期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到11,155篇文章
< 1 2 … 250 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
患者胃窦黏膜组织幽门螺杆菌real time-PCR检测与分离培养结果的一致性分析 被引量：2
1
作者 杨雅名 何利华 +6 位作者 杨宁敏 宫雅楠 韩秀瑞 范如岳 薛志静 魏永越 张建中 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期641-645,共5页
目的针对胃黏膜组织标本的幽门螺杆菌(HP)感染诊断的real time-PCR检测和分离培养2种最常用方法进行结果一致性分析,为HP感染诊断方法的选择提供科学依据。方法在浙江省4个地区(萧山、温岭、苍南和湖州)各选取1所医院,采集2020年11月16... 目的针对胃黏膜组织标本的幽门螺杆菌(HP)感染诊断的real time-PCR检测和分离培养2种最常用方法进行结果一致性分析,为HP感染诊断方法的选择提供科学依据。方法在浙江省4个地区(萧山、温岭、苍南和湖州)各选取1所医院,采集2020年11月16日至12月7日送至杭州致远检验医学研究所进行HP分离培养和耐药性分析的全部患者胃窦部黏膜活检标本,共1312份。每份样本经研磨匀浆处理后分为2份,分别用于常规HP分离培养和real time-PCR检测(以cagH为检测靶点),2种方法平行双盲进行。检测结果的一致性及不同医院来源样本间的差异用χ^(2)检验、Fisher精确检验以及独立样本t检验等统计学方法进行分析。结果1312份样本中,分离培养法和real time-PCR法的阳性率分别为29.34%(385/1312)、28.51%(374/1312),差异无统计学意义(P=0.636)。来自4所医院的标本,2种方法的检出率差异均无统计学意义(P=0.075),二者在萧山某院、温岭某院、苍南某院、湖州某院样本以及总体样本中的Kappa值分别为0.84、0.89、0.75、0.91、0.85。real time-PCR法的灵敏度和特异度分别为89.26%、100.00%。在real time-PCR法检测阳性而培养阴性的样本中,检测Ct值为25.47~34.97,均值为30.90,90%的Ct值均≤34.46,频数最高组为29.00~30.00组。结论分离培养法和real time-PCR法在临床胃黏膜标本HP诊断中均可达到较高的检测效能,且2种方法检出结果一致性良好,可应用于HP个体化治疗,以便在做出HP感染诊断的同时提供受检者的药敏检测结果。标本中HP菌量及标本的保存运输条件可能对结果产生重要影响。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 胃窦 分离培养 Real time-pcr
原文传递
18srDNA为内参照的Real-Time-PCR方法检测半夏病毒 被引量：2
2
作者 何煜波 陈集双 +2 位作者 陈海敏 冯俊丽 高必达 《晓庄学院自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2006年第3期103-106,共4页
利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.... 利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.以带病毒半夏母株为外植体培养的组培苗,其病毒含量以叶片中的相对较高,在块茎和愈伤组织中病毒相对较低.而ELISA方法在检测病毒含量低的样品时有假阴性结果;RT-PCR方法灵敏度可靠但不适宜精确量化. 展开更多
关键词 实时荧光PCR 黄瓜花叶病毒 反转录-PCR 双夹心酶联免疫反应 半夏
在线阅读 下载PDF
猪肠道病毒和猪捷申病毒双重荧光RT-PCR检测方法的建立
3
作者 莫玲 于新友 +5 位作者 吕素芳 毕艳丽 张颖 李天芝 Ashenafi Kiros Wubshet 王文秀 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期49-53,共5页
为建立同时检测猪肠道病毒(PEV)和猪捷申病毒(PTV)的荧光RT-PCR方法,根据NCBI中PEV VP1(NCBI AF363453)和PTV VP1(NCBI GQ293092)基因序列,分别设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增程序,建立了一种无需提取核酸即可同时检测PEV... 为建立同时检测猪肠道病毒(PEV)和猪捷申病毒(PTV)的荧光RT-PCR方法,根据NCBI中PEV VP1(NCBI AF363453)和PTV VP1(NCBI GQ293092)基因序列,分别设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增程序,建立了一种无需提取核酸即可同时检测PEV和PTV的双重荧光RT-PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性及重复性进行评估,并对临床样品进行检测。结果表明,20μL体系中各引物和探针最适加入量为:PEV-F 0.8μL、PEV-R 1.3μL、PEV-P 0.6μL、PTV-F 1.2μL、PTV-R 1.4μL和PTV-P 0.7μL,优化后的扩增程序为:90℃3 min;60℃反转录5 min;95℃5 s,52℃退火延伸20 s(此处收集荧光),共计40个循环。该对猪常见病原均无扩增,对PEV和PTV检测敏感性分别为5.13 TCID 50/100μL和3.47 TCID 50/100μL,对135份临床样品检测结果与传统核酸提取法结果一致。成功建立了PEV和PTV的免提取核酸双重荧光RT-PCR方法,特异性好,敏感性高,可用于临床两种疑似病例的快速检测。 展开更多
