火鸡疱疹病毒亚克隆对活载体疫苗性能影响的研究

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作者 谢丽华 王志胜 +9 位作者 童玲 栗环环 郑亚婷 刘娅梅 张传健 郭容利 Armando Mario DAMIANI 呙荣兵 黄腾 王继春 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第6期92-97,共6页

旨在比较火鸡疱疹病毒(HVT)亚克隆对构建活载体疫苗的影响。本研究采用同源重组方法,在HVT Fc126的UL55与UL56基因间的非编码区插入MiniF序列,构建重组病毒;采用细菌人工染色体(BAC)技术,分别提取病毒DNA后转入DH10B感受态细胞中,构建3... 旨在比较火鸡疱疹病毒(HVT)亚克隆对构建活载体疫苗的影响。本研究采用同源重组方法,在HVT Fc126的UL55与UL56基因间的非编码区插入MiniF序列,构建重组病毒;采用细菌人工染色体(BAC)技术,分别提取病毒DNA后转入DH10B感受态细胞中,构建3个对应的BAC;将传染性法氏囊病毒(IBDV)的VP2表达盒分别与3株BAC的DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行重组病毒的拯救;将重组活载体、亲本毒株及商品化重组活载体的生长动力学进行比较;将3株重组活载体接种SPF鸡后,在免疫后第3、4、5、6周等共4个时间点采集血清进行琼脂扩散试验。结果:获得3个纯化的HVT-MiniF亚克隆病毒,然后获得3株对应的HVT BAC,分别命名为HVT BAC-C1、HVT BAC-C2和HVT BAC-C3。限制性片段长度多态性(RFLP)鉴定发现这3个BAC亚克隆的基因组主体序列几乎一致,略有差异;进一步获得3株相对应的VP2重组HVT活载体,分别命名为HVT-VP2-C1、HVT-VP2-C2、HVT-VP2-C3;生长动力学结果表明,3株VP2重组病毒与2株对照病毒的滴度在6、24、36和72 h存在显著性差异(P<0.05),在12和48 h无明显差异(P>0.05);琼脂扩散试验结果发现3个亚克隆的重组病毒均能产生较高抗体,但都没有达到对照商品疫苗的水平;3个亚克隆重组病毒之间产生的抗体存在明显差异,其中HVT-VP2-C2免疫鸡后产生的抗体最高。综上,HVT在传代过程中可能易出现基因变异,提示在构建重组活载体疫苗时,应充分考虑不同亚克隆活载体的免疫效力差异,做好种毒纯化。 展开更多

关键词 火鸡疱疹病毒 亚克隆 活载体疫苗 细菌人工染色体 免疫效力

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棉花抗黄萎病相关基因筛选与亚克隆文库构建 被引量：12

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作者 王文生 王省芬 +1 位作者 马峙英 张桂寅 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第B10期147-150,共4页

以黄萎病菌诱导下差异表达的棉花抗病相关基因片段PR8为探针，利用杂交方法，对优质、抗病海岛棉品种Pima90—53BAC文库进行筛选。从30336个BAC克隆中筛选到含有PR8基因片段的4个阳性克隆，分别为127K13，128D14，169J3和178C5。用Sau3A... 以黄萎病菌诱导下差异表达的棉花抗病相关基因片段PR8为探针，利用杂交方法，对优质、抗病海岛棉品种Pima90—53BAC文库进行筛选。从30336个BAC克隆中筛选到含有PR8基因片段的4个阳性克隆，分别为127K13，128D14，169J3和178C5。用Sau3AI对其中的169J3克隆进行酶切，回收2—4kb的DNA片段并连接到载体pUCI18BamHI—BAP上，构建了含有该基因片段的亚克隆文库，共含有4224个克隆。经电泳检测，插入片段在1．3kb，平均为2kb。该亚克隆文库的构建为克隆PR8基因奠定了基础。 展开更多

关键词 棉花 黄萎病 BAC 亚克隆文库 基因克隆

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DNA序列分析鉴定HLA-DRB1新等位基因DRB1 1449 被引量：7

