应用Tem-PCR技术同时检测3种致病菌的研究 被引量：1

1

作者 曲敏 莫春生 +3 位作者 刘佳 刘忠梅 徐义刚 李苏龙 《哈尔滨商业大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第1期33-37,共5页

应用靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)技术建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157三种致病菌的高通量简易检测方法.实验分别以沙门氏菌的inv A基因、单核细胞增生李斯特氏菌的hly... 应用靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)技术建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157三种致病菌的高通量简易检测方法.实验分别以沙门氏菌的inv A基因、单核细胞增生李斯特氏菌的hly基因、大肠埃希氏菌O157 rfb E基因为靶基因,设计3对特异性引物,并与通用引物连接组成Tem-PCR引物,通过反应条件优化,建立了TemPCR检测方法.结果表明,建立的Tem-PCR方法特异性强,其检测灵敏度分别为沙门氏菌1.1×103CFU/m L、单核细胞增生李斯特氏菌5.6×102CFU/m L、大肠埃希氏菌O157 2.3×103CFU/m L.方法不需要优化调整各引物对的浓度,易于使用,有效地解决了传统多重PCR方法扩增效率不均衡的问题. 展开更多

关键词 靶序列富集多重PCR方法 沙门氏菌 单核细胞增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌O157

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3种食源性致病菌Tem-PCR检测方法的建立 被引量：17

2

作者 刘忠梅 徐义刚 +3 位作者 曲敏 莫春生 刘新亮 李苏龙 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第4期186-190,共5页

应用靶序列富集多重聚合酶链式反应（t arget-enriched multiplex-polymerase chain reaction,Tem-PCR）技术建立金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌3种食源性致病菌的快速检测方法。分别以金黄色葡萄球菌fem A基因、沙门氏菌inv A基... 应用靶序列富集多重聚合酶链式反应（t arget-enriched multiplex-polymerase chain reaction,Tem-PCR）技术建立金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌3种食源性致病菌的快速检测方法。分别以金黄色葡萄球菌fem A基因、沙门氏菌inv A基因和志贺氏菌ipa H基因为靶基因,设计3对特异性引物,并与通用引物连接组成Tem-PCR引物,通过反应条件优化,建立了Tem-PCR检测方法。结果显示,建立的Tem-PCR方法特异性强,对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌的检测灵敏度分别为1.1×10^3、2×10^3 CFU/m L和1.2×10^3 CFU/m L。Tem-PCR检测方法有效地解决了传统多重PCR引物扩增效率不均衡的问题。 展开更多

关键词 靶序列富集多重PCR方法 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 志贺氏菌

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分子鉴别诊断(MDD)技术在呼吸道病原体检测中的应用 被引量：10

3

作者 韩卫宁 张正姬 +5 位作者 雅雪蓉 季伟 衡伟 夏瑜 许元根 史智扬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1146-1148,1151,共4页

目的:以靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)和液相芯片(xMAP)检测技术结合,建立常见呼吸道病原体的分子鉴别诊断(MDD)平台,对其可靠性进行评估,并用于临床样品的检测。方法:采集苏州大学附属儿童医院呼吸科住院病例呼吸道灌洗液样品22例和苏州... 目的:以靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)和液相芯片(xMAP)检测技术结合,建立常见呼吸道病原体的分子鉴别诊断(MDD)平台,对其可靠性进行评估,并用于临床样品的检测。方法:采集苏州大学附属儿童医院呼吸科住院病例呼吸道灌洗液样品22例和苏州大学附属第一医院呼吸内科门诊病例咽拭子样品20例,使用Tem-PCR技术对样品的核酸进行多重扩增,以液相芯片技术进行高通量的多重检测。结果:对已知样品的检测表明该平台具有高度的特异性和敏感性。对42例临床样品进行检测的结果显示,22例呼吸道灌洗液的阳性检出率为63.6%。呼吸道灌洗液阳性检出率高于门诊病例咽拭子样品的阳性检出率,RNA病原体(以病毒为主)的阳性率高于DNA病原体(以细菌为主)的阳性率。结论:建立了呼吸道病原体的MDD平台,具备了对呼吸道传染性疾病的高通量快速诊断能力。 展开更多