关键词 猪肠道病毒 猪捷申病毒 免提取核酸 荧光PCR
在线阅读 下载PDF
黄芪根腐病菌锐顶镰刀菌的实时荧光定量PCR快速检测方法
4
作者 祖未希 赵丽梅 +2 位作者 赵雪姣 王雪 高芬 《河南农业科学》 北大核心 2026年第3期107-117,共11页
锐顶镰刀菌(Fusarium acuminatum)是黄芪根腐病的重要病原菌之一。为实现锐顶镰刀菌的快速检测和准确定量,建立了一种实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并对其在黄芪植株和土壤样本检测中的实用性进行验证。结果表明,基于锐顶镰刀菌EF-1... 锐顶镰刀菌(Fusarium acuminatum)是黄芪根腐病的重要病原菌之一。为实现锐顶镰刀菌的快速检测和准确定量,建立了一种实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并对其在黄芪植株和土壤样本检测中的实用性进行验证。结果表明,基于锐顶镰刀菌EF-1α序列设计的引物Fae F4/Fae R4特异性强,所建方法对黄芪和土壤中锐顶镰刀菌的检测灵敏度分别为DNA质量浓度2.56×10^(-3)ng/μL和分生孢子1×10^(2)个/g,标准曲线的相关系数分别为0.9997和0.9838,扩增效率分别为1.07和0.87。重复性评价显示方法可靠、稳定。利用该方法检测发现,黄芪样本接种锐顶镰刀菌1 h后即可检测到病菌存在,且侵染量随时间逐渐上升;田间疑似根腐发病样本的锐顶镰刀菌阳性检出率为100%;田间发病和未发病土壤样本中,病菌阳性检出率也为100%,且相同种植年限的发病土带菌量显著高于未发病土。因此,所建qPCR检测方法可用于黄芪植株和土壤中锐顶镰刀菌的检测,为黄芪根腐病的精准监测和及时防控提供可靠的技术支撑。 展开更多
关键词 黄芪 根腐病 锐顶镰刀菌 实时荧光定量PCR 检测
在线阅读 下载PDF
牛星状病毒和诺如病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
5
作者 姜玲玲 罗文菊 +4 位作者 艾蓉 周景瑞 张琴 冯明祥 余波 《贵州农业科学》 2026年第3期116-123,共8页
【目的】建立一种同时快速检测牛星状病毒(BAstV)和诺如病毒(BNoV)的方法,为及时制定相关疫情防控方案提供技术指导。【方法】根据BAstV中ORF2基因和BNoV中RdRp基因的保守区域分别设计特异性引物,建立能同时检测BAstV和BNoV的双重TaqMa... 【目的】建立一种同时快速检测牛星状病毒(BAstV)和诺如病毒(BNoV)的方法,为及时制定相关疫情防控方案提供技术指导。【方法】根据BAstV中ORF2基因和BNoV中RdRp基因的保守区域分别设计特异性引物,建立能同时检测BAstV和BNoV的双重TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法,对该方法的敏感性、特异性、重复性及临床样品进行试验检测。【结果】建立的双重TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法可扩增BAstV和BNoV核酸,未能扩增牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛环曲病毒(BToV)、牛冠状病毒(BCoV)核酸,特异性强;对BAstV和BNoV的最低检测量分别为1.19 pg/μL和0.82 pg/μL,敏感性高;重复性试验检测中,变异系数均小于1%,重复性好;临床检测213份样品,BAstV和BNoV的阳性检出率分别为23.94%和7.98%,明显高于单一SYBR Green染料法。【结论】牛星状病毒和诺如病毒双重荧光PCR方法敏感性高、特异性强,用便携式荧光定量PCR仪可在60 min内完成检测,适用于养殖场BAstV和BNoV感染的快速检测。 展开更多
关键词 牛 牛星状病毒 牛诺如病毒 犊牛腹泻 双重感染 实时荧光定量RT-PCR
在线阅读 下载PDF
早期分泌抗原靶标6免疫组织化学联合抗酸染色法检测在结核病病理诊断中的价值
6
作者 童海涛 郑叶 +5 位作者 周静 冯艳玲 石雨涵 曾东 郭文娟 宋曙 《安徽医药》 2026年第1期160-164,I0007,共6页
