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含Syntaxin 1A基因的SFV表达载体的构建与表达
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作者 徐平勇 李卉 许想平 《华中科技大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第3期108-111,共4页
用绿色荧光蛋白 (EGFP)标记了Syntaxin 1A(Syn1A)蛋白 ,构建了含有EGFP Syn1A融合蛋白的森林脑炎病毒表达载体 pSFV1 EGFP Syn1A ,测序结果表明表达载体构建正确 .用荧光显微成像技术研究了Syn1A在原代大鼠胰腺 β细胞中的定位 ,结果表... 用绿色荧光蛋白 (EGFP)标记了Syntaxin 1A(Syn1A)蛋白 ,构建了含有EGFP Syn1A融合蛋白的森林脑炎病毒表达载体 pSFV1 EGFP Syn1A ,测序结果表明表达载体构建正确 .用荧光显微成像技术研究了Syn1A在原代大鼠胰腺 β细胞中的定位 ,结果表明Syn1A主要定位于细胞质膜上 . 展开更多
关键词 syntaxin 1a 构建 胰腺Β细胞 森林脑炎病毒表达载体
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Targeting Syntaxin 1A via RNA interference inhibits feeding and midgut development in Locusta migratoria
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作者 Xiaojian Liu Ya Gao +1 位作者 Yao Li Jianzhen Zhang 《Insect Science》 2025年第2期385-397,共13页
Syntaxin 1A(Syx1A)has diverse and indispensable functions in animals.Pre-vious studies have mainly focused on the roles of Syx1A in Drosophila,and so how Syx1A operates during the development of other insects remains ... Syntaxin 1A(Syx1A)has diverse and indispensable functions in animals.Pre-vious studies have mainly focused on the roles of Syx1A in Drosophila,and so how Syx1A operates during the development of other insects remains poorly understood.This study in-vestigated whether disrupting LmSyx1A using RNA interference(RNAi)affects the growth and development of Locusta migratoria.LmSyx1A was expressed in all tissues tested,with the highest expression observed in the fat body.After 5th-instar nymphs were injected with double-stranded LmSyx1A(dsLmSyx1A),none of the nymphs were able to molt normally and all eventually died.The silencing of LmSyx1A resulted in the cessation of feeding,body weight loss,and atrophy of the midgut and gastric cecum in locusts.Hematoxylin and eosin(H&E)staining showed that the columnar cells in the midgut were severely dam-aged,with microvilli defects visible in dsLmSyx1A-injected nymphs.Secretory vesicles were observed with transmission electron microscopy(TEM).In addition,reverse tran-scription quantitative polymerase chain reaction(RT-qPCR)further indicates that silenc-ing LmSyx1A repressed the expression of genes involved in the insulin/mammalian target of rapamycin(mTOR)-associated nutritional pathway.Taken together,these results sug-gest that LmSyx1A significantly affects the midgut cell layer of locust nymphs,which was partially associated with the downregulation of the insulin/mTOR-associated nutritional pathway.Thus,we argue that LmSyx1A is a suitable target for developing dsRNA-based biological pesticides for managing L.migratoria. 展开更多