关键词 tem-pcr xMAP 分子鉴别诊断(MDD)

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一种新型同时检测6种猪病毒病简化靶序列富集多重PCR的建立和初步应用 被引量：1

4

作者 肖璐 邬旭龙 +8 位作者 王印 杨泽晓 姚学萍 任梅渗 张鹏飞 冷依伊 张博 刘亚东 蒙正群 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期695-701,共7页

为建立一种新型同时检测6种猪常见病的方法,针对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪细小病毒(PPV)的保守基因,设计6对特异引物,在引物的5′端加上一... 为建立一种新型同时检测6种猪常见病的方法,针对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪细小病毒(PPV)的保守基因,设计6对特异引物,在引物的5′端加上一段非同源性标签序列,再设计1对可识别标签序列的超级引物。通过优化反应条件,建立了6种猪常见病毒的简化靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)检测方法。灵敏度试验结果显示,该方法对PRV、JEV、CSFV、PCV2、PRRSV、PPV核酸的最低检测限度分别为4.36×103、2.21×103、2.69×103、3.18×103、2.63×104、3.12×104copies/L,而单重PCR检测的最低限度分别为1.3×101、2.59×102、8.03×101、3.29×101、2.65×101、2.45×102copies/L。该方法对54份临床样本的检测结果与国标单重PCR检测结果的一致性为94.9%。本试验建立的方法特异、灵敏、操作简便且成本低廉,对这6种猪病常见病原的同时检测有一定的参考意义。 展开更多

关键词 靶序列富集多重PCR(tem-pcr) 猪伪狂犬病病毒 猪乙型脑炎病毒 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪细小病毒

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靶序列富集多重PCR技术的发展及其应用 被引量：8

5

作者 邬旭龙 肖璐 +5 位作者 姜睿姣 王印 杨泽晓 姚学萍 张鹏飞 张博 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期172-176,共5页

靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem–PCR)作为一种新型的分子生物学高通量检测技术,通过靶序列富集、靶序列加标签以及超级引物扩增3个阶段实现对靶标序列的大量扩增。靶序列富集多重PCR具有独特的反应过程,克服了... 靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem–PCR)作为一种新型的分子生物学高通量检测技术,通过靶序列富集、靶序列加标签以及超级引物扩增3个阶段实现对靶标序列的大量扩增。靶序列富集多重PCR具有独特的反应过程,克服了常规多重PCR扩增条件不兼容、扩增具有偏爱性等缺点,实现了对同一反应体系多种病原的同步检测,为临床病原鉴别诊断、基因分型、耐药基因等领域的研究提供了新思路,具有较大的发展前景。笔者对Tem–PCR的研究背景、反应原理、技术应用及试剂盒开发等进行综述,旨在为Tem–PCR的研究和发展提供参考依据,为中国应对公共卫生危机提供新思路。 展开更多

关键词 靶序列富集多重PCR 高通量 生物技术 公共卫生

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革兰阴性杆菌TEM型β-内酰胺酶耐药基因研究 被引量：4

6

作者 廖经忠 刘文恩 +2 位作者 李虹玲 简子娟 邹明祥 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第13期1957-1961,1966,共6页

目的了解中南大学3所附属医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性杆菌TEM型耐药基因的检出及流行情况。方法收集254株多重耐药革兰阴性杆菌,采用双纸片协同法(DDS)进行ESBLs表型确证,多重PCR法扩增blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因,TEM特... 目的了解中南大学3所附属医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性杆菌TEM型耐药基因的检出及流行情况。方法收集254株多重耐药革兰阴性杆菌,采用双纸片协同法(DDS)进行ESBLs表型确证,多重PCR法扩增blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因,TEM特异性引物对其整个开放阅读框进行扩增并对PCR产物测序,通过BLAST分析确定基因型;并对携带有TEM基因的革兰阴性菌株用随机扩增多态DNA(RAPD)方法进行菌株的同源性分析。结果经多重PCR扩增,105株肠杆菌获得阳性结果,其中85株菌携带TEM基因,26株菌携带SHV基因,10株菌携带OXA-1基因;6株非发酵菌获得阳性结果,均携带TEM基因,且全部为TEM-1型广谱β-内酰胺酶。携带blaTEM耐药基因的菌株所含RAPD类型:大肠埃希菌12种,肺炎克雷伯菌6种,阴沟肠杆菌7种。结论 TEM-1型β-内酰胺酶是湖南地区主要流行的TEM型酶;大肠埃希菌产TEM酶情况尤为突出;在同一医院以及同一病区存在TEM-1型β-内酰胺酶的克隆传播。 展开更多

