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巨魾线粒体ND3,tRNA-Arg和ND4L基因克隆及多态性分析 被引量：2
1
作者 杜民 叶德来 +5 位作者 牛宝珍 段加明 岳冉 宋桃稳 王文涛 刘艳红 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期32-37,共6页
为了解巨魾鱼的种质资源情况,采用PCR技术扩增克隆并测序,得到巨魾NADH dehydrogenase subunit-3(ND3),精氨酸的转运RNA(tRNA-Arg)和NADH dehydrogenase subunit-4L(ND4L)基因全序列各12条.通过DNAMAN 5.2.2软件进行序列比对,采用MEGA 5... 为了解巨魾鱼的种质资源情况,采用PCR技术扩增克隆并测序,得到巨魾NADH dehydrogenase subunit-3(ND3),精氨酸的转运RNA(tRNA-Arg)和NADH dehydrogenase subunit-4L(ND4L)基因全序列各12条.通过DNAMAN 5.2.2软件进行序列比对,采用MEGA 5.02软件进行碱基质量分数分析,计算遗传距离,并构建系统发育树.结果表明:巨魾鱼ND3基因序列全长为346bp,碱基质量分数A为26.2%,T为29.6%,C为28.8%,G为15.4%,其中A+T质量分数(55.8%)高于G+C质量分数(44.2%),12个ND3基因序列存在5种单倍型,发生了5次转换,1次颠换,5种单倍型之间平均相对遗传距离为0.007;tRNA-Arg基因序列全长为71bp,碱基质量分数A为23.9%,T为23.9%,C为29.6%,G为22.6%,其中A+T质量分数(47.8%)低于G+C质量分数(52.2%),12个基因序列完全一致;ND4L基因序列全长为297bp,起始密码子为ATG,终止密码子为TAA,碱基质量分数A为24.6%,T为26.3%,C为33.3%,G为15.8%,其中A+T质量分数(50.9%)高于G+C质量分数(49.1%),12个基因序列完全一致;将巨魾鱼与鮡科的其他10种鱼类的ND3,tRNA-Arg和ND4 L基因用Minimum Evolution法(ME)构建系统发育树,发现12尾巨魾鱼单独聚为一支,这一结果与传统的形态学分类相似. 展开更多
关键词 巨魾 ND3 trna-arg ND4L 序列分析 系统发育
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基于mature-tRNA-Asp-GTC/ATF3-LPCAT3介导的铁死亡途径探讨绞股蓝皂苷L抗卵巢癌的分子机制 被引量：1
2
作者 朱敬轩 赵佼 +4 位作者 王群 孙小扉 王嘉鑫 张宏达 宋囡 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第11期107-117,共11页
目的:探讨mature-t RNA-Asp-GTC与pre-t RNA-Arg-TCT在卵巢癌(OC)细胞铁死亡表型中作用及绞股蓝皂苷L(Gyp-L)对OC细胞mature-t RNA-Asp-GTC与pre-t RNA-Arg-TCT的调控机制。方法:采用细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测人卵巢腺癌细胞(OVC... 目的:探讨mature-t RNA-Asp-GTC与pre-t RNA-Arg-TCT在卵巢癌(OC)细胞铁死亡表型中作用及绞股蓝皂苷L(Gyp-L)对OC细胞mature-t RNA-Asp-GTC与pre-t RNA-Arg-TCT的调控机制。方法:采用细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测人卵巢腺癌细胞(OVCAR3)增殖情况,计算顺铂(5、10、15、20、25、30μmol·L^(-1))、Gyp-L(25、50、75、100、125μmol·L^(-1))及在Gyp-L作用下顺铂的半数抑制浓度(IC50)以确定后续实验的干预浓度。细胞克隆实验与划痕实验反映OVCAR3细胞的增殖与迁移能力。PANDORA-seq小RNA测序检测Gyp-L干预后细胞差异表达的转运RNA衍生的小RNA(ts RNA),通过RNAhybrid软件查找ts RNA相应的靶基因。比色法或酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、脂质过氧化物(LPO)水平;Ferro Orange荧光探针检测Fe2+含量;DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)含量来共同反映OVCAR3细胞铁死亡的发生。将OVCAR3细胞分为空白组、50μmol·L^(-1)Gyp-L组、100μmol·L^(-1)Gyp-L组。