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tva受体基因起始密码子突变对清远麻鸡感染K亚群禽白血病病毒的影响 被引量:1
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作者 徐慧娟 邝智祥 +4 位作者 左珂菁 吴承洋 郑泓昊 谢青梅 陈伟国 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第3期351-357,共7页
【目的】探究tva受体基因起始密码子突变tva c.3G>A对清远麻鸡感染K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)的影响。【方法】利用直接测序方法对清远麻鸡不同品系tva c.3G>A突变位点进行基因分型。利用流式细... 【目的】探究tva受体基因起始密码子突变tva c.3G>A对清远麻鸡感染K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)的影响。【方法】利用直接测序方法对清远麻鸡不同品系tva c.3G>A突变位点进行基因分型。利用流式细胞术和RT-qPCR检测RCASBP(K)-EGFP荧光报告病毒和ALV-K GD1601病毒感染清远麻鸡tva c.3G>A突变位点不同基因型鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEFs)的情况。利用RT-qPCR检测ALV-K GD1601病毒感染清远麻鸡tva c.3G>A突变位点不同基因型雏鸡的情况。【结果】tva c.3G>A突变位点的基因分型结果显示,杂合突变基因型tva c.3G/A和纯合突变基因型tva c.3A/A存在于清远麻鸡K、M品系,tva c.3G/A频率分别为0.183、0.133,tva c.3A/A频率分别为0.116、0.033。流式细胞术和RTqPCR检测结果显示,tva c.3G>A突变位点野生型tva c.3G/G CEFs对RCASBP(K)-EGFP和ALV-K GD1601病毒易感,而纯合突变基因型tva c.3A/A CEFs有效抗RCASBP(K)-EGFP和ALV-K GD1601病毒的感染,表明tva c.3G>A突变导致清远麻鸡体外抗ALV-K的感染。ALV-K攻毒试验结果表明,tva c.3G>A突变导致清远麻鸡体内抗ALV-K的感染。【结论】tva c.3G>A突变引起清远麻鸡体外、体内抗ALV-K的感染,该突变位点可作为清远麻鸡ALV-K抗性选育的遗传标记。 展开更多
关键词 清远麻鸡 k亚群禽白血病病毒 tva受体基因 突变 遗传抗性
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J、K亚群禽白血病病毒血液核酸快速筛查技术的建立
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作者 王红梅 周婉怡 +7 位作者 罗鑫杰 陈荟琳 陈钦玺 舒雪利 张金玉 苏桐 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第12期6316-6325,共10页
为了缩短J、K亚群禽白血病病毒(subgroup J/K avian leukosis virus,ALV-J/K)净化检测周期,加快禽白血病(avian leukosis,AL)净化进程,本研究建立了一种适用于ALV-J/K低流行率场景下的血液核酸快速筛查技术(ALV-J/K blood quantitative ... 为了缩短J、K亚群禽白血病病毒(subgroup J/K avian leukosis virus,ALV-J/K)净化检测周期,加快禽白血病(avian leukosis,AL)净化进程,本研究建立了一种适用于ALV-J/K低流行率场景下的血液核酸快速筛查技术(ALV-J/K blood quantitative polymerase chain reaction,ALV-J/K-B-qPCR)。选取ALV-J、ALV-K保守区域设计特异性引物和TaqMan探针,并优化反应条件,建立了ALV-J/K TaqMan qPCR方法。以细胞病毒分离鉴定为ALV-J/K的阳性血液为实验材料,制备抗凝血DNA、血细胞DNA和血浆cDNA,进行ALV-J/K TaqMan qPCR检测,筛选最佳检测模板;使用血液室温裂解试剂盒和通用型柱式基因组DNA提取试剂盒提取核酸,筛选核酸提取方法;探索阳性样品不同稀释倍数对检测结果的影响,评估混合样本检测的可行性。运用ALV-J/K-B-qPCR进行预期流行率为1%~2%的血液核酸筛查模拟试验,并与病毒分离法比较。结果显示:ALV-J/K TaqMan qPCR特异性、灵敏性和重复性试验结果显示,该方法仅能特异性扩增ALV-J和ALV-K,对阳性标准品的检测下限分别为8.95×10^(1)copies·μL^(-1)、8.16×10^(1)copies·μL^(-1),比普通PCR灵敏性高100倍,批内和批间变异系数均<2%。