关键词 革兰阴性杆菌 ESBLS TEM PCR RAPD

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日本柑橘黄龙病病原体电镜观察及PCR检测 被引量：7

7

作者 王运生 戴良英 荒井啓 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期446-449,共4页

对日本柑橘黄龙病病原体的形态结构进行了电镜观察,结果发现柑橘黄龙病病菌日本株系绝大多数是球形和短椭圆形,极少观察到棒状形态,直径为100～500 nm,外被一层胶状物质包围,厚约10～50 nm,这与其他地区发现的柑橘黄龙病病原体形态不同.... 对日本柑橘黄龙病病原体的形态结构进行了电镜观察,结果发现柑橘黄龙病病菌日本株系绝大多数是球形和短椭圆形,极少观察到棒状形态,直径为100～500 nm,外被一层胶状物质包围,厚约10～50 nm,这与其他地区发现的柑橘黄龙病病原体形态不同.PCR检测表明,以硅藻土法提取的DNA为模板,利用Ready-To-GoTM PCR bead法可以得到理想结果. 展开更多

关键词 柑橘黄龙病 韧皮部杆菌 透射电镜 PCR检测

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4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法的建立 被引量：6

8

作者 王洁 李利平 +1 位作者 王卫萍 李晓军 《东南国防医药》 2013年第6期551-555,共5页

目的建立一种基于液相芯片系统的4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法,为有效防控其发生和流行提供有力手段。方法针对A型流感病毒(influenza A virus,FluA)、B型流感病毒(influenza B virus,FluB)、呼吸道合胞病毒A型(respiratory syncy... 目的建立一种基于液相芯片系统的4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法,为有效防控其发生和流行提供有力手段。方法针对A型流感病毒(influenza A virus,FluA)、B型流感病毒(influenza B virus,FluB)、呼吸道合胞病毒A型(respiratory syncytial viruse types A,RSVA)和B型(respiratory syncytial viruse types B,RSVB)的保守区序列分别设计并合成了特异性引物、探针和通用引物,构建4种病原体阳性参比品,通过对扩增和杂交条件的优化,建立了靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)和Luminex液相芯片(xMAP)技术相结合的检测系统,并对该检测系统进行了方法学评价。结果该检测方法可以特异性区分4种病毒的RNA靶标分子,检测下限均为10拷贝/μl。结论该种基于液相芯片系统的新方法灵敏度高、特异性好,为实现在临床呼吸道样品中同时快速检测4种常见呼吸道病毒提供了技术基础。 展开更多

关键词 呼吸道病毒 液相芯片技术 靶序列富集多重-聚合酶链反应

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大黄素对鼻咽癌CNE-1细胞放射增敏作用与细胞自噬关系的研究 被引量：5

9

作者 陈冬莲 侯华新 +2 位作者 郑华 梁燕 黎丹戎 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1535-1538,共4页