关键词 insulin/mTOR pathway Locusta migratoria midgut development RNAi syntaxin 1a
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Syntaxin1A与Munc18a在细胞内的相互作用和定位研究(英文)
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作者 徐平勇 白丽 +1 位作者 田伟 徐涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期31-36,共6页
Syntaxin 1A (Syn1A) 和Munc18a蛋白在囊泡转运和分泌中起着至关重要的作用,然而它们在细胞中分选和转运的分子机制目前尚不清楚. 我们用绿色荧光蛋白(EGFP) 和红色荧光蛋白(TDimer2) 分别标记Syn1A和Munc18a,并用荧光显微技术观察它们... Syntaxin 1A (Syn1A) 和Munc18a蛋白在囊泡转运和分泌中起着至关重要的作用,然而它们在细胞中分选和转运的分子机制目前尚不清楚. 我们用绿色荧光蛋白(EGFP) 和红色荧光蛋白(TDimer2) 分别标记Syn1A和Munc18a,并用荧光显微技术观察它们在BHK-21和HEK293细胞中的转运和定位. 实验结果表明Syn1A主要定位在细胞质膜上,而Munc18a主要分布在胞浆中,但是与Syn1A共表达时能定位到细胞质膜上. 删除胞浆部分的Syn1A蛋白不能上膜,提示其胞浆结构域在分选和定位过程中起着重要的作用. 展开更多
关键词 syntaxin 1a Munc18a 转运 细胞内定位
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基于酵母产孢的syntaxin家族蛋白SNARE区域功能分析 被引量:3
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作者 王丽萍 邵侃凯 +1 位作者 高晓冬 中西秀树 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期530-535,共6页
真核细胞中大部分膜融合过程由SNARE蛋白介导,但其功能和调节机制尚未完全清楚。酵母孢子形成是研究囊泡融合机制包括SNARE蛋白的理想模型系统。在该过程中涉及t-SNARE蛋白Sso1,它是突触囊泡融合所需蛋白syntaxin 1A的同源物,两者SNARE... 真核细胞中大部分膜融合过程由SNARE蛋白介导,但其功能和调节机制尚未完全清楚。酵母孢子形成是研究囊泡融合机制包括SNARE蛋白的理想模型系统。在该过程中涉及t-SNARE蛋白Sso1,它是突触囊泡融合所需蛋白syntaxin 1A的同源物,两者SNARE区域有51%的同源性。尽管如此,将SSO1的SNARE区域完全替换成syntaxin 1A,而构建的嵌合体却无法回补sso1△突变的产孢缺陷。为了确定哪些残基为Sso1功能所必须,作者进行了嵌合体和突变分析,发现Sso1/syntaxin 1A嵌合体中syntaxin 1A的SNARE区域的220位丙氨酸换成谷氨酸后获得产孢功能。另外,Sso1发生相应的突变-218位谷氨酸突变成丙氨酸后失去其功能。因此,218位谷氨酸残基为Sso1产孢功能所必须。 展开更多
关键词 SNARE 人源化 酿酒酵母 Sso1p syntaxin1a
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SNAP-25、STX1A基因多态性与小儿注意缺陷多动障碍易感性的关系及交互作用分析 被引量:1
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作者 郑芳 国志 《现代医学》 2023年第1期24-31,共8页
目的:探究突触关联蛋白-25(SNAP-25)、突触融合蛋白-1A(STX1A)基因多态性与小儿注意缺陷多动障碍(ADHD)易感性的关系及交互作用。方法:将我院2020年6月到2022年4月门诊就诊的98例ADHD患儿纳入观察组,同期健康体检儿童65例作为对照组。... 目的:探究突触关联蛋白-25(SNAP-25)、突触融合蛋白-1A(STX1A)基因多态性与小儿注意缺陷多动障碍(ADHD)易感性的关系及交互作用。方法:将我院2020年6月到2022年4月门诊就诊的98例ADHD患儿纳入观察组,同期健康体检儿童65例作为对照组。采集研究对象外周静脉血3 ml,采用聚合酶链式反应(PCR)-限制性片段长度多态性法(RFLP)对SNAP-25基因位点(rs3746544)、STX1A基因位点(rs2228607、rs875342)进行分型,比较两组研究对象一般资料、ADHD筛查量表(SNAP-IV)评分、SNAP-25与STX1A基因型及等位基因分布,采用二元Logistic回归模型分析SNAP-25、STX1A基因多态性与ADHD易感性的关联性及交互作用。