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禽白血病病毒A/J和B/K亚群双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 檀子卿 蒋艳妹 +5 位作者 张亚婷 张瑞函 李梦婷 熊树德 刘永相 范春艳 《中国家禽》 2026年第2期71-78,共8页
研究旨在建立一种同时检测禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)A、J亚群和B、K亚群的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。试验通过比对GenBank中ALV各亚群全基因组序列,设计针对A/J(LTR区)与B/K(env基因区)亚群的特异性引物和探针,构... 研究旨在建立一种同时检测禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)A、J亚群和B、K亚群的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。试验通过比对GenBank中ALV各亚群全基因组序列,设计针对A/J(LTR区)与B/K(env基因区)亚群的特异性引物和探针,构建重组质粒标准品建立双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,并与常规PCR比较临床样本的检测效果。结果显示:建立的方法对A/J和B/K亚群的检测限分别为10 copies/μL和10^(2) copies/μL,灵敏度分别比常规PCR提高10倍和100倍;标准曲线相关性良好(R^(2)≥0.998),扩增效率为93.6%与96.2%;该方法仅对A、B、J、K亚群ALV产生扩增信号,不与其他常见禽类病原发生交叉反应;批内和批间变异系数(CV)均低于1%,表明建立的方法重复性良好;该方法检测100份临床样本共检出A/J阳性样本20份、B/K阳性样本2份,阳性检出率高于常规PCR,且与ELSIA检测结果符合率达100%。综上所述,研究建立的方法具有高灵敏度、高特异性和良好的稳定性,适用于临床样本的快速、精准检测,可为ALV的种群净化和流行病学监测提供可靠的技术支持。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 双重荧光定量PCR TaqMan探针 aj/bk亚群
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