目的研究大黄素在放射增敏过程中对鼻咽癌CNE-1细胞是否产生自噬现象,并探讨其放射增敏作用与自噬相关基因mRNA表达的关系。方法鼻咽癌细胞分为空白组、大黄素组、照射组和大黄素联合射线增敏组,采用透射电镜观察各组细胞内自噬小体的... 目的研究大黄素在放射增敏过程中对鼻咽癌CNE-1细胞是否产生自噬现象,并探讨其放射增敏作用与自噬相关基因mRNA表达的关系。方法鼻咽癌细胞分为空白组、大黄素组、照射组和大黄素联合射线增敏组,采用透射电镜观察各组细胞内自噬小体的形成及超微结构的改变,并运用荧光定量PCR方法检测基因ULK1、GABARAPL1、Beclin1、Bcl-2的mRNA表达水平。结果除空白组外其余各实验组均可观察到自噬小体的形成。与空白组比较,各组ULK1mRNA表达均升高(P<0.05),其中大黄素增敏组表达最高(P<0.01);而Beclin1和Bcl-2 mRNA表达下调;GABARA-PL1除大黄素增敏组升高外(P<0.05),其它各组变化不明显。结论大黄素在鼻咽癌细胞放射增敏过程伴随着自噬产生,自噬性死亡可能是大黄素放射增敏的途径之一。 展开更多

关键词 鼻咽癌 大黄素 放射增敏 自噬 透射电镜 定量PCR

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猪繁殖与呼吸综合征商品活疫苗中盖他病毒的分离与鉴定 被引量：4

10

作者 周峰 王傲杰 +8 位作者 常洪涛 王新港 崔丹丹 陈陆 杜季梅 刘红英 杨霞 王新卫 王川庆 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期486-496,共11页

在疫苗生产过程中,外源病毒造成疫苗污染的现象屡有发生。本文在对某猪场的猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)减毒活疫苗进行外源病毒检测时,发现盖他病毒(Getah virus,GETV)为阳性。经病毒分... 在疫苗生产过程中,外源病毒造成疫苗污染的现象屡有发生。本文在对某猪场的猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)减毒活疫苗进行外源病毒检测时,发现盖他病毒(Getah virus,GETV)为阳性。经病毒分离、纯化及鉴定,获得一株GETV分离物,将其命名为GETV-V1。GETV-V1与GenBank中GETV全基因序列相似性为97.3%～99.2%。遗传进化分析显示,GETV-V1与日本毒株14-I-605-C1、12IH26及中国毒株HB0234等处于同一进化分支,与本室分离的猪源GETV毒株HNJZ-S1的全基因序列(KY363862)相似性为99.1%,两者E2基因推导氨基酸序列相似性为99.8%。对同一厂家4批次市售同种疫苗和相应批次留样疫苗RT-PCR检测均为GETV阳性,第三方实验室和疫苗生产厂家分别独立进行的RT-PCR检测得出同样结果。测序结果表明,所有被测样品中E2基因与GETV已知相应序列的相似性均在98%以上。本研究首次报道了我国PRRS减毒活疫苗中GETV的污染,不仅表明猪用活疫苗外源病毒监测标准有待改进,而且提示要重视该病毒污染在疫苗生产、保存和使用过程中潜在的公共卫生风险。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗 盖他病毒(GETV)污染 分离鉴定 RT-PCR 透射电镜(TEM) 间接免疫荧光试验(IFA) 序列分析 公共卫生安全

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屠宰猪肝脏中乙型肝炎病毒的PCR检测与电镜观察 被引量：1

11

作者 刘利强 杜娟 +1 位作者 佘锐萍 李文贵 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第11期12-14,共3页

为探讨屠宰猪体内乙型肝炎病毒(HBV)流行情况,从北京某屠宰场采集肝脏样品,应用1对乙型肝炎病毒(HBV)S基因保守区的引物,采用PCR方法从屠宰猪肝脏中检测到HBV,序列分析表明,扩增片段与人HBV S基因的同源性高达99.05%;利用透射电镜观察... 为探讨屠宰猪体内乙型肝炎病毒(HBV)流行情况,从北京某屠宰场采集肝脏样品,应用1对乙型肝炎病毒(HBV)S基因保守区的引物,采用PCR方法从屠宰猪肝脏中检测到HBV,序列分析表明,扩增片段与人HBV S基因的同源性高达99.05%;利用透射电镜观察到了样品中的病毒样离子。 展开更多

关键词 屠宰猪肝脏 乙型肝炎病毒 PCR 电镜观察

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套式聚合酶链反应直接测序法分析产超广谱β-内酰胺酶菌TEM全基因 被引量：1