96份临床样本检测结果显示,ALV-J/K TaqMan qPCR检出率为21.9%,高于普通PCR(15.6%)和ALV p27 ELISA(18.8%)。检测模板筛选试验中,抗凝血DNA为最佳检测模板。核酸提取方法筛选试验中,通用型柱式基因组DNA提取试剂盒提取核酸检测效果最好。混合样本检测可行性评估试验中,本研究建立的检测方法混合样本数量<10时,可检测低病毒载量样本。预期流行率为1%~2%的血液核酸筛查模拟试验结果显示,ALV-J/K-B-qPCR检出率为4%,比病毒分离法高2.5%。本研究建立的ALV-J/K-B-qPCR技术具有同时检测并鉴别ALV-J和ALV-K、检测效率高和节约成本的优势,以期为种禽场AL净化提供新技术。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 k亚群禽白血病病毒 qPCR 核酸筛查 混样检测
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K亚群禽白血病病毒的分离鉴定及RPA-LFD快速检测方法的建立与应用
3
作者 喻华英 曾婷婷 +8 位作者 杨宗维 王粲 牙侯勋 万丽君 罗思思 李孟 谢芝勋 于美玲 谢丽基 《中国家禽》 北大核心 2025年第7期47-55,共9页
为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)检测需求,研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条(Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD)的ALV-K快速检... 为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)检测需求,研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条(Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD)的ALV-K快速检测方法。试验首先通过细胞培养分离鉴定出一株ALV-K,并以此分离株的前病毒DNA作为建立检测方法的模板;其次,针对ALV-K gp85基因保守位置设计引物和探针,优化反应体系的引物浓度、探针浓度和反应温度,在此基础上进行敏感性预试验并以预试验检测限优化反应时间;最后,以优化反应时间进行敏感性试验、稳定性试验及特异性试验。结果显示:建立的ALV-K RPA-LFD反应体系在引物浓度为0.45 mmol/L,探针浓度为0.14 mmol/L,39℃条件下反应21 min,其检测限为4.86×10^(2) copies/反应的ALV-K DNA,并且不与其他常见禽类病原体核酸发生非特异扩增反应;30份临床病料中有14份ALV-K阳性,与单重PCR方法结果一致。研究表明,建立的ALV-K RPA-LFD检测方法具有快速、特异、操作简单,不需要复杂仪器,能够直观地观察结果的优点,适用于临床快速检测ALV-K,特别是实验室条件有限的检测场景。 展开更多
关键词 家禽 k亚群禽白血病病毒 重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条 快速检测
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K亚群禽白血病病毒gp85单因子血清的制备及其特异性鉴定 被引量:3
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作者 孙鹏 陈孜孟 +4 位作者 赵国梁 崔宁 祖铭 崔治中 苏帅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期371-376,共6页
为了制备一种快速特异性识别K亚群禽白血病病毒(ALV-K)的单因子血清,本试验将ALV-K接种DF1细胞,提取感染细胞DNA作为模板,PCR扩增1 005bp ALV-K-gp85和510bp ALV-K-gp85(fragment)基因。将其正确的阅读框插入表达载体pET-28a(+)中,转化... 为了制备一种快速特异性识别K亚群禽白血病病毒(ALV-K)的单因子血清,本试验将ALV-K接种DF1细胞,提取感染细胞DNA作为模板,PCR扩增1 005bp ALV-K-gp85和510bp ALV-K-gp85(fragment)基因。将其正确的阅读框插入表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(Rosetta)菌株中表达。将表达蛋白常规免疫昆明白小鼠制备抗血清。结果表明成功获得39.85和22.01ku的重组融合蛋白,且具有良好的免疫原性。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明两血清均可与ALV-K反应,而不与ALV-A、ALV-B和ALV-J反应。本试验首次研制获得能特异性识别ALV-K的单因子血清,为K亚群禽白血病的快速检测奠定了基础。 展开更多
关键词 k亚群禽白血病病毒 GP85基因 表达 间接免疫荧光试验(IFA) 单因子血清
