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TGEV SHXB株组织毒对1月龄仔猪的致病性研究
1
作者 肖丽 张宝太 +8 位作者 蔡旭航 李思远 朱雪蛟 郭荣利 查银河 舒建洪 主性 李基棕 李彬 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期56-61,共6页
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染哺乳仔猪可出现剧烈呕吐、水样腹泻、脱水和死亡,随着仔猪日龄增加,发病则较为温和,但TGEV对1月龄仔猪是否有致病性尚无人报道。本试验旨在评估TGEV SHXB株组织毒对1月龄仔猪的致病性。将5头5日龄仔猪分为... 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染哺乳仔猪可出现剧烈呕吐、水样腹泻、脱水和死亡,随着仔猪日龄增加,发病则较为温和,但TGEV对1月龄仔猪是否有致病性尚无人报道。本试验旨在评估TGEV SHXB株组织毒对1月龄仔猪的致病性。将5头5日龄仔猪分为两组,第一组口服TGEV SHXB病毒液,攻毒剂量为2 mL×10^(5.0)TCID_(50)/头,第2组仔猪口服2 mL的DMEM。病毒载量最高时剖杀,取其肠道研磨获取组织毒。将8头1月龄仔猪分为两组,第一组1月龄仔猪口服TGEV SHXB组织毒,攻毒剂量为10 mL×10^(6.50)copies/mL,第二组口服10 mL的DMEM。攻毒后每天采集肛拭子样品,荧光定量检测试验猪排毒情况,并记录观察仔猪腹泻情况,7 d后全部剖杀,观察肠道及其他脏器变化情况,取十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠做病理切片和免疫组化。结果显示TGEV SHXB对5日龄仔猪具有较高的致病性,且5日龄发病小猪的肠道内容物能感染1月龄仔猪,攻毒猪在3 DPC左右出现水样腹泻,检测到持续排毒,在4 DPC排毒量最高(约10^(8.0)copies/mL);剖检可见肠腔扩张、肠壁变薄充血和肠系膜充血等;攻毒猪组织病理学检查,可见小肠绒毛严重萎缩、脱落并伴有炎性细胞浸润。免疫组化结果显示,攻毒猪十二指肠、空肠和回肠绒毛上皮细胞胞中检测到TGEV阳性颗粒。本研究首次揭示了TGEV SHXB组织毒对1月龄仔猪具有较强的致病性,为TGEV的仔猪攻毒模型研究提供新的参考。 展开更多
关键词 tgev SHXB 组织毒 致病性 1月龄仔猪
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单宁酸功能化锰基纳米颗粒对TGEV抑制作用的研究
2
作者 沈瑶歆 葛豪杰 +4 位作者 王祎 田朔 李宇鹏 胡米 李彬 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第8期1106-1114,共9页
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是一种严重危害仔猪的冠状病毒,可引发剧烈腹泻、脱水及高死亡率,其通过粪-口途径快速传播,对全球养猪业造成了重大经济损失。本研究旨在系统评估单宁酸修饰锰金属有机框架纳米粒(TA@Mn-MOF)对TGEV感染的抑制作... 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是一种严重危害仔猪的冠状病毒,可引发剧烈腹泻、脱水及高死亡率,其通过粪-口途径快速传播,对全球养猪业造成了重大经济损失。本研究旨在系统评估单宁酸修饰锰金属有机框架纳米粒(TA@Mn-MOF)对TGEV感染的抑制作用,为开发新型抗冠状病毒纳米材料提供理论依据。通过金属离子Mn2+与有机配体的配位自组装过程构建Mn-MOF纳米载体,并通过静电相作用利用单宁酸(TA)对其进行表面修饰,以制备TA@Mn-MOF复合纳米颗粒。采用CCK-8法检测该纳米颗粒组分对猪睾丸细胞(ST)的毒性作用,通过间接免疫荧光试验、Western-blot技术分析TGEV N蛋白在感染细胞中的表达水平,结合qPCR技术测定病毒基因拷贝数变化,系统评价TA@Mn-MOF对TGEV感染的抑制作用。试验结果表明,在Mn2+和有机配体配比为1∶50内时,浓度为10~50μg/m L的纳米颗粒对ST细胞无明显毒性;当单宁酸浓度低于2 mg/m L时,纳米颗粒对细胞无明显毒性。间接免疫荧光试验与Western-blot分析显示,TA@Mn-MOF能够降低ST细胞中TGEV N蛋白水平。qPCR研究进一步表明,TA@Mn-MOF可以在体外影响病毒的复制和释放阶段从而抑制TGEV的感染。本研究证实,TA@Mn-MOF通过干扰病毒复制与释放过程有效抑制TGEV感染,为抗冠状病毒纳米制剂的研发提供了新的技术路径。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 金属有机框架 单宁酸 纳米颗粒
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PEDV和TGEV双重荧光重组酶介导等温扩增检测方法的建立及初步应用
3
作者 刘明妮 牟豪 +3 位作者 吕林丹 李绍梅 高婕琪 杨柳 《动物医学进展》 北大核心 2025年第11期24-30,共7页