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作者 缪扣荣 潘芹芹 +7 位作者 薛敏 旭日 周小玉 费小明 赵星 徐安龙 汪承亚 KuKuruga D 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2006年第2期100-103,共4页

目的鉴定HLADRB1位点新等位基因。方法应用基因克隆和DNA测序技术对1例受检样本HLADRB1基因第2外显子(Exon2)作核苷酸序列分析,与已知等位基因序列比对并作血清学分型。结果基因组DNA和DNA克隆的测序结果一致;DRB1Exon2的核苷酸序列与... 目的鉴定HLADRB1位点新等位基因。方法应用基因克隆和DNA测序技术对1例受检样本HLADRB1基因第2外显子(Exon2)作核苷酸序列分析,与已知等位基因序列比对并作血清学分型。结果基因组DNA和DNA克隆的测序结果一致;DRB1Exon2的核苷酸序列与已知等位基因序列均不相同,与同源性最高的HLADRB11432相比,存在4处碱基的改变;以Exon2的第1位碱基为记数起点,核苷酸71位C→>G,196位G→>A,244位T→>G和245位上G→>T,引起相应编码氨基酸28位上天门冬氨酸(Asp)→>谷氨酸(Glu),70位上精氨酸(Arg)→>谷氨酸盐(Gln),86位上缬氨酸(Val)→>氨基乙酸(Gly)。血清学分型结果表明新等位基因血清学特异性为DR14。结论被检标本HLADRB位点存在新等位基因,2005年2月WHOHLA命名委员会正式将其命名为HLADRB11449。 展开更多

关键词 新等位基因 DRB1^＊ 1449 HLA DNA 测序DNA 亚克隆

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叶面喷施尿素对葡萄氮代谢相关基因表达的影响 被引量：18

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作者 初建青 王文艳 +3 位作者 房经贵 张春华 张彦平 宋长年 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期405-416,共12页

本研究利用VitisEST数据库中EST序列片段结合RT-PCR方法克隆了与氮代谢相关的硝酸盐还原酶(NR)、亚硝酸还原酶(NiR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸脱氢酶(GDH)和天冬酰胺合成酶(AS)的基因,并对它们进行亚细胞定位分析。同时,采用半定量RT... 本研究利用VitisEST数据库中EST序列片段结合RT-PCR方法克隆了与氮代谢相关的硝酸盐还原酶(NR)、亚硝酸还原酶(NiR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸脱氢酶(GDH)和天冬酰胺合成酶(AS)的基因,并对它们进行亚细胞定位分析。同时,采用半定量RT-PCR和荧光定量PCR法研究葡萄叶面喷施不同浓度尿素后5个基因的表达变化。结果表明,5个基因在葡萄幼叶中的表达水平显著高于老叶,说明叶面喷施尿素以喷布到幼叶对5个基因的表达水平影响显著;5个基因在不同时间段的表达水平差异不一致,但表达水平均高于对照,以0.3%和0.5%浓度的尿素对其影响明显;适当提高尿素水平既能提高氮代谢基因的表达水平,又能提高果实大小等果实指标,使其达到同步增加。喷施尿素6 h后,GS的表达量上升幅度明显高于其它基因,而NR在喷施尿素后48 h内一直保持着比较高的表达水平;NiR、AS表达量的变化趋势分别与NR、GS相一致,并且表现为NR﹥NiR,GS﹥AS。 展开更多

关键词 葡萄 氮代谢 基因克隆 亚细胞定位 基因表达

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WEHI164－C1细胞株检测TNF的MTS／PMS比色法的建立 被引量：5