目的探讨早期分泌抗原靶标6(early secreted antigenic target 6,ESAT-6)联合抗酸染色检测在结核病病理诊断中的意义。方法收集2017年1—8月上海市公共卫生临床中心病理学诊断结核病的病人81例临床资料,评价ESAT-6免疫组织化学法、抗酸... 目的探讨早期分泌抗原靶标6(early secreted antigenic target 6,ESAT-6)联合抗酸染色检测在结核病病理诊断中的意义。方法收集2017年1—8月上海市公共卫生临床中心病理学诊断结核病的病人81例临床资料,评价ESAT-6免疫组织化学法、抗酸染色法、实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)法检测对结核病的诊断效能,分析不同方法检测的一致性关系,并以qRT-PCR法为标准衡量ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测的效果。结果3种检测方法按结核杆菌检出率从高到低分别为qRT-PCR法(87.65%,71/81)、抗酸染色法(72.84%,59/81)、ESAT-6免疫组织化学法(64.20%,52/81)(χ^(2)=12.13,P=0.002)。3种方法在不同病变组织的结核杆菌检出率差异无统计学意义(χ^(2)=7.53、4.94、5.92,P=0.110、0.294、0.210)。ESAT-6免疫组织化学法与抗酸染色法检出率差异无统计学意义(χ^(2)=1.40,P=0.236),3种方法总检出率为93.83%,qRT-PCR法检出率显著高于ESAT-6免疫组织化学法与抗酸染色法(χ^(2)=12.19,P=0.001;χ^(2)=5.61,P=0.018)。抗酸染色和免疫组织化学法联合检测检出率(85.19%,69/81)稍低于单独使用qRT-PCR检测检出率(87.65%,71/81),差异无统计学意义(χ^(2)=0.21,P=0.647)。64例样本ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测与qRT-PCR检测均为阳性,5例样本ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测与qRT-PCR检测均为阴性,检出一致性为93.82%(Kappa=0.37,P=0.028)。结论ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测在结核病病理诊断中有较高价值。 展开更多
关键词 结核病 病理诊断 免疫组织化学 早期分泌抗原靶标6(ESAT-6) 抗酸染色 实时荧光定量PCR
暂未订购
猪肉中常见的人畜共患细菌和寄生虫多重荧光PCR检测方法的建立与初步应用
7
作者 韩亚星 赵格 +7 位作者 赵建梅 宋时萍 高玉斌 刘娜 黄秀梅 王琳 王君玮 黄娟 《动物医学进展》 北大核心 2026年第4期54-63,共10页
为了建立快速、敏感、可同时检测猪肉中多种病原的多重荧光定量PCR,本研究针对猪肉中13种重要病原的特异基因保守序列,分别设计了引物及不同荧光基团标记的TaqMan探针,构建了含有目的基因的重组质粒,并用其进行反应体系优化,以及敏感性... 为了建立快速、敏感、可同时检测猪肉中多种病原的多重荧光定量PCR,本研究针对猪肉中13种重要病原的特异基因保守序列,分别设计了引物及不同荧光基团标记的TaqMan探针,构建了含有目的基因的重组质粒,并用其进行反应体系优化,以及敏感性、特异性和重复性验证。结果显示,建立的3组三重与1组四重荧光定量PCR法能够在同一反应条件下2 h内完成对13种病原的特异性检测,反应体系中的多条引物探针间不发生交叉反应;最低检出限:致病性大肠埃希氏菌、沙门氏菌均为1拷贝/μL,单增李斯特菌为10拷贝/μL,结肠弯曲杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺菌均为10~2拷贝/μL,住肉孢子虫、猪丹毒杆菌、弓形虫、囊尾蚴、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌均为10~3拷贝/μL;重复性试验变异系数均在2.33%以下。多重荧光PCR和普通PCR法对30份猪肉样品的病原总体检出率分别为83%(25/30)和56.7%(17/30),二者总体符合率达到66.7%~100%。猪肉中常见13种病原的三重/四重荧光定量PCR检测方法的成功建立,为猪肉病原学检测和流行病学调查提供技术支撑,有助于保障猪肉食品安全。 展开更多
关键词 猪肉 病原菌 寄生虫 病原检测 多重荧光定量PCR
在线阅读 下载PDF
山茶花花香生物合成相关基因的实时荧光定量PCR内参基因的筛选及验证
8
作者 陈艺荃 樊荣辉 +3 位作者 林兵 陈燕 吴建设 钟淮钦 《园艺学报》 北大核心 2026年第2期598-612,共15页