12

作者 丁云芳 糜祖煌 +1 位作者 张建华 秦玲 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 2004年第1期37-39,共3页

目的　建立套式聚合酶链反应直接测序方法分析产超广谱 β 内酰胺酶菌TEM全基因 ,以便TEM分型和发现新的亚型。方法　根据Genbank核酸数据库已登录的TEM各亚型序列 ,在保守区自行设计 4条引物 ,分A、B两段半套式重叠扩增TEM全基因 ;并对... 目的　建立套式聚合酶链反应直接测序方法分析产超广谱 β 内酰胺酶菌TEM全基因 ,以便TEM分型和发现新的亚型。方法　根据Genbank核酸数据库已登录的TEM各亚型序列 ,在保守区自行设计 4条引物 ,分A、B两段半套式重叠扩增TEM全基因 ;并对A段作正向测序 ,B段作反向测序。结果　大肠埃希菌TEM 1、TEM 2、TEM2 6等 3种典型菌株均成功扩出A、B两段 ,产物直接测序波峰锐利 ,信噪比值高。该三株菌测得的序列与已在Genbank登录的序列一致。 展开更多

关键词 套式聚合酶链反应 TEM DNA测序 产超广谱Β-内酰胺酶菌

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多重降落PCR检测血流感染产ESBLs肠杆菌科细菌与MRSA方法的建立和应用 被引量：4

13

作者 毕艳妮 隋振耿 +4 位作者 宋宇 曲业敏 马淑青 孙梅 刘海珠 《中国感染控制杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期663-667,共5页

目的探索一种可同时检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的肠杆菌科细菌与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重降落PCR方法。方法收集某院20l3年3月—2014年9月102份住院患者血培养阳性标本,针对产ESBLs肠杆菌科细菌的SHV、TEM、OXA基因和... 目的探索一种可同时检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的肠杆菌科细菌与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重降落PCR方法。方法收集某院20l3年3月—2014年9月102份住院患者血培养阳性标本,针对产ESBLs肠杆菌科细菌的SHV、TEM、OXA基因和MRSA的MecA基因设计4对特异性引物,分别采用单一降落PCR和多重降落PCR对各耐药基因进行扩增,并将结果与药敏纸片法进行比较。结果各单一PCR均可扩增出特异性条带,并用多重降落PCR同时检测了4种耐药基因;建立的多重降落PCR对4种耐药基因(MecA、SHV、TEM、OXA)DNA的检测下限分别为4.37、2.19、4.53和3.59 ng。与药敏纸片法相比,多重降落PCR总灵敏度与特异性分别为100.00%、88.24%,检测ESBLs的灵敏度达100.00%,特异性为87.23%,检测MRSA的灵敏度和特异度均为100.00%。结论该实验建立的多重降落PCR具有高灵敏度与特异性,可用于产ESBLs肠杆菌科细菌和MRSA所致血流感染的快速诊断与流行病学调查,有利于指导临床使用抗菌药物。 展开更多

关键词 超广谱β-内酰胺酶 ESBLS 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MRSA SHV TEM OXA MECA 多重降落PCR

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草莓镶脉病毒粒子提取及电镜观察 被引量：4

14

作者 肖文斐 裘劼人 +8 位作者 柳爱春 余红 来文国 童建新 张恒木 阮松林 马华升 忻雅 方献平 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第18期4313-4316,共4页

从受感染的草莓（Fragaria sp）植株中提取了草莓镶脉病毒（Strawberry vein banding virus,SVBV）粒子并对其进行了电镜观察.用CTAB法从草莓叶片中提取总核酸,设计SVBV外壳蛋白基因特异性引物,利用PCR方法对杭州地区的草莓镶脉病毒感... 从受感染的草莓（Fragaria sp）植株中提取了草莓镶脉病毒（Strawberry vein banding virus,SVBV）粒子并对其进行了电镜观察.用CTAB法从草莓叶片中提取总核酸,设计SVBV外壳蛋白基因特异性引物,利用PCR方法对杭州地区的草莓镶脉病毒感染情况进行检测.检测结果表明,在杭州地区大田种植的草莓中存在SVBV感染现象.从4株受感染草莓植株中分离克隆了SVBV的CP基因片段并测序;序列比较分析发现它们与已报道的美国SVBV分离物的CP基因（序列号NC_001725）核苷酸同源性为91％.利用差速离心法从上述草莓植株的叶片中提纯SVBV病毒,在透射电镜下观察到SVBV病毒粒子呈球形,直径约为40-55 nm. 展开更多