5

作者 章卫平 曹雪涛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期263-266,共4页

本文用有限稀释法对ＷＥＨＩ１６４细胞进行了亚克隆，从１２株中筛选出一株对ＴＮＦ高度敏感的亚克隆细胞株ＷＥＨＩ－Ｃｌ。ＭＴｓ的还原产物具有良好的水溶性，ＭＴＳ／ＰＭＳ比色法与ＭＴＴ法相比较具有简便、快速的优点。我们首先... 本文用有限稀释法对ＷＥＨＩ１６４细胞进行了亚克隆，从１２株中筛选出一株对ＴＮＦ高度敏感的亚克隆细胞株ＷＥＨＩ－Ｃｌ。ＭＴｓ的还原产物具有良好的水溶性，ＭＴＳ／ＰＭＳ比色法与ＭＴＴ法相比较具有简便、快速的优点。我们首先将ＭＴＳ引入细胞毒的检测，用ＷＥＨＩ１６４－Ｃｌ亚克隆株建立了检测ＴＮＦ的ＭＴＳ／ＰＭＳ比色法。此方法不仅简便、快速．而且敏感度高（比常规Ｌ９２９细胞检测法敏感１０～１５倍）、特异性强（ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＰＨＡ、ＣｏｎＡ、ＬＰＳ对检测结果均无明显影响）。 展开更多

关键词 比色法 细胞亚克隆 肿瘤坏死因子

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岑溪软枝油茶全同胞家系子代优良无性系选育 被引量：7

6

作者 王东雪 江泽鹏 +2 位作者 刘凯 黄英辉 张乃燕 《广西林业科学》 2017年第1期32-36,共5页

以岑溪软枝油茶(Cenxi soft-branch Camellia oleifera)全同胞家系林中初选的25株优良单株为材料,开展无性系测定试验,选育出岑软ZJ11、岑软ZJ14和岑软ZJ24三个油茶优良无性系。通过对三个无性系进行主要农艺性状遗传分析和产量差异比较... 以岑溪软枝油茶(Cenxi soft-branch Camellia oleifera)全同胞家系林中初选的25株优良单株为材料,开展无性系测定试验,选育出岑软ZJ11、岑软ZJ14和岑软ZJ24三个油茶优良无性系。通过对三个无性系进行主要农艺性状遗传分析和产量差异比较,结果表明:无性系的鲜出籽率、干出籽率、种仁含油率和果油率的遗传力估计值h2分别为0.986、0.978、0.998和0.980,均接近1.0,表现出较高的遗传力。4~7年生平均产量、果油率在各无性系间均存在显著差异。选育出的3个无性系的早期产量和主要农艺性状均超过或优于对照良种岑软2号和岑软3号,其中每公顷产油量的对照遗传增益分别为4.72%~13.91%和5.49%~14.77%,果油率的对照遗传增益分别为13.15%~23.33%和7.81%~17.50%。 展开更多

关键词 岑溪软枝油茶 全同胞家系 无性系 选育

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含三倍体葡萄糖反应元件的质粒的构建及序列分析 被引量：2

7

作者 吴志香 邵敬伟 袁凤山 《生物技术通讯》 CAS 2005年第6期627-629,共3页

用酚氯仿抽提法提取SD大鼠肝脏的基因组DNA,PCR扩增单倍体葡萄糖反应元件(glre)。分别用SacⅠ酶单酶切glre、pUC118载体后,连接、转化,PCR筛选出含三倍体glre的质粒并测序。结果PCR扩增出51bp的目的DNA片段,与文献报道的葡萄糖反应元件g... 用酚氯仿抽提法提取SD大鼠肝脏的基因组DNA,PCR扩增单倍体葡萄糖反应元件(glre)。分别用SacⅠ酶单酶切glre、pUC118载体后,连接、转化,PCR筛选出含三倍体glre的质粒并测序。结果PCR扩增出51bp的目的DNA片段,与文献报道的葡萄糖反应元件glre的大小一致;连接转化后,经PCR筛选出三倍体glre,序列分析显示其基因序列和Genbank数据库中的glre基因一致。以上结果表明构建成功含三倍体glre的质粒,为构建具双向调节的胰岛素分泌调控基因质粒奠定了基础。 展开更多