为研究山茶花花香生物合成相关基因的表达模式,筛选在山茶花中稳定表达的内参基因。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测10个候选内参基因(α-TUB、CYP、PP2A、ACTIN1、ACTIN2、GAPDH、UBQ、AQP、UBC和HIS)在不同的组织、开花阶段、... 为研究山茶花花香生物合成相关基因的表达模式,筛选在山茶花中稳定表达的内参基因。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测10个候选内参基因(α-TUB、CYP、PP2A、ACTIN1、ACTIN2、GAPDH、UBQ、AQP、UBC和HIS)在不同的组织、开花阶段、品种和混合样品中的表达水平,geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder 4种算法综合评估和鉴定内参基因的表达稳定性。结果显示,10个候选内参基因的引物特异性好,均具有作为内参基因的性能;分析山茶花不同开花阶段基因表达时可选用PP2A和UBC,分析不同组织和不同香型品种基因表达时最理想的内参基因为PP2A和ACTIN1,其中PP2A在山茶花不同的组织、开花阶段、香型品种和混合样品中均能稳定表达。通过qRT-PCR扩增了花香相关的9个靶基因,验证PP2A是山茶花花香相关基因表达研究的最佳内参基因,而以传统管家基因GAPDH为内参时,山茶花芳樟醇/橙花叔醇合酶基因CaLIS/NES1和苯乙醛还原酶基因CaPAR的表达模式出现较大偏差。 展开更多
关键词 山茶花 花香 内参基因 实时荧光定量PCR 表达分析 PP2A
原文传递
灭活鸭肠炎病毒UL31基因定性标准样品研制及初步试用
9
作者 姜怀玉 张媛 +11 位作者 史莉圆 穆颖 张晶晶 周梦棋 顾小雪 邵红霞 秦爱建 叶家美 王传彬 李琦 刘玉良 格日勒图 《中国家禽》 北大核心 2026年第4期61-68,共8页
为研制灭活鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)UL31基因定性标准样品,研究以DEV VAC株为原料,接种SPF鸭胚,经病毒鉴定、灭活处理以及冷冻干燥等技术流程,采用荧光定量PCR(qPCR)方法对所制备的标准样品进行均匀性检验、稳定性监测和评... 为研制灭活鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)UL31基因定性标准样品,研究以DEV VAC株为原料,接种SPF鸭胚,经病毒鉴定、灭活处理以及冷冻干燥等技术流程,采用荧光定量PCR(qPCR)方法对所制备的标准样品进行均匀性检验、稳定性监测和评估,并委托不同单位进行协作定值和试用。结果显示:该标准样品纯净、均匀,无外源病毒污染;稳定性良好,在4℃、25℃、37℃环境中可至少稳定保存14 d、7 d、5 d,在-20℃环境中可至少稳定保存12个月,且冻融10次后仍稳定;9家单位协作定值和3家试用结果均显示为鸭肠炎病毒UL31基因核酸阳性。研究表明,研制的灭活鸭肠炎病毒UL31基因定性标准样品可作为DEV核酸检测阳性质控品,用于DEV核酸检测质量控制、检测能力比对验证以及试剂盒检测效果评价等工作。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 UL31基因 标准样品 核酸检测 荧光定量PCR 质量控制
原文传递
传染性胰脏坏死病毒(IPNV)检测及区分1、5基因型方法的建立及应用
10
作者 刘威彤 张振 +3 位作者 赵景壮 邵轶智 卢彤岩 徐黎明 《水产学报》 北大核心 2026年第2期221-231,共11页
【目的】建立传染性胰脏坏死病毒(IPNV)鉴定与基因分型一体化检测方法。【方法】基于IPNV VP2基因序列保守片段,设计了用于IPNV高效检测的探针法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)引物;进一步针对IPNV 1型和5型毒株特异性片段设计了用于IPNV基... 【目的】建立传染性胰脏坏死病毒(IPNV)鉴定与基因分型一体化检测方法。【方法】基于IPNV VP2基因序列保守片段,设计了用于IPNV高效检测的探针法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)引物;进一步针对IPNV 1型和5型毒株特异性片段设计了用于IPNV基因分型的聚合酶链式反应(PCR)引物组,并对检测方法进行优化与验证。【结果】本研究建立的RT-qPCR检测方法对IPNV具有较高的特异性,对病毒性出血性败血症病毒(VHSV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的核酸均无扩增;灵敏度高,对IPNV 1型和5型检测限均低至10个/μL拷贝数;稳定性良好,批内和批间重复变异系数均小于1%。利用本研究建立的RT-qPCR和PCR方法对来自不同虹鳟养殖区域的30份已鉴定样本进行IPNV检测与基因分型,结果符合率为100%。【结论】本研究建立的方法能够特异、稳定、灵敏地检测IPNV并准确区分基因1型或5型毒株,实现了病原鉴定与基因分型的高效一体化检测。本研究为我国IPNV的监测提供了有效的工具,为IPN病害的分类防控提供了科学指导。 展开更多
关键词 冷水性鱼类 传染性胰脏坏死病毒(IPNV) 基因型分析 实时荧光定量PCR 快速检测
原文传递
基于EVM009基因的鼠痘病毒荧光定量检测方法建立
11
作者 赵立磊 任善会 +11 位作者 王会宝 高小龙 姚威 杨雪 张红强 王小龙 张强蓉 喇萍 叶国荣 陈豪泰 孙跃峰 樊江峰 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期9-14,共6页