关键词 草莓镶脉病毒(SVBV) PCR检测 病毒提取 电镜观察

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肠炎沙门氏菌SEF14菌毛体外表达条件研究

15

作者 朱春红 段晓丽 +5 位作者 厚华艳 龚建森 张江英 姚丰华 孟霞 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期976-979,共4页

为筛选肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)SEF14菌毛体外表达的最适培养条件,本研究对4种不同培养条件下S.enteritidis SEF14菌毛的体外表达情况进行了比较研究,并通过RT-PCR、透射电镜与免疫电镜观察和SDS-PAGE等方法进行验证。研究表明,其中... 为筛选肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)SEF14菌毛体外表达的最适培养条件,本研究对4种不同培养条件下S.enteritidis SEF14菌毛的体外表达情况进行了比较研究,并通过RT-PCR、透射电镜与免疫电镜观察和SDS-PAGE等方法进行验证。研究表明,其中以TSB肉汤25℃震荡培养24 h后转接20℃继续震荡培养24 h,最后转接粘附因子抗原培养基(CFA)(pH6.0)于37℃静置培养50 h^60 h的SEF14菌毛表达量最高。RT-PCR结果显示在该培养条件下SEF14菌毛主要亚单位蛋白编码基因sefA mRNA表达水平最高,在透射电镜和免疫电镜下均可观察到丰富的SEF14菌毛。SDS-PAGE结果显示,所抽提的菌毛蛋白大小为14.3 ku,与相关报道一致,而且等量菌泥的抽提量最大。 展开更多

关键词 肠炎沙门氏菌 SEF14菌毛 表达条件 RT-PCR 电镜观察 匀浆抽提

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实时荧光聚合酶链反应检测呼吸道感染鲍曼不动杆菌TEM-1基因

16

作者 张红河 董晓勤 +2 位作者 范建中 周田美 王贤军 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期466-467,共2页

目的建立一种快速、准确、特异、定时检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因的方法。方法选择TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因作为靶序列,设计合成引物和探针;收集呼吸道感染患者痰标本培养的鲍曼不动杆菌279株,并对其进行检测分析。... 目的建立一种快速、准确、特异、定时检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因的方法。方法选择TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因作为靶序列,设计合成引物和探针;收集呼吸道感染患者痰标本培养的鲍曼不动杆菌279株,并对其进行检测分析。结果采用荧光聚合酶链反应检测鳗曼不动杆菌TEM-1耐药基因灵敏度为102拷贝,279株鲍曼不动杆菌中检出47株携带TEM-1基因,检出率为16.8%。结论应用Taqman探针荧光聚合酶链反应能够快速、准确检测鲍曼不动杆菌TEM-1型β-内酰胺酶耐药基因。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 鲍曼不动杆菌 TEM-1基因

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产ESBLs菌株的TEM型基因检测及其标本分布

17

作者 郭小兵 王鹏 《河南职工医学院学报》 2007年第3期266-268,共3页

目的了解我院ESBLs菌株中TEM型基因携带状况及其标本分布。方法采用PCR技术300例ESBLs菌株进行扩增,以双纸片协同法检测阴性菌株为对照。结果300株ESBLs菌株中TEM型基因阳性228株(76%),其中痰液、血液、尿液、分泌物及胆汁分离率为33.3%... 目的了解我院ESBLs菌株中TEM型基因携带状况及其标本分布。方法采用PCR技术300例ESBLs菌株进行扩增,以双纸片协同法检测阴性菌株为对照。结果300株ESBLs菌株中TEM型基因阳性228株(76%),其中痰液、血液、尿液、分泌物及胆汁分离率为33.3%、17.5%、37.7%、8.3%及3.2%。结论TEM型ES-BLs是ESBLs菌株中主要型别,各种标本中都有较高的分离率。 展开更多