根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的特异性保守序列分别设计引物和探针,建立了PEDV和TGEV双重荧光重组酶介导等温扩增(RAA)检测方法。该方法能在41℃恒温条件下20 min即可完成检测,与猪德尔塔冠状病毒(P... 根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的特异性保守序列分别设计引物和探针,建立了PEDV和TGEV双重荧光重组酶介导等温扩增(RAA)检测方法。该方法能在41℃恒温条件下20 min即可完成检测,与猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)不发生交叉反应;对PEDV和TGEV质粒标准品最低检测限分别为101拷贝/μL和103拷贝/μL。用RT-qPCR检测方法与建立的荧光RAA检测方法对50份临床样品进行检测,二者的阳性符合率为93.10%。结果表明,建立的PEDV和TGEV双重荧光RAA检测方法,有望为兽医临床检测提供一种高效诊断技术。 展开更多
关键词 荧光重组酶介导等温扩增 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒
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PEDV、TGEV、PoRV 3种猪病毒性腹泻病毒的流行现状及控制策略 被引量：27
4
作者 王艳丰 张丁华 +2 位作者 李爱心 程征 刘守铉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期518-527,共10页
引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征... 引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征,哺乳仔猪发病率和病死率较高,后备猪、母猪或育肥猪呈一过性腹泻,发病率较低。特别是自2010年以来,PEDV变异毒株的流行已对全球的生猪产业造成严重影响,而已有的防控措施已经不能应对新的流行态势。近年来,针对PEDV、TGEV、PoRV的毒株流行变化及防控措施研究的较多,许多新技术、新方法已应用于3种病原的控制。作者基于当前3种病毒的遗传变异分析和流行现状,从饲养管理、免疫预防、中药疗法、干扰疗法、特异疗法及返饲疗法等方面对防控措施进行综述,以期为猪病毒性腹泻的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪传染性胃肠炎病毒(tgev) 猪轮状病毒(PoRV) 流行现状 防控措施
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TGEV的sM、M和N基因克隆及特征分析 被引量：5
5
作者 程杰 柳纪省 +4 位作者 吴润 殷相平 李宝玉 兰喜 王辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期695-700,共6页
参照GenBank中收录的TGEVsM、M和N基因序列各设计1对特异引物,经RTPCR扩增获得了TS株的相应基因片段,分别约为346、932和1217bp,其大小与预计的目的片段相符。与其他毒株的相应基因相比较,并经剪接后,TS株的sM、M和N基因全长分别为248、... 参照GenBank中收录的TGEVsM、M和N基因序列各设计1对特异引物,经RTPCR扩增获得了TS株的相应基因片段,分别约为346、932和1217bp,其大小与预计的目的片段相符。与其他毒株的相应基因相比较,并经剪接后,TS株的sM、M和N基因全长分别为248、789和1149bp,各编码82个、262个和382个氨基酸;TS株与Purdue株、TFI株和961933株的sM基因核苷酸序列同源性分别为95.2%、92.7%和90.2%;推导氨基酸的同源性分别为95.9%、97.2%、98.8%;与Purdue株、TFI株、TGEVH株和961933株的M基因核苷酸序列同源性分别为95.2%、98.0%、99.6%和95.0%;推导氨基酸的同源性分别为97.0%、97.3%、98.5%、93.5%;与Purdue株、TFI株、FS722/70株、Korea株、TO14株、TGEVH株和961933株的N基因核苷酸序列同源性分别为98.1%、97.7%、99.0%、98.3%、99.2%、99.0%和95.9%,推导氨基酸的同源性分别为97.9%、98.4%、99.0%、97.7%、99.5%、96.2%、96.6%。并对TS株基因间的保守序列和sM、M和N基因及其编码的相应氨基酸的结构特征进行了分析,发现sM和N基因在TGEV中保守;并提示在我国不仅存在有2个不同亚基因型的TGEV,而且我国的TGEV可能是输入性的。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 tgev TS株 sM基因 M基因 N基因 克隆
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黄连提取物对TGEV的体外抑制效果 被引量：7
6
作者 朱买勋 唐红梅 +2 位作者 陈春林 闫志强 曹政 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期801-807,共7页