为建立一种快速测定鼠痘病毒(ECTV)含量的检测方法,针对鼠痘病毒的基因序列,建立了靶向ECTV EVM009基因的荧光定量PCR检测方法。根据ECTV全基因序列,设计出4对qPCR引物并评价其特异性及敏感性。最终通过筛选得到靶向于ECTV EVM009基因... 为建立一种快速测定鼠痘病毒(ECTV)含量的检测方法,针对鼠痘病毒的基因序列,建立了靶向ECTV EVM009基因的荧光定量PCR检测方法。根据ECTV全基因序列,设计出4对qPCR引物并评价其特异性及敏感性。最终通过筛选得到靶向于ECTV EVM009基因的一对特异性高、灵敏度强的荧光定量PCR引物。利用构建的pCAGGS-EVM009真核表达质粒绘制标准曲线获得标准曲线y=-3.5099 x+41.30,线性相关系数R^(2)=0.9992。扩增效率达到92.7%;对重组质粒标准品的最低检测限为4.91×10^(0)拷贝/μL;组内与组间的重复试验变异系数均小于2%;仅能有效检测ECTV,与VACV、GPTV、SPPV、ORFV和LSDV均无交叉反应。结果表明,建立的荧光定量检测方法特异性强、敏感性高及重复性好,可以用于ECTV感染小鼠模型中病理组织中病毒载量的测定。 展开更多
关键词 鼠痘病毒 EVM009基因 荧光定量PCR 小鼠模型
在线阅读 下载PDF
猫疱疹病毒Ⅰ型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用
12
作者 刘雅雯 赵广荣 +9 位作者 许丽文 孙亚杰 李双双 刘佳佳 李智杰 张成琪 符建海 张子闯 胡博 白雪 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第1期79-84,共6页
猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方... 猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方法,构建标准曲线后分别验证该方法的特异性、敏感性、重复性,并将其进一步应用于人工感染猫产生的临床样本检测。结果:该特异性引物与猫杯状病毒(FCV)、猫细小病毒(FPV)和猫冠状病毒(FCoV)均未出现交叉反应,检测下限为14.78 copies/μL,组内和组间重复试验的变异系数均低于2%;该方法对临床样本的检出率比常规PCR高出25.46%;通过该方法检测人工感染FHV-1强毒后猫的每日排毒量,结果呈现上升趋势,与临床发病程度相符,猫的脏器病毒载量存在个体差异,但集中在心脏、肺脏、肠道和膀胱中检出。综上,该研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法对FHV-1具有较好的特异性、灵敏度和重复性,为FHV-1感染的快速诊断以及疾病的防控提供方法支持。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒Ⅰ型 荧光定量PCR SYBR GreenⅠ US6基因 猫病毒性鼻气管炎
在线阅读 下载PDF
血清学检测指标及实时荧光定量PCR检测在侵袭性念珠菌病患者中的诊断价值
13
作者 MD ALI HOSSAIN 彭亮 +2 位作者 袁余 周晓涵 马莹 《四川大学学报(医学版)》 北大核心 2026年第1期170-176,共7页
目的评估血清学检测指标1,3-β-D-葡聚糖试验(G试验)、念珠菌甘露聚糖(Mn)抗原、念珠菌甘露聚糖IgG抗体(Mn-IgG)和实时荧光定量PCR(qPCR)检测在侵袭性念珠菌病(IC)患者中的临床诊断价值。方法收集四川大学华西医院2022年12月-2024年12... 目的评估血清学检测指标1,3-β-D-葡聚糖试验(G试验)、念珠菌甘露聚糖(Mn)抗原、念珠菌甘露聚糖IgG抗体(Mn-IgG)和实时荧光定量PCR(qPCR)检测在侵袭性念珠菌病(IC)患者中的临床诊断价值。方法收集四川大学华西医院2022年12月-2024年12月期间通过血培养及无菌体液培养确诊为IC患者的血清样本79例作为IC组,排除IC感染患者的血清样本83例作为非IC组,进行G试验(磁微粒化学发光法)、Mn抗原(ELISA法)、Mn-IgG抗体(化学发光法)和qPCR检测。比较分析G试验、Mn抗原、Mn-IgG抗体和qPCR检测及联合检测对IC诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值,绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算ROC曲线下面积(AUC)。结果3种血清学检测指标单独检测对IC诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为:G试验62.03%、94.87%、92.45%、71.15%;Mn抗原65.63%、86.59%、79.25%、76.34%;Mn-IgG抗体31.65%、87.95%、71.43%、57.48%。G试验、Mn抗原、Mn-IgG三项联合检测敏感性提高至73.44%。基于ROC曲线分析,各血清学检测指标诊断IC的AUC分别为:G试验0.862(95%CI:0.803-0.922)、Mn试验0.853(95%CI:0.790-0.915)、Mn-IgG 0.603(95%CI:0.514-0.692)。