关键词 超广谱Β-内酰胺酶 TEM 联合酶链式反应

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TEM型超广谱β-内酰胺酶的载体构建及其表达

18

作者 苟建军 《医药论坛杂志》 2009年第15期1-3,共3页

目的构建TEM型ESBLs表达载体。方法收集2006-2007年郑州大学第一附属医院分离产ESBLs大肠杆菌46株,通过PCR克隆目的基因后,采用T4连接pET28 a与目的基因,并通过双脱氧链终止法验证基因,最后采用酶抑制剂增强试验检测载体表达。结果PCR... 目的构建TEM型ESBLs表达载体。方法收集2006-2007年郑州大学第一附属医院分离产ESBLs大肠杆菌46株,通过PCR克隆目的基因后,采用T4连接pET28 a与目的基因,并通过双脱氧链终止法验证基因,最后采用酶抑制剂增强试验检测载体表达。结果PCR扩增条带约在900bp位置处;序列分析结果正确;酶抑制剂增强试验阳性。结论TEM型ESBLs表达载体构建成功。 展开更多

关键词 TEM 超广谱Β-内酰胺酶 载体 聚合酶链式反应

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小立碗藓细胞重新编程过程中染色体重塑观察 被引量：1

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作者 蔺迎月 吴斯俊 王晓琴 《北京农学院学报》 2015年第2期1-4,共4页

小立碗藓(Physcomitrella patens)是研究植物发育的理想模式植物,也是目前发现的具有高频率同源重组特性的植物,其再生能力很强。此研究以生长7d的小立碗藓原丝体、培养0d的原生质体和再生2d的原生质体为材料,旨在了解小立碗藓细胞重新... 小立碗藓(Physcomitrella patens)是研究植物发育的理想模式植物,也是目前发现的具有高频率同源重组特性的植物,其再生能力很强。此研究以生长7d的小立碗藓原丝体、培养0d的原生质体和再生2d的原生质体为材料,旨在了解小立碗藓细胞重新编程过程中染色体结构的动态变化。透射电镜观察发现原丝体染色体结构浓缩程度高;而当原丝体脱去细胞壁成原生质体状态时,异染色质开始解凝,染色体结构变得较为松散;原生质体再生2d时其染色体松散程度次之。通过进一步荧光定量PCR分析染色体重塑相关基因SWI/SNF的表达水平,发现这些基因在原生质体中表达量最高。 展开更多

关键词 小立碗藓 重新编程 透射电镜 染色体结构 荧光定量PCR

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深圳地区产超广谱β-内酰胺酶菌株的TEM基因分析

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作者 卢月梅 陈升汶 +2 位作者 张阮章 王沙燕 何林 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期210-211,共2页

目的　了解本地区临床分离的产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)株携带TEM基因的情况。 方法　应用表型确证试验筛选产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。碱裂解法提取产酶株的质粒 ,应用PCR方法分析TEM基因。结果　 2 15株产ESBLs菌株中TEM基... 目的　了解本地区临床分离的产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)株携带TEM基因的情况。 方法　应用表型确证试验筛选产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。碱裂解法提取产酶株的质粒 ,应用PCR方法分析TEM基因。结果　 2 15株产ESBLs菌株中TEM基因阳性 87株 ,阳性率为 4 0 .5 % ,其中产酶大肠埃希菌TEM阳性率为4 9 7% ,肺炎克雷伯菌阳性率为 18.8%。TEM型产酶株主要来源于痰和尿标本 (37.9%和 2 2 .0 % ) ,在肝胆外科、重症监护室和老年病科分布较多。结论　TEM型为本地区产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌常见的基因型 ,广泛分布于各临床科室 ,需引起重视。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 大肠埃希菌 阳性率 ESBL 产超广谱Β-内酰胺酶菌株 产酶株 基因型 分布 PCR方法 基因分析

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