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K亚群禽白血病病毒分离株基因测序与鉴定分析 被引量:2
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作者 沈晓鹏 曹斌 +8 位作者 王传峰 陈则东 马跃 朱建平 王成丽 叶建强 俞燕 李拓凡 张俊 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第23期88-93,155,共7页
为了对从江苏省某种鸡场保种的崇仁麻鸡血浆中分离的禽白血病病毒(ALV)进行序列测定和亚群鉴定,试验采用ELISA法检测血浆样品p27抗原,并用从阳性血浆中分离的病毒接种DF1细胞进行免疫荧光检测,提取前病毒DNA,用ALV亚群鉴定引物进行PCR鉴... 为了对从江苏省某种鸡场保种的崇仁麻鸡血浆中分离的禽白血病病毒(ALV)进行序列测定和亚群鉴定,试验采用ELISA法检测血浆样品p27抗原,并用从阳性血浆中分离的病毒接种DF1细胞进行免疫荧光检测,提取前病毒DNA,用ALV亚群鉴定引物进行PCR鉴定,前病毒DNA分3段扩增并测序,对测序结果进行拼接,用MEGA 7.0软件以NJ法对分离株病毒gp85基因编码的氨基酸序列和参考株进行遗传进化分析,采用DNAStar 7.0软件以Clustal W法对参考株与分离株病毒的gp37基因进行比对分析。结果表明:有1份样品的p27抗原ELISA反应呈阳性,免疫荧光检测也呈阳性,将该分离株命名为JS20CR13。K亚群引物PCR检测出大小为560 bp的目的片段。前病毒全基因组总长7 481 bp,其中env基因大小为1 617 bp(gp85基因1 008 bp,编码336个氨基酸;gp37基因大小为609 bp,编码203个氨基酸)。与各参考株对比,分离株JS20CR13的gp85基因序列与K亚群参考株同源性为94.0%~99.0%,明显高于其他亚群;gp85基因编码氨基酸序列与已经鉴定为ALV-K的参考株病毒位于同一个进化分支,而与其他亚群的遗传进化距离较远。分离株JS20CR13的gp37基因序列与ALV-K参考株JS14CZ01同源性最高,达99.0%。说明分离株JS20CR13与已经鉴定为ALV-K的参考株病毒位于同一个进化分支,分离株为K亚群ALV。 展开更多
关键词 k亚群禽白血病病毒 崇仁麻鸡 遗传进化树 GP85基因 gp37基因
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K_0R的一个预序关系(英文)
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作者 冯良贵 郝志峰 《内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版)》 CAS 2001年第2期110-113,118,共5页
对环R ,引进了K0 R的一个新的预序 .特别地 ,用此新预序考察了一个TorK0 R的有关性质 .
关键词 凸子群 预序关系 k0群 环论 TorkoR
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K亚群禽白血病病毒细胞受体的鉴定 被引量:5
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作者 邢立晓 俞燕 +7 位作者 于蒙蒙 常方方 包媛玲 王素艳 高立 祁小乐 王笑梅 高玉龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期802-808,共7页
禽白血病病毒(ALV)进入细胞启动感染依赖于其囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合。K亚群ALV(ALV-K)是2012年从我国本地芦花鸡中分离到的一个ALV新亚群。为了鉴定ALV-K的细胞受体,本研究利用真核细胞表达了A和K亚群ALV gp85蛋白,并利用实... 禽白血病病毒(ALV)进入细胞启动感染依赖于其囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合。K亚群ALV(ALV-K)是2012年从我国本地芦花鸡中分离到的一个ALV新亚群。为了鉴定ALV-K的细胞受体,本研究利用真核细胞表达了A和K亚群ALV gp85蛋白,并利用实验室前期拯救的重组病毒RCAS-A-GFP和RCAS-K-GFP进行病毒受体的交叉干扰试验,结果显示A亚群ALV(ALV-A)gp85蛋白能够抑制ALV-K的感染,同样ALV-Kgp85蛋白也能够抑制ALV-A的感染,存在受体交叉干扰现象,因而推测二者可能共用细胞受体。已有研究表明Tva是ALV-A的细胞受体,本研究利用Co-IP和Pull-down试验检测了ALV-Kgp85与Tva的互作,结果显示ALV-Kgp85蛋白能与可溶性的Tva(sTva)相互作用。进一步的流式细胞术结果显示ALV-Kgp85能够高效结合Tva,结合率在90%以上。为进一步验证Tva是否能介导ALV-K进入细胞,利用ALV的非易感细胞HEK293T进行了Tva受体重建试验,结果显示RCAS-K-GFP能够进入表达Tva的293T细胞并复制产生较强的绿色荧光。以上结果充分表明Tva也是ALV-K的细胞受体,能够介导ALV-K进入宿主细胞,启动其感染。该研究为阐明ALV-K侵入宿主细胞机制及抗病毒靶点筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 k亚群禽白血病病毒 细胞受体 Tva蛋白 结合 进入