结果:观察组患儿SNAP-IV中的注意缺陷、多动/冲动评分及平均分均高于对照组(P<0.05);SNAP-2 rs3746544位点携带T/T基因型的儿童多动/冲动评分及平均分均高于G/G、G/T基因型儿童(P<0.05),STX1A rs2228607与rs875342位点携带A/A基因型的儿童注意缺陷评分及平均分均高于G/G、A/G基因型儿童(P<0.05);SNAP-25 rs3746544位点上携带T等位基因及STX1A rs2228607、rs875342位点上携带A等位基因可增加小儿ADHD患病风险(P<0.05);交互携带rs3746544位点GT/TT基因型、rs2228607与rs875342位点GA/AA基因型的小儿ADHD患病风险高于交互携带GG基因型者(P<0.05)。结论:SNAP-25 rs3746544位点与STX1A rs2228607、rs875342位点的突变基因均可增加小儿ADHD易感性,且两基因及不同位点间存在交互作用,共同参与ADHD的发生、发展过程。 展开更多
关键词 小儿注意缺陷多动障碍 突触关联蛋白-25 突触融合蛋白-1a 基因多态性 易感性 交互作用
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人SNARE复合物相关蛋白的表达与纯化
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作者 支旭勃 陈款民 +5 位作者 王昭维 李倩楠 孙雪嫄 张芷萌 杨影 李元 《生物技术》 CAS 2024年第4期407-411,438,共6页
[目的]构建人SNARE复合物中的SNAP25、Syntaxin 1a和VAMP1蛋白真核表达载体,并于体外进行表达纯化。[方法]将重组质粒转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组杆粒;用脂质体转化法,将重组杆粒转染至Sf9昆虫细胞中... [目的]构建人SNARE复合物中的SNAP25、Syntaxin 1a和VAMP1蛋白真核表达载体,并于体外进行表达纯化。[方法]将重组质粒转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组杆粒;用脂质体转化法,将重组杆粒转染至Sf9昆虫细胞中使其产生重组病毒,最后对病毒进行扩增后再感染Sf9昆虫细胞表达目的蛋白;所得蛋白进行Western Blot鉴定及纯化。[结果]测序结果表明SNAP25、Syntaxin 1a和VAMP1真核表达载体构建成功,Western Blot检测出三种蛋白的特异性条带,利用His标签蛋白纯化出Syntaxin 1a蛋白。[结论]利用杆状病毒表达系统成功表达出了SNARE复合物相关蛋白。 展开更多
关键词 SNARE复合物 SNAP25蛋白 syntaxin 1a蛋白 VAMP1蛋白 重组杆粒 杆状病毒 Sf9昆虫细胞 蛋白纯化
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利用人源化酵母系统模拟tomosyn在囊泡运输过程中的功能
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作者 邵侃凯 高晓冬 中西秀树 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2019年第5期659-670,共12页
突触囊泡融合是由syntaxin-1A, synaptobrevin-2和突触小体相关蛋白25(SNAP-25)三个突触N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(SNARE)蛋白共同介导完成的.这些突触SNARE蛋白之间的相互作用受到包括tomosyn在内的多种辅助蛋白的调控. to... 突触囊泡融合是由syntaxin-1A, synaptobrevin-2和突触小体相关蛋白25(SNAP-25)三个突触N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(SNARE)蛋白共同介导完成的.这些突触SNARE蛋白之间的相互作用受到包括tomosyn在内的多种辅助蛋白的调控. tomosyn是一个syntaxin结合蛋白,并且它是一个突触囊泡融合的负调控因子.然而, tomosyn的具体作用方式并不完全清楚.本研究在酵母细胞中重构了tomosyn的抑制作用模型. SNARE蛋白是一种保守的蛋白,在酵母中,突触SNARE蛋白的同源蛋白参与了分泌囊泡和细胞膜的融合. Sso1是酵母中syntaxin-1A的同源蛋白.在之前的实验中,我们构建了一个SNARE嵌合体,命名为Sso1/187k-STX1A^(D133V),其中将Sso1的一部分替换为syntaxin-1A的相应部分.这个SNARE嵌合体可以取代Sso1在酵母细胞中的功能.过表达tomosyn对野生型酵母细胞的生长没有影响.然而, tomosyn的过表达干扰了含有Sso1/187K-STX1A^(D133V)的细胞的生长.酵母双杂交试验结果表明,在酵母细胞中, tomosyn与syntaxin相互作用,而不是与Sso1相互作用.因此,我们可以使用含有Sso1/187K-STX1A^(D133V)的酵母细胞作为分析tomosyn功能的工具. 展开更多
关键词 酿酒酵母 TOMOSYN syntaxin-1a Sso1 SNARE
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