旨在明确黄连提取物(CRE)体外抑制TGEV作用效果。CRE通过药物和病毒作用后再添加、先感染病毒再加药物、先添加药物再感染病毒3种方式作用于PK-15细胞,分别标记为试验1、2、3组,作用结束后采用MTT检测细胞活率,RT-PCR检测TGEV N基因和... 旨在明确黄连提取物(CRE)体外抑制TGEV作用效果。CRE通过药物和病毒作用后再添加、先感染病毒再加药物、先添加药物再感染病毒3种方式作用于PK-15细胞,分别标记为试验1、2、3组,作用结束后采用MTT检测细胞活率,RT-PCR检测TGEV N基因和抗病毒相关因子(IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IRF-3)的表达来评价CRE抑制TGEV作用效果。结果显示:1×10^-4 g/L的CRE通过3种方式处理的PK-15细胞其活率分别为54.12%、40.69%、87.67%,均极显著高于病毒组(P<0.01),且试验3组极显著高于试验1组和试验2组(P<0.01);TGEV N基因转录倍数分别降为病毒组的0.438、0.603、0.264倍,极显著低于病毒组(P<0.01);IFN-α、IFN-β、IRF-3转录量极显著高于空白组、病毒组和药物对照组(P<0.01),IFN-γ显著(P<0.05)或者极显著高于空白组和病毒组(P<0.01)。从而表明CRE通过3种方式可以有效保护宿主细胞,抑制TGEV增殖,激发抗病毒相关因子IFN-α、IFN-β、IFN-γ和IRF-3的表达来参与抗病毒作用,且先添加药物再感染病毒的作用方式效果最优。 展开更多
关键词 黄连提取物 tgev PK-15 抗病毒相关因子
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猪霍乱沙门菌SC500运载TGEVS与猪IL-15融合基因疫苗的稳定性及免疫安全性 被引量：4
7
作者 韩国全 郭万柱 +3 位作者 孙志勇 王印 王小玉 林华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期871-877,共7页
为研究猪霍乱沙门菌SC500作为TGEV S与IL-15融合基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15运载体的稳定性与免疫安全性,将外源表达质粒pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15及空载体质粒pCC-neo、pCI-neo转化SC500,采用体外增殖试验研究不同质粒在SC500中... 为研究猪霍乱沙门菌SC500作为TGEV S与IL-15融合基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15运载体的稳定性与免疫安全性,将外源表达质粒pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15及空载体质粒pCC-neo、pCI-neo转化SC500,采用体外增殖试验研究不同质粒在SC500中的稳定性,携带质粒的SC500对ST细胞的黏附率、侵袭力和增殖能力的影响;采用BALB/c小鼠口服免疫试验研究表达质粒在体内的稳定性及SC500对小鼠的安全性。结果显示:外源目的基因影响表达载体在运载体内的稳定性,就载体类型而言,对pCI-neo的影响大于对pCC-neo的影响;携带目的基因的外源质粒影响SC500对ST细胞的黏附率和侵袭率,pCC-neo影响大于pCI-neo;外源质粒影响SC500在小鼠体内的增殖能力,pCC-neo影响大于pCI-neo;SC500在体内的增殖中,其所运载的质粒具有一定的稳定性。结果表明,利用SC500运载基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15免疫小鼠具有相对的稳定性和免疫安全性。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门菌 tgev—S基因 猪白细胞介素15基因 稳定性 免疫安全性
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间接竞争性ELISA法快速诊断TGEV的研究 被引量：3
8
作者 李丹丹 朱振营 +3 位作者 徐义刚 刘志强 高慎阳 李一经 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1615-1623,共9页
利用基因工程技术制备的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因原核表达产物重组N蛋白作为抗原诊断试剂,抗重组N蛋白的单克隆抗体作为抗体诊断试剂建立了间接竞争性ELISA检测细胞培养物中的TGEV病原的方法,并确定了间接竞争性ELISA操作流程中... 利用基因工程技术制备的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因原核表达产物重组N蛋白作为抗原诊断试剂,抗重组N蛋白的单克隆抗体作为抗体诊断试剂建立了间接竞争性ELISA检测细胞培养物中的TGEV病原的方法,并确定了间接竞争性ELISA操作流程中的最佳反应条件。在间接竞争性ELISA中,最佳抗原包被量为0.25μg/孔;竞争抗原与单克隆抗体作用的最适时间为1h,反应温度为37℃;选择1h作为酶标抗体作用的最佳时间;底物液最佳作用时间为10min;选择样品的抑制率50%为其临界值;所用封闭液0.5%的聚乙烯醇PBS溶液在4℃冰箱中可密封保存6个月,封闭时间为120min;特异性试验表明与猪轮状病毒、猪流行性腹泻病毒等肠道腹泻性病毒均无交叉反应。本试验建立的间接竞争性ELISA诊断方法具有良好的敏感性和特异性,为TGEV的疫情监测、及时而准确的诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 tgev 单克隆抗体 间接竞争性ELISA