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K亚群禽白血病病毒分离株全基因组测序及序列分析 被引量:5
8
作者 俞燕 周生 +4 位作者 徐步 邵红霞 钱琨 叶建强 秦爱建 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1091-1098,共8页
K亚群禽白血病病毒(ALV-K)是近年来从地方品种鸡分离鉴定的新亚群ALV。本试验在对江苏某原种鸡场保存的琅琊鸡开展禽白血病净化过程中,分离并鉴定1株ALV-K,命名为JS13LY19。为探明其基因组来源及特征,对JS13LY19分离株前病毒DNA进行了... K亚群禽白血病病毒(ALV-K)是近年来从地方品种鸡分离鉴定的新亚群ALV。本试验在对江苏某原种鸡场保存的琅琊鸡开展禽白血病净化过程中,分离并鉴定1株ALV-K,命名为JS13LY19。为探明其基因组来源及特征,对JS13LY19分离株前病毒DNA进行了分段克隆和测序,获得全长基因组序列,并与各亚群ALV参考株进行比对分析。结果显示,JS13LY19分离株符合复制完整型C型反转录病毒特征,缺乏肿瘤基因。其gp85基因相较于其他亚群ALV,与ALV-K参考株遗传进化关系最为接近,与ALV-K原型株JS11C1一致性最高(99.2%);而gag、pol、gp37、LTR、UTR及JS13LY19与内源性ALV显示出更高的一致性(92.0%~99.4%);其LTR U3区比大部分外源性ALV LTR少了1个CAAT enhancer盒、PRE盒、CArG盒及Y盒。JS13LY19分离株极有可能是JS11C1与内源性ALV重组产生,且具有内源性ALV LTR及U3区转录调控元件的部分缺失,可能使JS13LY19转录能力下降而致病性降低。 展开更多
关键词 k亚群禽白血病病毒 序列分析 LTR 转录调控元件 地方品种鸡
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6株K亚群禽白血病病毒分离株的全基因组测序及遗传进化分析 被引量:5
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作者 游广炬 阿热阿依·海依拉提 +5 位作者 李炜 李晓齐 高丽 曹红 王永强 郑世军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期116-126,共11页
为研究目前中国临床流行的ALV毒株特征,我们采集临床上ALV P27阳性的鸡的血浆,接种DF-1细胞进行病毒分离,分离出6株外源性ALV毒株,并进一步对分离毒株进行前病毒全基因组测序。结果表明,6个ALV分离株的基因组结构均为典型的复制完整型C... 为研究目前中国临床流行的ALV毒株特征,我们采集临床上ALV P27阳性的鸡的血浆,接种DF-1细胞进行病毒分离,分离出6株外源性ALV毒株,并进一步对分离毒株进行前病毒全基因组测序。结果表明,6个ALV分离株的基因组结构均为典型的复制完整型C型逆转录病毒,缺乏病毒致癌基因,分离株DT190901基因组全长为7473 bp;DT190902和DT190905为7467 bp;DT190903和DT190906为7481 bp;DT190904为7493 bp,分离株间基因组序列同源性较高(98.6%~99.9%)。对6个ALV分离株与其他ALV毒株进行序列比较和遗传进化分析,结果表明,分离株的LTR、gag、pol及gp37基因与内源性ALV相比具有较高同源性(>93.8%),gp85基因与ALV-K一致性较高(>95.4%),属于新型ALV亚群(K亚群)遗传分支。分离株的LTR序列与内源性ALV相似,比其他外源性ALV亚群缺少一个CAAT Box、PRE Box、Y Box及CArG Box等转录调控元件。结果表明这6个分离株属于ALV-K亚群,为ALV-K与内源性ALV的重组毒株,其LTR序列与内源性ALV接近可能导致其复制能力及致病性降低。遗传进化分析表明,ALV-K已经在我国局部流行,并出现基因重组和突变毒株,应该引起重视并改进净化防控措施控制ALV-K流行。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 k亚群 重组毒株 全基因组测序 遗传进化分析
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K亚群禽白血病病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:6
