,能够完成一步检测,且该方法不需要特殊仪器,适用于现场快速检测TGEV,为快速诊断和防控猪传染性胃肠炎提供了新的技术选择。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 rt-CPA S基因 检测方法
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猪流行性腹泻病毒变异毒株一步法RT-PCR鉴别检测方法的建立及临床应用 被引量:1
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作者 龚婷 马辉 +1 位作者 郭宏伟 郑鸣 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期18-22,29,共6页
为了建立一种快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株的病原学方法和掌握洛阳市PEDV变异毒株的流行规律,试验根据GenBank中PEDV变异毒株的特异性序列设计引物,通过优化退火温度、模板添加量、引物添加量建立PEDV变异毒株一步法RT-... 为了建立一种快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株的病原学方法和掌握洛阳市PEDV变异毒株的流行规律,试验根据GenBank中PEDV变异毒株的特异性序列设计引物,通过优化退火温度、模板添加量、引物添加量建立PEDV变异毒株一步法RT-PCR鉴别检测方法,并分析了该方法的特异性、敏感性和重复性;同时应用该方法检测采集自洛阳市的251份临床样品,并对不同地区、不同年份、不同养殖模式的检测结果进行比较分析。结果表明:优化后的退火温度为51℃,模板添加量为5μL,引物添加量为0.5μL;该方法对PEDV变异毒株能够扩增出550 bp特异性条带,而检测的PEDV经典毒株、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)均为阴性;对PEDV变异毒株RNA的最低检测限达到0.74 ng,对3份PEDV变异毒株阳性病料和3份PEDV变异毒株阴性病料重复检测3次的结果完全一致;检测采集于洛阳市251份临床样品的平均阳性率为29.48%,其中不同地区阳性率介于13.33%~44.44%之间,2018—2022年阳性率介于28.30%~31.58%之间,散养户和规模化猪场的阳性率分别为38.24%和19.13%。说明试验建立的PEDV变异毒株一步法RT-PCR鉴别检测方法特异、敏感、稳定、准确,洛阳市PEDV变异毒株的流行特点为个别地区较严重的情况、近几年流行率基本持平、散养户流行情况较规模化猪场严重。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 变异毒株 一步法rt-PCR鉴别检测方法 临床应用 流行规律
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