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猪TGEV HN-2012株ORF3a和ORF3b基因遗传变异分析及其真核表达研究 被引量：3
9
作者 曹贝贝 兰培英 +3 位作者 韩丽 刘玲玲 韦学雷 胡慧 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2016年第4期10-16,共7页
[目的] 研究猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）HN-2012株ORF3a和ORF3b基因的遗传变异情况。[方法] 根据GenBank公布的猪传染性胃肠炎病毒ORF3a和ORF3b基因序列,分别设计合成1对特异性引物,通过RTPCR从猪传染性胃肠炎病毒HN-2012株的cDNA中扩增... [目的] 研究猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）HN-2012株ORF3a和ORF3b基因的遗传变异情况。[方法] 根据GenBank公布的猪传染性胃肠炎病毒ORF3a和ORF3b基因序列,分别设计合成1对特异性引物,通过RTPCR从猪传染性胃肠炎病毒HN-2012株的cDNA中扩增ORF3a和ORF3b基因,经克隆测序后,将其基因序列与NCBI中不同来源的TGEV毒株的相应序列进行同源性分析,构建系统进化树并进行遗传变异分析,然后将ORF3a和ORF3b基因亚克隆至真核表达载体,构建pCAGGS-ORF3a-flag和pCAGGS-ORF3b-flag载体,转染293T细胞进行表达,利用flag标签抗体对2个基因的蛋白表达情况进行Western blot分析。[结果] TGEV HN-2012株的ORF3a基因与其他毒株间核苷酸的同源性为92.6%～100%,ORF3b基因与其他毒株间核苷酸的同源性为98.6%～99.7%。Western blot[结果]表明,ORF3a蛋白和ORF3b蛋白的分子质量约为8ku和28ku。[结论] TGEV HN-2012株的ORF3a基因与CH/JLY2/08、CH/HLJH/08株等亲缘关系较近,ORF3b基因与TS株、Miller M6株等亲缘关系较近,与我国其他毒株关系较远;成功实现了ORF3a和ORF3b蛋白在293T细胞中的表达。 展开更多
关键词 tgev河南分离株(HN-2012) ORF3a和ORF3b基因 293T细胞 真核表达
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猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)对猪小肠黏膜上皮细胞活性的影响 被引量：9
10
作者 仝钢 张彦明 +1 位作者 唐青海 王津津 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期40-44,共5页
观察猪传染性胃肠炎病毒对猪小肠黏膜上皮细胞Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,细胞增殖和凋亡的影响。将猪传染性胃肠炎病毒接种于体外培养猪小肠黏膜上皮细胞24、48和72 h后,检测细胞的ATP酶(Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性,... 观察猪传染性胃肠炎病毒对猪小肠黏膜上皮细胞Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,细胞增殖和凋亡的影响。将猪传染性胃肠炎病毒接种于体外培养猪小肠黏膜上皮细胞24、48和72 h后,检测细胞的ATP酶(Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪测定细胞周期,PI染色法检测细胞凋亡。与空白组相比较,试验组小肠黏膜上皮细胞的Na+-K+-ATP酶活性降低(P<0.05),Ca2+-Mg2+-ATP酶活性降低(P>0.05),细胞增殖能力降低,S期细胞比例降低,细胞凋亡明显。猪传染性胃肠炎病毒可以降低猪小肠黏膜上皮细胞的Na+-K+-ATP酶活性、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,减弱细胞的增殖能力并引起细胞凋亡。 展开更多
关键词 tgev 小肠黏膜上皮细胞 NA+-K+-ATP酶 Ca2+-Mg2+-ATP酶 细胞凋亡
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共表达TGEV AD蛋白和PEDV S蛋白CS区重组伪狂犬病病毒的构建及纯化 被引量：2
11
作者 赵丽 吕玉金 +3 位作者 徐通 许瑞勤 金钺 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期237-243,共7页