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作者 王瑞明 都玉印 +7 位作者 相英杰 郭龙宗 李玉燕 李阳 李建亮 赵鹏 王一新 崔言顺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期524-529,共6页
根据K亚群禽白血病病毒(ALV-K)gp85基因序列设计1对引物,对反应条件和反应体系进行优化,建立了快速检测ALV-K的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。该方法在1~10^7 copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到1copies/μL,是常规PCR... 根据K亚群禽白血病病毒(ALV-K)gp85基因序列设计1对引物,对反应条件和反应体系进行优化,建立了快速检测ALV-K的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。该方法在1~10^7 copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到1copies/μL,是常规PCR方法的100倍。该方法与经典亚群ALV及其他常见禽免疫抑制病病毒无交叉反应,批间与批内重复性试验变异系数均小于2%。将ALV-K原型株JS11C1通过卵黄囊接种途径感染SPF鸡,运用本试验建立的实时荧光定量PCR方法,对感染鸡体内各器官的病毒分布及病毒载量进行了检测。结果显示,在感染鸡的心脏、脾脏、肺脏、肾脏等器官中均可检测到病毒,其载量无明显差异。结果表明,本试验所建立的实时荧光定量PCR方法具有敏感度高、特异性强和重复性好的优点,可用于ALV-K的快速、定量检测,该方法同时为ALV-K致病机制的研究提供了良好的技术手段。 展开更多
关键词 k亚群禽白血病病毒(ALV-k) 实时荧光定量PCR 病毒载量
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J、K亚群禽白血病病毒的分离和囊膜蛋白(gp85)基因序列分析 被引量:4
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作者 周钊灿 游广炬 +4 位作者 杨金易 苏晓娜 高丽 王永强 郑世军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期1-10,共10页
为了解现阶段我国禽白血病病毒(ALV)的流行特征和演化趋势,本试验于2021—2022年从国内某鸡场采集蛋清ALV衣壳蛋白(p27)抗原阳性的鸡血浆,接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒并进行亚群鉴定;采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离株的囊... 为了解现阶段我国禽白血病病毒(ALV)的流行特征和演化趋势,本试验于2021—2022年从国内某鸡场采集蛋清ALV衣壳蛋白(p27)抗原阳性的鸡血浆,接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒并进行亚群鉴定;采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离株的囊膜蛋白(gp85)基因片段,并对其进行测序,将基因序列与ALV不同亚群毒株进行比对和遗传进化分析;选取氨基酸变化差异较大的分离毒株进行间接免疫荧光鉴定。结果显示,共分离到7株ALV毒株(3株J亚群,4株K亚群),ALV-J分离毒株CAU4932、CAU4860和CAU2259的gp 85基因片段长度为918 bp,编码306个氨基酸,分离毒株之间gp 85基因核苷酸同源性为90.5%~95.2%,gp85蛋白氨基酸同源性为95.1%~99.3%;ALV-K分离毒株CAU7049、CAU5006、CAU7176和CAU7168的gp 85基因片段长度为1008 bp,编码336个氨基酸,分离毒株之间gp 85基因核苷酸同源性为89.4%~92.3%,gp85蛋白氨基酸同源性为94.0%~99.7%。gp85蛋白氨基酸序列同源性比对发现,分离株gp85蛋白氨基酸序列均会发生突变,但高变区hr1和hr2所占比例较多,证实了gp85的高变性。在gp85蛋白B细胞抗原表位中存在部分位点的氨基酸突变,可能导致gp85蛋白抗原性发生变化。间接免疫荧光鉴定结果显示,5株分离毒株均可在DF-1细胞内复制并存在可被抗体识别的p27抗原表位。结果表明,本试验分离的7株ALV毒株是国内ALV-J和ALV-K流行毒株的突变株,不仅丰富了ALV基因组库资源,且为后续研究ALV的遗传变异特征和流行趋势等提供参考依据。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 k亚群 gp 85基因 序列比较
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K亚群禽白血病病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:4
