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一种斑马鱼肝脏特异表达转基因载体的制备方法
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作者 陈将飞 陈元红 靳大庆 《温州医学院学报》 CAS 2012年第5期453-457,共5页
目的:建立一套快速制备斑马鱼肝脏特异表达转基因载体的新方法。方法:首先利用multi-site gateway技术将斑马鱼肝脏脂肪酸结合蛋白(fabp10a)启动子片段与入门载体进行BP重组获得启动子的入门克隆pENTR-fabp10a,然后将目的基因克隆到载体... 目的:建立一套快速制备斑马鱼肝脏特异表达转基因载体的新方法。方法:首先利用multi-site gateway技术将斑马鱼肝脏脂肪酸结合蛋白(fabp10a)启动子片段与入门载体进行BP重组获得启动子的入门克隆pENTR-fabp10a,然后将目的基因克隆到载体pME-MCS中形成入门克隆pENTR-interest,最后通过multi-site gateway技术将pENTR-fabp10a、pENTR-interest和含有EGFP标记基因的p3E-IRES-EGFPpA质粒在Tol2转座载体pDestTol2pA2上进行定向重组即可获得斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体pTol2-fabp10a-interest-IRES-EGFP。本研究采用红色荧光蛋白基因DsRed2作为目的基因,用上述方法构建了转基因载体pTol2-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP,并将其注射至单细胞期斑马鱼胚胎中进行表达分析。结果:转基因载体pTol2-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP在斑马鱼肝脏组织中能实现红色和绿色荧光蛋白同步特异表达。结论:利用Tol2转座系统以及multi-site gateway技术构建斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体是一套行之有效的方法。 展开更多
关键词 to12转座子 斑马鱼 MULTI-SITE GATEWAY技术 肝脏特异性表达
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绒山羊细菌人工染色体重组及细胞转染系统
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作者 黄甜 曹忠洋 +1 位作者 杨耀辉 曹更生 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期317-328,共12页
绒山羊(Cashmere goat)是一类以生产山羊绒为主的山羊品种,因其绒毛纤细有光泽、轻盈、保暖而备受青睐。绒山羊角蛋白关联蛋白(Keratin associated protein,KAP)和骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP)在羊绒纤维毛囊细胞的... 绒山羊(Cashmere goat)是一类以生产山羊绒为主的山羊品种,因其绒毛纤细有光泽、轻盈、保暖而备受青睐。绒山羊角蛋白关联蛋白(Keratin associated protein,KAP)和骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP)在羊绒纤维毛囊细胞的增殖和分化过程中起重要作用。为了提高山羊绒的产量和品质,对包含kap6.3,kap8.1和bmp4基因的细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)进行研究。首先采用同源重组的方法对BAC进行修饰,其次将哺乳动物密码子优化过的Tol2转座子加入BAC中,最后采用Amaxa Nucleofector核转染技术将修饰过的BAC转入绒山羊成纤维细胞。结果表明成功构建了含有目的基因的BAC-Tol2载体。载体上包含UBC启动元件的egfp标记基因和真核筛选抗性neo基因,并且载体的两端加有loxp元件,为转染细胞后标记和抗性基因的去除作准备。载体转染细胞效率达到1%-6%,最高可达10%。成功获得了外源整合kap6.3、kap8.1和bmp4基因的细胞株,为以后克隆绒山羊作准备。研究表明,在BAC的修饰中应用Tol2转座子系统增加了电转染后的整合率,提高了BAC无错重组的效率和精确性。 展开更多
关键词 绒山羊 细菌人工染色体(BAC) to12转座子 电转染
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心脏特异表达绿色荧光斑马鱼模型的建立与评估 被引量:3
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作者 彭夕洋 陈婷芳 +3 位作者 黄婷 江志钢 吴秀山 邓云 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期511-518,共8页
本课题组前期研究中,利用斑马鱼cmlc2(Cardiac myosin light chain 2)基因启动子构建了一个用于斑马鱼心脏组织特异表达外源基因的转基因表达载体pTol2-cmlc2-IRES-EGFP。文章利用该载体构建了一个稳定表达EGFP的转基因斑马鱼品系,并初... 本课题组前期研究中,利用斑马鱼cmlc2(Cardiac myosin light chain 2)基因启动子构建了一个用于斑马鱼心脏组织特异表达外源基因的转基因表达载体pTol2-cmlc2-IRES-EGFP。文章利用该载体构建了一个稳定表达EGFP的转基因斑马鱼品系,并初步分析了EGFP的表达对该转基因斑马鱼品系的心脏发育和功能的影响。结果表明,在建立的转基因斑马鱼品系早期胚胎发育过程中,绿色荧光信号在心脏中特异表达,该表达模式与原位杂交分析的cmlc2的表达模式结果相同;该转基因斑马鱼品系的心脏形态及发育生长正常;进一步通过M-Mode分析心脏生理学功能的结果表明:该转基因品系心动周期、心率、收缩与舒张表面积及表面积缩短率等重要生理指标与正常野生型的斑马鱼对照组相比没有显著差别。以上结果表明该转基因品系中绿色荧光蛋白的表达对斑马鱼心脏的发育和功能没有影响。研究结果为进一步利用该载体建立外源目的基因转基因表达模型,研究心脏表达基因的功能奠定了重要基础。 展开更多
关键词 斑马鱼 转基因 EGFP Tol2转座子
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The impact of social capital on children's (6–12) use of ICT in urban communities: A field survey from Zhengzhou City, Henan Province
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作者 Ping WANG Shang HUANG +1 位作者 Miao MIAO Tingting LI 《Chinese Journal of Library and Information Science》 2015年第4期50-61,共12页
Purpose: This paper focuses on the impact of social capital on urban children's use behavior of information communication technology (ICT).Design/methodology/approach: Using the field survey and in-depth intervie... Purpose: This paper focuses on the impact of social capital on urban children's use behavior of information communication technology (ICT).Design/methodology/approach: Using the field survey and in-depth interviews, we interviewed 40 children aged 6 to 12 and their parents from a staff residential quarter of the Zhengzhou University--"Shengheyuan" community (SHY), and a commercial residential quarter--"Wanfenghuicheng" community (WFHC) in the high-tech zone of Zhengzhou City, Henan Province. We used the social capital theory to analyze the interviewees' record.Findings: In urban communities, social capital is the most important factor for children (aged 6 to 12) in their ICT use. Our findings indicate that children in families with higher levels of social capital, such as internal resources, family income, parent educational backgrounds and parents' social network, have more-highly developed ICT skills. Personal motivation and obstacles, such as lack of access to computers on a regular basis, also have an impact on children's ICT use. External social capital, including schools, libraries, and public service institutes, have little impact on children's ICT use, if not combined with internal social capital factors.Research limitations: Our research samples were collected from two communities within the same city, which may influence the generalization of this research result.Originality/value: To explore the social capital's influence on children's ICT use, we used field observation for ICT use of children aged 6 to 12 in urban communities in China, and studied the children's ICT behavior from the perspective of internal and external social capital. 展开更多
关键词 Social capital Children aged 6 to12 Information communication technology Field observation Community informatics
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Titles of papers published in FOUNDRY journal(Chinese edition) from Vol. 68, No. 7 to 12, 2019
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《China Foundry》 SCIE 2020年第1期66-68,共3页
关键词 No Chinese edition Titles of papers published in FOUNDRY journal from Vol to 12
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Titles of papers published in FOUNDRY journal(Chinese edition)from Vol. 66, No.7 to 12, 2017
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《China Foundry》 SCIE 2018年第1期82-84,共3页
关键词 Cr Cu Chinese edition)from Vol No.7 to 12
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