根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的CS中和表位区(499~789 aa)序列设计1对特异性引物,在其5′端分别引入BamHⅠ和HindⅢ,PCR扩增PEDV CS区。将扩增的CS片段插入至pBApo-EF1α_Pur_DNA真核表达载体的BamHⅠ和HindⅢ位点,然后扩增含CS区... 根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的CS中和表位区(499~789 aa)序列设计1对特异性引物,在其5′端分别引入BamHⅠ和HindⅢ,PCR扩增PEDV CS区。将扩增的CS片段插入至pBApo-EF1α_Pur_DNA真核表达载体的BamHⅠ和HindⅢ位点,然后扩增含CS区表达盒,将其插入至含猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)AD基因的PRV转移质粒pG-AD-EGFP中,构建转移质粒pG-AD-CS-EGFP。利用转染试剂ZLip2000将伪狂犬病病毒(PRV)三基因缺失毒株rPRV NY-gE-/gI-/TK-基因组与转移质粒pG-AD-CS-EGFP共转染ST细胞,获得携带有TGEV AD、PEDV CS区和绿色荧光蛋白标记基因的重组病毒rPRV-AD-CS-EGFP。扩增重组病毒rPRV-AD-CS的表达盒,测序后进行遗传稳定性评价,同时将重组病毒rPRV-AD-CS、亲本株Bartha-K61和PRV强毒株分别接种小鼠,进行安全性评价。将该重组病毒与CRISPR/Cas9-EGFP敲除质粒共转染ST细胞,经3轮病毒空斑纯化获得无绿色荧光标记的重组病毒rPRV-AD-CS。经Western blot和IFA证实rPRV-AD-CS在ST细胞中能表达CS外源蛋白,具有良好的遗传稳定性和安全性。结果表明,成功构建共表达TGEV AD蛋白和PEDV S蛋白CS区的重组病毒株rPRV-AD-CS,该重组病毒具有遗传稳定性和安全性,为开发安全、有效的预防TGEV、PEDV和PRV感染的三联苗奠定基础。 展开更多
关键词 PEDV CS中和表位区 tgev AD抗原表位区 PRV
原文传递
DNA四面体循环放大器检测TGEV方法的建立与初步应用
12
作者 马梦瑶 赵福杰 +8 位作者 武利恒 贾鑫浩 刘航 钱梦薇 张红垒 郑兰兰 马世杰 王松山 何曼曼 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1235-1242,共8页
猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)是一种猪肠道致病性冠状病毒,可引起猪的急性肠道疾病,2周龄以下哺乳仔猪死亡率达100%。本研究旨在建立一种基于催化发夹自组装(Catalytic hairpin assembly,CHA)技术的T... 猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)是一种猪肠道致病性冠状病毒,可引起猪的急性肠道疾病,2周龄以下哺乳仔猪死亡率达100%。本研究旨在建立一种基于催化发夹自组装(Catalytic hairpin assembly,CHA)技术的TGEV靶RNA荧光检测方法,实现对病毒核酸的快速检测。首先根据CHA反应原理,设计合成DNA四面体循环放大器(DNA tetrahedral cyclic amplifier,DTCA);利用琼脂糖凝胶电泳分析其放大检测TGEV的可行性;优化检测探针及反应条件,分析检测方法的灵敏度和特异性;利用荧光成像评价DNA四面体循环放大器在体内外对TGEV的检测。结果显示,成功合成DNA四面体循环放大器,建立了针对TGEV靶RNA的荧光CHA检测方法,具有优良的灵敏度与特异性。本研究所建立的方法通过检测反应过程中荧光强度的变化实现了对TGEV靶RNA的快速检测,为TGEV的快速检测提供了新的技术支撑。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 DNA四面体循环放大器 催化发夹自组装技术
原文传递
应用TGEV N蛋白McAb间接免疫荧光法检测TGEV的研究 被引量：4
13
作者 李丹丹 田志军 +2 位作者 姜骞 唐丽杰 李一经 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第1期14-15,共2页
关键词 tgev 间接免疫荧光法 猪传染性胃肠炎病毒 McAb 应用 快速诊断方法 N蛋白 检测 病毒分离 virus
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间接竞争ELISA检测TGEV方法的建立 被引量：3
14
作者 钟涛 唐丽杰 +3 位作者 李一经 师东方 王术德 高慧江 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第12期20-21,共2页
关键词 ELISA检测 猪传染性胃肠炎病毒 tgev 竞争 间接 冠状病毒科 virus 病毒粒子
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基于单链置换的环介导间接PCR鉴别PEDV、TGEV方法的建立及应用 被引量：2
15
作者 郑鸣 李华玮 +3 位作者 刘莹莹 王永芬 边传周 郭宏伟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第24期4790-4798,共9页