12
作者 陈轩 赵海燕 +6 位作者 杨素 曹伟胜 黄海超 邵建宏 赵福振 沙才华 廖秀云 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期224-231,共8页
根据GenBank数据库K亚群禽白血病病毒(Subgroup K avian leukosis virus,ALV-K)特异性抗原gp85的基因序列,设计一组ALV-K特异性的引物和探针,并构建阳性重组质粒。在对反应体系进行优化的基础上,建立了ALV-K的实时荧光RT-PCR检测方法... 根据GenBank数据库K亚群禽白血病病毒(Subgroup K avian leukosis virus,ALV-K)特异性抗原gp85的基因序列,设计一组ALV-K特异性的引物和探针,并构建阳性重组质粒。在对反应体系进行优化的基础上,建立了ALV-K的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验和重复性试验。结果显示,本方法能对ALV-K进行特异性扩增,而对A亚群、B亚群、J亚群、E亚群禽白血病毒和新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、禽网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽流感病毒(AIV)等禽病病原未见扩增。该方法最低能够检测到3.4×101拷贝数/μL的阳性质粒,灵敏度是RT-PCR的100倍。应用本方法对人工攻毒ALV-K的SPF鸡各脏器进行病毒定量分析,结果显示,在攻毒鸡体内心、肝、脾、肺、肾等脏器中均能检测到ALV-K,且肝、肾和脾中的病毒含量显著高于心和肺(P〈0.01)。 展开更多
关键词 禽白血病病毒(ALV-k) k亚群 实时荧光RT-PCR 检测方法 应用
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禽白血病病毒K亚群HB2018003株感染性克隆构建 被引量:5
13
作者 陈雪阳 王后坤 +3 位作者 朱丽霖 方春 梁雄燕 杨玉莹 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第2期107-111,共5页
为了获得背景明确清晰的禽白血病病毒K亚群(ALV-K)毒株,对地方性ALV-K毒株HB2018003采用酶切和同源重组两种方法进行感染性克隆构建及病毒拯救。使用PCR方法获得目的基因,经酶切、连接和同源重组后成功构建重组质粒Topo-003-ABC和Topo-0... 为了获得背景明确清晰的禽白血病病毒K亚群(ALV-K)毒株,对地方性ALV-K毒株HB2018003采用酶切和同源重组两种方法进行感染性克隆构建及病毒拯救。使用PCR方法获得目的基因,经酶切、连接和同源重组后成功构建重组质粒Topo-003-ABC和Topo-003-K12,测序结果表明无任何突变,进而将重组质粒转染进鸡胚成纤维细胞(DF-1)中,经群特异性抗原P27 ELISA、PCR和间接免疫荧光(IFA)鉴定,结果均表明成功拯救出病毒,将其命名为R-rHB2018003(同源重组法)和E-rHB2018003(酶切法)。本研究为深入探讨ALV-K的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 k亚群禽白血病病毒 感染性克隆 病毒拯救
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禽白血病病毒K亚群RT-LAMP检测方法的建立 被引量:7
14
作者 黄海超 陈轩 +6 位作者 杨素 赵海燕 曹伟胜 邵建宏 赵福振 沙才华 李忠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期161-166,共6页
根据Gen Bank数据库中禽白血病病毒(ALV)K亚群特异性的gp85基因序列,设计了特异性检测ALV K亚群(ALV-K)的RT-LAMP引物。对内、外引物浓度组合和反应温度进行优化,建立了ALV-K的RT-LAMP检测方法。特异性试验结果显示,本方法只对ALV-... 根据Gen Bank数据库中禽白血病病毒(ALV)K亚群特异性的gp85基因序列,设计了特异性检测ALV K亚群(ALV-K)的RT-LAMP引物。对内、外引物浓度组合和反应温度进行优化,建立了ALV-K的RT-LAMP检测方法。特异性试验结果显示,本方法只对ALV-K进行特异性扩增,而对禽白血病的其他亚群以及NDV、REV、AIV、MDV、IBV等常见禽病病原未见扩增。敏感性试验表明,本方法最低能够检测到3.4×104copies/L的质粒。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 k亚群 RT-LAMP 检测方法
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基于改进的K-means聚类算法的汽车市场竞争情报分析 被引量:4