G试验+Mn试验两项联合检测、G试验+Mn-IgG两项联合检测、G试验+Mn试验+Mn-IgG三项联合检测的AUC分别为0.875(95%CI:0.809-0.925)、0.869(95%CI:0.805-0.917)和0.875(95%CI:0.809-0.924),优于单独检测。qPCR对IC诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为100.00%、98.80%、98.75%、100.00%。以培养菌株基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定结果为金标准,qPCR检测对白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌的诊断一致性分别为100.00%、100.00%、94.44%和90.00%。结论G试验、Mn抗原和Mn-IgG抗体联合检测可提高诊断敏感性,有助于IC的早期诊断。qPCR对IC具有优异的诊断性能,可将IC常见念珠菌鉴定至种水平,并可覆盖其他念珠菌种,与临床培养方法结果一致性好。 展开更多
关键词 1 3-β-D葡聚糖 念珠菌甘露聚糖抗原 念珠菌甘露聚糖IgG抗体 实时荧光定量PCR 侵袭性念珠菌病
原文传递
MNS杂交糖蛋白GP.Vw基因分型方法的建立及其在广州献血者中的分布研究
14
作者 刘杏 黄晓斌 +3 位作者 苏玮 戚艳萍 邓雅雯 魏玲 《热带医学杂志》 2026年第1期29-32,F0004,共5页
目的建立MNS杂交糖蛋白GP.Vw的基因分型方法,并筛查其在广州献血者人群中的分布频率。方法收集2806例广州血液中心无偿献血者全血标本,利用DNA提取试剂盒抽提基因组DNA。根据GYPA外显子3的序列特征,设计并合成GYP*Vw基因序列特异性引物... 目的建立MNS杂交糖蛋白GP.Vw的基因分型方法,并筛查其在广州献血者人群中的分布频率。方法收集2806例广州血液中心无偿献血者全血标本,利用DNA提取试剂盒抽提基因组DNA。根据GYPA外显子3的序列特征,设计并合成GYP*Vw基因序列特异性引物,分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)和直接测序法对2806例献血者标本的GYP*Vw基因进行分型。结果成功建立了GYP*Vw的qPCR基因分型方法,2806例标本中未检测到GYP*Vw等位基因,并且qPCR和直接测序法的检测结果完全一致。结论qPCR是一种检测GYP*Vw等位基因的简便快捷的方法。同时,该例成功的引物设计经验,可作为其他同源性基因引物设计的参考。GP.Vw杂交糖蛋白在广州献血者人群中的分布频率低。 展开更多
关键词 MNS杂交糖蛋白 GP.Vw 实时荧光定量PCR
原文传递
气肿疽梭菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
15
作者 黄保全 张波 +6 位作者 杜宏鑫 徐颖 殷国璐 刘喆 崔起超 薛书江 王洋 《延边大学农学学报》 2026年第1期54-60,共7页
为了建立一种快速而准确的气肿疽梭菌(Clostridium chauvoei)诊断方法,该实验根据GenBank上发表的气肿疽梭菌CctA基因,设计实时荧光定量PCR(qPCR)的特异性引物与探针,优化方法的各反应条件,并采用该方法定量分析了攻毒2~7 d后小鼠各组... 为了建立一种快速而准确的气肿疽梭菌(Clostridium chauvoei)诊断方法,该实验根据GenBank上发表的气肿疽梭菌CctA基因,设计实时荧光定量PCR(qPCR)的特异性引物与探针,优化方法的各反应条件,并采用该方法定量分析了攻毒2~7 d后小鼠各组织的病原体载量。结果表明:优化后最佳退火温度为60℃,引物和探针浓度分别为0.5μmol/L和0.35μmol/L。标准曲线的相关系数为0.998,斜率为-3.2,扩增效率为105%。特异性实验显示,该方法仅对气肿疽梭菌产生荧光信号,对大肠杆菌、志贺氏菌、李斯特菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、肉毒梭菌、腐败梭菌均无交叉反应。灵敏度检测显示,该方法可检测0.6拷贝/μL病原,重复性实验结果表明,组内变异系数(coefficientof variation,CV)为0.60%~1.23%,组间CV为0.94%~1.51%,均<10%。攻毒后,细菌载量在5~6 d达到峰值,其中血液中细菌载量最高为7.64×10^(7)拷贝/μL,肺部细菌载量最低为7.31×10^(2)拷贝/μL。综上,该研究建立的检测方法敏感、特异,并能初步检测气肿疽梭菌在小白鼠各组织中的变化规律,为气肿疽诊断和防治提供实验数据。 展开更多
关键词 气肿疽梭菌 CctA基因 实时荧光定量PCR
在线阅读 下载PDF
苹果软枝病毒2实时荧光定量PCR检测技术的建立及应用
16
作者 刘成龙 李凯杰 +5 位作者 范旭东 任芳 崔亚伟 张凤娟 董雅凤 胡国君 《中国果树》 2026年第3期97-104,共8页