【目的】猪病毒性腹泻主要是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)所引起的一种急性肠道传染病,临床上以呕吐、腹泻、脱水、高发病率和死亡率为主要特征。PEDV与TGEV同属α冠状病毒,可以感染各年龄段猪只,尤其对仔猪的... 【目的】猪病毒性腹泻主要是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)所引起的一种急性肠道传染病,临床上以呕吐、腹泻、脱水、高发病率和死亡率为主要特征。PEDV与TGEV同属α冠状病毒,可以感染各年龄段猪只,尤其对仔猪的危害最为严重,可导致大量仔猪死亡,给养殖业造成严重经济损失。由于PEDV和TGEV感染在临床症状、病理变化和流行病学上极为相似,临床上很难区分,因此,建立一种高效、特异的临床鉴别诊断方法对于预防病毒性腹泻的爆发流行具有重要意义。本试验旨在建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)环介导间接PCR检测方法,用于猪病毒性腹泻的病原学鉴别诊断。【方法】根据Gen Bank数据库中PEDV和TGEV基因组序列信息,在对两种病毒基因序列同源性比较的基础上,分别选取PEDV和TGEV核蛋白(N)基因序列的一段高度保守区,设计两条序列相邻的特异性探针,标记于不同大小的TOC1基因片段两端,作为特异性标记的报告基因。此报告基因与待测靶标基因经杂交、环化后,采用1对引物反向PCR扩增报告基因,建立PEDV/TGEV鉴别诊断方法,扩增片段大小分别为404、252bp。【结果】该方法特异性好,可单独或同时检测PEDV和TGEV,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪A型轮状病毒(RAV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)等常见猪源性病毒无交叉扩增;检测灵敏度高,对PEDV和TGEV的最低极限浓度分别为1.6和8 pg·μL-1的核酸样品,两种病原的同时检测不影响检测灵敏度;采用环介导间接PCR、常规RT-PCR和Sybr Green实时PCR对157份临床样本进行比较检测,3种方法的PEDV检出率分别为33.76%、21.66%和36.31%,TGEV检出率分别为26.75%、13.38%和28.03%;kappa检验结果,环介导间接PCR、Sybr Green实时PCR两种方法对PEDV和TGEV检测结果的符合度均为96.18%(κ≥0.90)【结论】环介导间接PCR可以用于鉴别诊断PEDV/TGEV,是一种快速、准确、灵敏、特异的病原学诊断工具。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪传染性胃肠炎病毒(tgev) 环介导间接PCR 探针 报告基因
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TGEV S基因原核表达及表达蛋白间接ELISA方法的建立与初步应用 被引量：3
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作者 鲁娜 宋阳 +1 位作者 刘莹 胡桂学 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第1期39-43,共5页
为了建立检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),试验参照GenBank公布的TGEV TH-98株S基因序列,设计合成1对引物,RT-PCR扩增相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pET-32a中,以大肠杆菌BL21... 为了建立检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),试验参照GenBank公布的TGEV TH-98株S基因序列,设计合成1对引物,RT-PCR扩增相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pET-32a中,以大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞为表达菌株进行诱导表达。再以纯化重组蛋白作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等参数建立检测TGEV S蛋白抗体的间接ELISA方法。结果表明:试验成功克隆了TGEV S基因,扩增片段长度为4 003 bp;构建了重组表达质粒pET-S,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中获得高效表达,表达蛋白分子质量约为148 ku;经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blot分析显示,重组蛋白具有良好的抗原性;以纯化的S重组蛋白作为包被抗原,建立了TGEV S蛋白抗体检测间接ELISA方法;该ELISA方法的抗原最佳包被浓度为18.85μg/mL,最适血清稀释比例为1∶40。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒(tgev) S蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验(ELISA) 应用