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作者 马廷博 刘太安 +1 位作者 徐建国 刘欣颖 《山东科技大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2019年第1期74-84,共11页
应用AHP(analytic hierarchy process)和EWM(entropy weight method),对中国A级轿车市场数据进行了分析量化处理,设计了竞争威胁数据指标,基于改进的K-means聚类算法对该市场进行了社会网络分析;通过品牌间竞争矩阵构建了中间中心度及... 应用AHP(analytic hierarchy process)和EWM(entropy weight method),对中国A级轿车市场数据进行了分析量化处理,设计了竞争威胁数据指标,基于改进的K-means聚类算法对该市场进行了社会网络分析;通过品牌间竞争矩阵构建了中间中心度及凝聚子群,分析了产品性能指标偏重程度和企业所在该市场的竞争地位。数值实验表明:改进的K-means聚类算法对于文中样本对象,得到了更为精确的聚类效果,对中国A级轿车市场的社会网络分析准确有效。 展开更多
关键词 k-MEANS聚类算法 中间中心度 凝聚子群 竞争威胁 社会网络分析
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基于改进K-Means算法的企业竞争情报研究——以社会网络分析为方法 被引量:10
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作者 路燕 于晓东 《情报科学》 CSSCI 北大核心 2017年第12期81-85,共5页
【目的/意义】为了提高企业在市场的竞争力,企业应尽量获取更多的企业竞争情报。【方法/过程】以当前笔记本电脑市场为例,基于改进的、可高效准确划分类簇的K-means聚类分析算法,对企业的市场竞争情况做社会网络分析。论文通过建立各企... 【目的/意义】为了提高企业在市场的竞争力,企业应尽量获取更多的企业竞争情报。【方法/过程】以当前笔记本电脑市场为例,基于改进的、可高效准确划分类簇的K-means聚类分析算法,对企业的市场竞争情况做社会网络分析。论文通过建立各企业间的竞争力相关矩阵构建竞争网络,并进行中间中心度分析和凝聚子群分析。【结果/结论】可以得到企业在竞争市场中的战略地位,以及其它企业产品在竞争市场中的情况,使企业具有更高的竞争情报获取和分析能力。 展开更多
关键词 竞争情报 k-MEANS算法 中间中心度分析 凝聚子群分析
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A New Characterization of Simple K_3-groups 被引量:1
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作者 王临红 《Northeastern Mathematical Journal》 CSCD 2001年第2期205-209,共5页
In this paper, We show that the simple K\-3-groups can be characterized by the orders of their maximal abelian subgroups. That is, we have Theorem Let G be a finite group and M a simple K \-3-group. Then ... In this paper, We show that the simple K\-3-groups can be characterized by the orders of their maximal abelian subgroups. That is, we have Theorem Let G be a finite group and M a simple K \-3-group. Then G is isomorphic to M if and only if the set of the orders of the maximal abelian subgoups of G is the same as that of M . 展开更多
关键词 finite group simple k\-3-group maximal abelian subgroup prime graph
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X-群中几种广义幂零性的等价性 被引量:4
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作者 张志让 《西南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1989年第3期14-20,共7页
本文通过对任意群G的K-根K(G)的性质的研究,证明了X-群中几种常见的广义幂零性的等价性。
关键词 X-群 k-子群 广义幂零性 等价性