苹果软枝病毒2(apple rubbery wood virus 2,ARWV-2)隶属Phenuiviridae科Rubodvirus属,与苹果软枝病的发生有关。根据ARWV-2的L、Ma和Sa链基因组序列分别设计了2对引物,验证后3条链各保留1对用于荧光定量PCR(qPCR)扩增,即AR-2L-F2/R2、A... 苹果软枝病毒2(apple rubbery wood virus 2,ARWV-2)隶属Phenuiviridae科Rubodvirus属,与苹果软枝病的发生有关。根据ARWV-2的L、Ma和Sa链基因组序列分别设计了2对引物,验证后3条链各保留1对用于荧光定量PCR(qPCR)扩增,即AR-2L-F2/R2、AR-2Ma-F2/R2和AR-2Sa-F1/R1。体系优化及灵敏度测定结果显示:3对引物的最佳退火温度均为59.0℃;用量为0.4μL;扩增效率分别为92.1%、92.6%和92.1%;相关系数分别为0.996、0.996和0.998;检测灵敏度分别为10^(4)、10^(4)和10^(5),是普通PCR的100倍,且AR-2Sa-F1/R1为最优引物。随机选取150株田间苹果样品进行检测,结果显示,普通PCR对ARWV-2的检出率为12.67%,而qPCR为22.00%。建立的ARWV-2 TB Green染料法qPCR检测技术特异性强、灵敏度高,可用于田间样品的检测。 展开更多
关键词 苹果 苹果软枝病毒2 实时荧光定量PCR 检测
原文传递
布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
17
作者 彭海涛 高阳 +6 位作者 刘雨欣 顾德媛 张东 张如 许会会 陈思 杨艳玲 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期369-377,共9页
旨在建立一种经济高效的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法,用于布鲁菌感染的动物及动物产品的快速检测并区分牛种布鲁菌和其他种布鲁菌感染的动物,为临床常的疫苗和研发的新型疫苗提供科学有效的鉴别诊断方法。本研究根据GenBan... 旨在建立一种经济高效的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法,用于布鲁菌感染的动物及动物产品的快速检测并区分牛种布鲁菌和其他种布鲁菌感染的动物,为临床常的疫苗和研发的新型疫苗提供科学有效的鉴别诊断方法。本研究根据GenBank公布的galU和Omp31的序列设计检测引物和探针,构建重组质粒,对方法特异性、灵敏性及重复性评价,检测实验室制备和临床动物布病血清及组织样品。结果表明,成功建立了布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,该方法最低检测限为1.93×10^(0) copies·μL^(-1),与其他革兰阴性菌无交叉反应,批内及批间变异系数均小于2%。利用本研究建立的方法检测实验室制备样品和临床采集样品共156份,与BCSP31-PCR相比,两者阳性符合率为69.75%;与PCR和虎红凝集试验相比,灵敏性更高,双重TaqMan荧光定量PCR的敏感性为100%,PCR的敏感性为69.75%,虎红凝集试验的敏感性为58.65%。本研究建立的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,为布鲁菌临床鉴别检测、流行病学调查及净化提供技术支持。 展开更多
关键词 布鲁菌 双重Taq Man荧光定量PCR 检测方法 鉴别诊断
在线阅读 下载PDF
公共卫生实验室沙门菌血清型鉴定对比分析
18
作者 曾令怡 赵盼 +4 位作者 黄振洲 郑伟 楼秀琴 俞骅 郑之北 《中国预防医学杂志》 2026年第1期111-117,共7页
目的联合应用血清凝集试验、xTAG液态悬浮芯片法、3重实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法,以及全基因组测序技术,建立适用于公共卫生实验室的沙门菌血清型鉴定策略。方法对464株沙门菌分别用血清凝集试验、xTAG... 目的联合应用血清凝集试验、xTAG液态悬浮芯片法、3重实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法,以及全基因组测序技术,建立适用于公共卫生实验室的沙门菌血清型鉴定策略。方法对464株沙门菌分别用血清凝集试验、xTAG液态悬浮芯片法鉴定其血清型;对717株疑似鼠伤寒沙门菌及其单相变种,用3重实时荧光PCR法进一步检测;对个别疑难菌株,进行全基因组测序。比较各种方法的结果、优缺点及适用性。结果与血清凝集试验比较,xTAG液态悬浮芯片法的符合率为95.91%(445/464),3重实时荧光PCR法的符合率为99.58%(714/717),xTAG液态悬浮芯片法与3重实时荧光PCR法的符合率为98.92%(183/185);1株无法确定血清型的临床源菌株,经全基因组测序确定为“非典型”鼠伤寒单相变种,测序结果显示其存在二相鞭毛编码基因fljB,但fljB启动区的iroB基因所在位置被tetA、tetC、tetR四环素类耐药基因等取代。血清凝集试验是沙门菌血清分型的“金标准”,但检测效率较低,适用于少量沙门菌的血清分型;xTAG液态悬浮芯片法具有高通量、高效率的特点,但PCR后需开盖进行磁珠杂交,操作相对繁琐,适用于较大批量沙门菌的血清型鉴定;3重实时荧光PCR法快速简便,但仅能用于检测鼠伤寒沙门菌及其单相变种,适用于血清凝集试验提示为鼠伤寒或其单相变种菌株的鉴别;全基因组测序可提供菌株基因组全貌,但通常需2~3 d,外送测序所需周期更长,因此较适用于疑难或非应急菌株血清型的鉴定,并进行基因组的深入分析。结论血清凝集试验、xTAG液态悬浮芯片法、3重实时荧光PCR法,以及全基因组测序用于沙门菌的血清型鉴定,均具有良好的准确性,但各有其优缺点和适用性。可联合应用上述方法,建立适用于公共卫生实验室的沙门菌血清型鉴定策略,从而提高监测质量和效率。 展开更多