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嗜酸乳杆菌胞外多糖对TGEV感染ST细胞分泌IFN-γ IL-6 IL-8的影响 被引量：1
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作者 王莹莹 刘文娜 +2 位作者 魏萍 王子敬 张萍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期45-48,共4页
为研究抗病毒嗜酸乳杆菌菌株的细胞机制,利用嗜酸乳杆菌胞外多糖(EPS)作用于猪睾丸细胞(ST),以MTT法检测其是否抑制猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染,并观察IFN-γ、IL-6、IL-8的mRNA表达水平。本试验分为4组,分别是正常细胞对照组(Control... 为研究抗病毒嗜酸乳杆菌菌株的细胞机制,利用嗜酸乳杆菌胞外多糖(EPS)作用于猪睾丸细胞(ST),以MTT法检测其是否抑制猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染,并观察IFN-γ、IL-6、IL-8的mRNA表达水平。本试验分为4组,分别是正常细胞对照组(Control组)、TGEV感染组(TGEV组)、EPS预处理感染TGEV组(EPS+TGEV)组和胞外多糖组(EPS组),在2、4、6、12、24 h时采集细胞样品,通过荧光定量PCR方法检测不同时间点各组细胞中IFN-γ、IL-6、IL-8mRNA的表达量。结果发现,EPS具有抑制TGEV感染ST细胞的效应;EPS组、TGEV组和EPS+TGEV组IFN-γ、IL-6、IL-8 mRNA表达量较Control组比都相对增加,三种细胞因子随着时间的延长,均呈现出先快速增加后减少回归到正常水平的趋势。EPS+TGEV组在感染2 h时IL-8 mRNA表达量达到最大值,4 h时IL-6、IFN-γmRNA表达量达到最大值,且均出现了叠加效应,相比正常细胞对照组差异极显著(P<0.001)。结果表明,EPS对TGEV感染ST细胞有一定的抑制作用,提高了抗TGEV感染初期IFN-γ、IL-6、IL-8 mRNA表达水平。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌胞外多糖 tgev ST细胞 细胞因子
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猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)研究进展 被引量：22
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作者 吴国平 尹燕博 吴时友 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第2期29-32,共4页
关键词 形态特征 理化特性 基因 免疫原性 病原性 猪 传染性胃肠炎病毒 tgev
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竞争性DOT-ELISA法检测TGEV的研究 被引量：1
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作者 李丹丹 唐丽杰 +1 位作者 姜骞 李一经 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第3期17-18,共2页
关键词 DOT-ELISA法 tgev 检测试剂 竞争性 猪传染性胃肠炎病毒 重组N蛋白 抗原制备 冠状病毒科
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表达TGEV S基因AD片段的重组乳酸杆菌的构建及免疫研究 被引量：2
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作者 黄海楠 黄海鸥 +4 位作者 杨金生 程荣华 刘云志 任锐 姚新华 《养殖与饲料》 2015年第11期9-13,共5页
为构建表达TGEV S基因AD片段的重组乳酸杆菌,根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白的抗原决定簇AD片段的基因序列,设计引物,PCR扩增该片段,测序正确后利用穿梭质粒整合进益生乳酸菌中表达。结果显示,经过酶切、PCR和PAGE电泳鉴定重组的r S... 为构建表达TGEV S基因AD片段的重组乳酸杆菌,根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白的抗原决定簇AD片段的基因序列,设计引物,PCR扩增该片段,测序正确后利用穿梭质粒整合进益生乳酸菌中表达。结果显示,经过酶切、PCR和PAGE电泳鉴定重组的r S-AD基因在乳酸菌中得到了表达。所以,获得了表达TGEV S基因AD片段的重组乳酸杆菌。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒(tgev) 抗原片段 乳酸菌
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