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-timePCR)检测mature-t RNA-Asp-GTC、mature-t RNA-Leu-CAA、mature-mt_t RNA-Tyr-GTA_5_end、mature-t RNAVal-CAC、mature-mt_t RNA-Glu-TTC、pre-t RNA-Arg-TCT、mature-t RNA-Asn-GTT、羟甲基双烷合酶(HMBS)、Wnt、β-连环蛋白(β-catenin)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Kelch样ECH关联蛋白1(KEAP1)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、活化转录因子3(ATF3)、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白(x CT)、溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶(LPCAT3)、花生四烯酸15-脂氧合酶(ALOX15)基因表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HMBS、Wnt、β-catenin、GPX4、KEAP1、Nrf2、ATF3、x CT、LPCAT3、ALOX15蛋白表达。结果:50μmol·L^(-1)Gyp-L组、100μmol·L^(-1)Gyp-L组、顺铂组、50μmol·L^(-1)Gyp-L+顺铂组及100μmol·L^(-1)Gyp-L+顺铂组显著抑制OVCAR3细胞增殖与迁移(P<0.05)并加剧细胞铁死亡,发生体现为ROS、MDA、LPO、Fe2+含量增多及GSH含量明显降低(P<0.05)。与空白组比较,Gyp-L有效干扰OVCAR3细胞25种ts RNA的表达(P<0.05,|log2Fc|>1);Gyp-L干预后,pre-t RNA-Arg-TCT/HMBS/Wnt/β-catenin/GPX4、pre-t RNA-Arg-TCT/KEAP1/Nrf2/x CT、mature-t RNA-Asp-GTC/ATF3/KEAP1/Nrf2/x CT、mature-t RNA-Asp-GTC/LPCAT3/ALOX15轴表达均发生明显异常(P<0.05)。结论:pre-t RNA-Arg-TCT/HMBS/Wnt/β-catenin/GPX4、pre-t RNA-Arg-TCT/KEAP1/Nrf2/x CT、mature-t RNA-Asp-GTC/ATF3/KEAP1/Nrf2/x CT、maturet RNA-Asp-GTC/LPCAT3/ALOX15信号通路参与OC发生发展。Gyp-L主要通过mature-t RNA-Asp-GTC/ATF3/KEAP1/Nrf2/x CT、mature-t RNA-Asp-GTC/LPCAT3/ALOX15信号轴激活OVCAR3细胞铁死亡发生,从而抑制OC发生发展。 展开更多
关键词 卵巢癌 绞股蓝皂苷L mature-tRNA-Asp-GTC pre-trna-arg-TCT 铁死亡
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dna Y基因产物提高人尿激酶原cDNA在大肠杆菌中的表达
3
作者 马忠 邱奇峰 +1 位作者 华子春 朱德煦 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1997年第1期55-61,共7页
对提高人尿激酶原ｃＤＮＡ在大肠杆菌中的表达水平进行了研究。通过ＰＣＲ方法在其结构基因５端添加起密码子ＡＴＧ，用人工合成的不依赖于ρ因子的终止序列替换３端非翻译区，得到完整的人尿激酶原结构基因。将其克隆在表达质粒ｐ... 对提高人尿激酶原ｃＤＮＡ在大肠杆菌中的表达水平进行了研究。通过ＰＣＲ方法在其结构基因５端添加起密码子ＡＴＧ，用人工合成的不依赖于ρ因子的终止序列替换３端非翻译区，得到完整的人尿激酶原结构基因。将其克隆在表达质粒ｐＫＫ２３３－２中，转化大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＪＡ２２１，人尿激酶原得到初步表达。但表达水平很低，原因可能是人尿激酶原ｃＤＮＡ富含真核细胞偏爱的密码子，而大肠杆菌中识别这些密码子的ｔＲＮＡ是稀有ｔＲＮＡ。通过相容性质粒ｐＵＢＳ５２０引进ｄｎａＹ基因，增加大肠杆菌中ｔＲＮＡＡｒｇＡＧＡ／ＡＧＧ的含量，以改善大肠杆菌对人尿激酶原ｃＤＮＡ中稀有Ａｒｇ密码子的识别，人尿激酶原的表达水平提高约５倍。 展开更多
关键词 尿激酶原 CDNA dnaY基因 血栓性疾病 药物疗法
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