关键词 沙门菌 血清型 xTAG技术 3重实时荧光聚合酶链式反应 全基因组测序
原文传递
甘蔗杆状病毒绝对荧光定量检测方法的建立与应用
19
作者 夏宝山 王文治 +2 位作者 张树珍 袁潜华 沈林波 《热带生物学报(中英文)》 2026年第1期108-116,共9页
为建立甘蔗杆状病毒(sugarcane bacilliform virus,SCBV)的绝对荧光定量PCR检测方法,并测定甘蔗不同组织部位中SCBV载量,本研究从SCBV基因组保守区(SCBV-ORF1)设计特异性扩增引物,构建重组质粒pMD19T-SCBV-P1作为阳性质粒标准品,以其为... 为建立甘蔗杆状病毒(sugarcane bacilliform virus,SCBV)的绝对荧光定量PCR检测方法,并测定甘蔗不同组织部位中SCBV载量,本研究从SCBV基因组保守区(SCBV-ORF1)设计特异性扩增引物,构建重组质粒pMD19T-SCBV-P1作为阳性质粒标准品,以其为模板建立SCBV绝对荧光定量PCR检测方法。测试该方法的灵敏性、特异性和稳定性,并用该方法测定甘蔗种质不同组织中SCBV载量。结果表明,将含有SCBV基因组序列的重组质粒10倍比稀释成标准品,以其为模板进行荧光定量PCR,获得标准曲线y=-3.3397×log(x)+32.05,相关系数r^(2)=0.999;表明Cq值与标准品浓度拷贝数的对数呈线性关系。研究建立的绝对荧光定量PCR方法展现出高灵敏度特征,其检测下限可达到7 copies·μL^(-1),相较于常规PCR检测法,该方法的灵敏度提高了近100倍。该方法特异性高,可特异检测SCBV;重复性良好,批内和批间的变异系数均在0.11%~0.90%。甘蔗不同组织部位SCBV累积水平存在显著差异,其中正4叶SCBV载量显著高于其他组织部位(P<0.05)。本研究建立了能灵敏特异检测SCBV的绝对荧光定量PCR方法,为SCBV的诊断提供一种高效的定量检测方法,明确了甘蔗中SCBV检测的最佳采样部位是正4叶。 展开更多
关键词 甘蔗杆状病毒 绝对荧光定量PCR 病毒载量 检测
在线阅读 下载PDF
槲树不同器官及盐胁迫下qRT-PCR的内参基因筛选及验证
20
作者 蒋萌 白晓宁 +4 位作者 王文波 赵亚洲 胡增辉 苏淑钗 冷平生 《中南林业科技大学学报》 北大核心 2026年第1期211-220,234,共11页
[目的]筛选在不同器官及盐胁迫下表达稳定的槲树内参基因,验证所选内参基因在qRT-PCR中的适用性和稳定性,为精准评价槲树目标基因表达量提供理论依据。[方法]从槲树盐胁迫转录组中筛选出10个高表达传统管家基因作为候选内参基因(TUBA、T... [目的]筛选在不同器官及盐胁迫下表达稳定的槲树内参基因,验证所选内参基因在qRT-PCR中的适用性和稳定性,为精准评价槲树目标基因表达量提供理论依据。[方法]从槲树盐胁迫转录组中筛选出10个高表达传统管家基因作为候选内参基因(TUBA、TUBA、GAPDH、Actin、EIF2B5、UBE2W、ADCK、EEF1B、UBE2J1和EIF5A),采用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder软件和ΔCt程序对候选基因在槲树中的表达稳定性进行分析。以槲树6个器官(根、茎、叶、叶芽、花序、种子)及盐胁迫下4个不同处理时期(CK、3 h、24 h、96 h)的叶片为样品,通过qRT-PCR技术,结合候选内参基因,验证过氧化氢酶基因QdCAT2在槲树不同器官及盐胁迫下的表达模式以及候选内参基因的表达稳定性。[结果]10个候选内参基因中,EIF5A和UBE2W的表达稳定性最高,综合排名位居前列,EIF2B5为最不稳定内参基因。QdCAT2基因在槲树叶片中表达量最高,且随着盐胁迫时间的延长,表达量呈先升高后降低的趋势,在处理3 h后达到高峰,使用EIF5A、UBE2W及EIF5A+UBE2W组合作为内参基因得到的相对表达结果基本一致,表明EIF5A和UBE2W为槲树各器官及盐胁迫最适合的内参基因。[结论]成功筛选出了2个稳定内参基因,并验证了EIF5A、UBE2W及EIF5A+UBE2W组合均适合作为槲树不同器官及盐胁迫下qRT-PCR的内参基因,为槲树不同器官及盐胁迫下基因表达分析提供了参考,并为后续槲树分子生物学研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 槲树 实时荧光定量PCR 内参基因筛选 盐胁迫 表达分析
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 250 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部