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多杀性巴氏杆菌与禽白血病病毒亚群混合感染诊断及相关基因分析 被引量:4
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作者 罗东还 吴强 +5 位作者 温贵兰 胡璇 张小波 文明 欧德渊 龚新勇 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期526-537,共12页
【目的】明确引起贵州某规模化(20万羽)养殖场三黄鸡群发病的病因及科学用药,最大限度减轻经济损失,同时为规模化养殖场防控禽白血病和净化鸡群提供参考依据。【方法】无菌采集送检病鸡的心脏、肝脏和脾脏等组织进行细菌分离培养、生化... 【目的】明确引起贵州某规模化(20万羽)养殖场三黄鸡群发病的病因及科学用药,最大限度减轻经济损失,同时为规模化养殖场防控禽白血病和净化鸡群提供参考依据。【方法】无菌采集送检病鸡的心脏、肝脏和脾脏等组织进行细菌分离培养、生化试验、荚膜分型、毒力基因和耐药基因等分子生物学检测,同时对采集病料进行禽白血病病毒(ALV)PCR检测及gp85基因克隆测序分析。【结果】成功分离获得1株多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),命名为Pm-GZXF2021;Pm-GZXF2021为荚膜A型Pm,具有黏附素(ptfA、hsf-1、hsf-2、pfhA、fimA和tadD)、超氧化物歧化酶(sodA)、外膜蛋白(ompA、ompH、plpB和oma87)和铁摄取(exbB、exbD、tonB、Fur、hgbB和hgbA)相关的毒力基因,同时携带有喹诺酮类的gyrB耐药基因和内酰胺类的tem耐药基因;药敏试验结果表明,Pm-GZXF2021对米诺环素、丁胺卡那、哌拉西林、庆大霉素、多西环素、氧氟沙星、新霉素、头孢拉定、麦迪霉素及头孢哌酮等药物敏感,而对头孢他啶、苯唑西林、羧苄西林及头孢曲松等药物已产生耐药性;健康昆明小鼠在接种Pm-GZXF2021纯培养菌液(1.7×10;CFU/mL)后12 h内全部死亡,剖检可见昆明小鼠小肠均出现胶冻样浸润,肝脏肿大且伴有白色坏死灶。从病鸡的组织样品检测出ALV,命名为ALV-GZXF2021;由基于gp85基因核苷酸序列相似性构建的ALV系统发育进化树可知,ALV-GZXF2021与5株ALV-K参考毒株处于同一分支,与A、B、D、E、J亚群处于不同分支,即ALV-GZXF2021属于K亚群。【结论】贵州某规模化养殖场三黄鸡群发病是由Pm与K亚群外源性ALV混合感染所致。因此,养殖场应采取相应的防控措施,一般包括加强饲养管理,做好生物安全措施及疫苗接种等,尤其是建立无禽白血病的种鸡群。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌(Pm) 禽白血病病毒(ALV) k亚群 混合感染 基因分析
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含治愈个体生存资料的亚组识别研究 被引量:2
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作者 黄福强 康佩 +2 位作者 刘颖欣 许军 安胜利 《中国卫生统计》 CSCD 北大核心 2020年第5期672-677,共6页
目的基于K指数构建一个用于检验生存资料是否存在亚组的统计量,若存在亚组则利用亚组相关协变量建立亚组判别模型预测病人的亚组身份。方法基于AFT模型与AFTMC模型所得K指数构建统计量K sub检验生存资料是否存在亚组,当存在亚组时构建... 目的基于K指数构建一个用于检验生存资料是否存在亚组的统计量,若存在亚组则利用亚组相关协变量建立亚组判别模型预测病人的亚组身份。方法基于AFT模型与AFTMC模型所得K指数构建统计量K sub检验生存资料是否存在亚组,当存在亚组时构建统计量K off寻找区分亚组的最佳时间点,并确定每位患者的亚组身份,进而建立亚组判别模型。结果K sub的Ⅰ类错误基本控制在0.05以内,检验效能在多数情况下能够保持较高水平,但当样本量较少、治愈率低以及删失率较高时,K sub的检验效能下降。在用K off寻找到区分亚组的最佳时间点T(off)之后,在自定义的四种方法中,方法三识别患者亚组身份的平均灵敏度、特异度和准确度分别为86.8%、82.5%和89.7%,标准差分别为4.1%,5.3%和6.7%。在与自定义的四种方法相对应的四个判别模型中,模型三预测新入组患者亚组身份的平均灵敏度、特异度、准确度和AUC均最高(分别为93.1%、77.5%、82.7%和87.6%),波动范围均最小(标准差分别为6.7%、7.2%、5.1%和3.3%)。结论生存资料可用统计量K sub检验是否存在亚组。若存在亚组,方法三能够准确和稳定地识别患者的亚组身份,模型三能够有效地预测新入组患者的亚组身份。 展开更多
关键词 AFTMC模型 AFT模型 亚组识别 k指数
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