关键词 葡萄糖反应元件 Ⅰ型糖果病 亚克隆 基因治疗

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岑软系列油茶无性系栽培品种配置研究 被引量：7

8

作者 曾雯珺 蔡娅 +2 位作者 梁斌 江泽鹏 王东雪 《特产研究》 2023年第3期59-64,共6页

建立岑软系列油茶无性系的授粉配置模式,为油茶高产栽培提供重要的理论依据。本研究以岑软系列油茶无性系为对象,调查开花物候期、花粉量和花粉活力、无性系间授粉亲和程度。结果表明:9个岑软无性系开花物候期主要集中在11月上旬至12月... 建立岑软系列油茶无性系的授粉配置模式,为油茶高产栽培提供重要的理论依据。本研究以岑软系列油茶无性系为对象,调查开花物候期、花粉量和花粉活力、无性系间授粉亲和程度。结果表明:9个岑软无性系开花物候期主要集中在11月上旬至12月下旬,根据盛花期分成早花组、中花组和晚花组,岑软ZJ11、岑软ZJ14和岑软362为早花组,岑软ZJ24、岑软3号、岑软22号和岑软24号为中花组,岑软2号和岑软11号则为晚花组。根据杂交授粉亲本盛花期一致的要求,栽培配置时不建议将岑软ZJ11、岑软ZJ14、岑软362与岑软2号、岑软11号搭配种植;各岑软无性系的单个花药花粉粒数量差异显著,大小范围为1186~4706个/花药,通过方差分析和系统聚类,将9个无性系的单花花粉粒总量分为3级,其中岑软22号和岑软11号最多,岑软3号、岑软ZJ14和岑软362最少;各无性系花粉活力也存在显著差异,开花3 d的变化范围为9.56%~100%,除岑软11号和岑软ZJ14开花3 d内花粉活力能保持在80%以上,其余无性系在开花第3天均表现明显的花粉活力变弱,常温贮藏的花粉授粉时应在开花2 d内完成;22个授粉组合中5个组合座果率达到100%,座果率达75%以上的组合有14个。综合考虑盛花期、花粉量和花粉活力等因素设计授粉组合,结合座果情况,在22个组合中最终筛选出了8个适宜的授粉组合分别为岑软ZJ14岑软ZJ11、岑软ZJ14岑软24号、岑软ZJ24岑软2号、岑软ZJ24岑软11号、岑软ZJ24岑软24号、岑软362岑软ZJ11、岑软362岑软ZJ24和岑软362岑软24号。本研究可为广西油茶种质创新提供理论基础。 展开更多

关键词 岑软系列油茶 全同胞家系 无性系 授粉配置

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淹水胁迫下‘中山杉406’ThRAP2.1基因的克隆、亚细胞定位与表达分析 被引量：2

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作者 范文才 宣磊 +2 位作者 王芝权 施钦 殷云龙 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期2818-2826,共9页

ERF(Ethylene responsive factor)转录因子是植物AP2/EREBP转录因子超家族的一个亚家族,广泛参与植物生长发育及各种逆境胁迫反应的调控,ERF亚家族中的第Ⅶ类成员(ERF-Ⅶs)已被证实是调节低氧相关基因表达和响应水淹胁迫的主要转录因子... ERF(Ethylene responsive factor)转录因子是植物AP2/EREBP转录因子超家族的一个亚家族,广泛参与植物生长发育及各种逆境胁迫反应的调控,ERF亚家族中的第Ⅶ类成员(ERF-Ⅶs)已被证实是调节低氧相关基因表达和响应水淹胁迫的主要转录因子。本研究从中山杉406(Taxodium‘Zhongshanshan 406’)淹水胁迫下获得的转录组数据中,筛选分离出存在显著差异表达的ERF基因,以中山杉406的根为材料,采用RACE技术克隆获得1个ERF-Ⅶ类基因ThRAP2.1(Gen Bank登录号为KY463469)。生物信息学分析表明,ThRAP2.1全长为1 024 bp,包含735 bp的开放阅读框,编码244个氨基酸,无内含子,蛋白质分子量为27.14 kD,等电点为9.30。原生质体的瞬时表达显示:ThRAP2.1蛋白定位于细胞核。实时荧光定量PCR显示:ThRAP2.1基因的表达量在中山杉406淹水后产生显著差异,全淹及半淹处理下,ThRAP2.1基因在根中的表达量均显著高于对照,在叶中的表达量均显著低于对照。上述实验结果表明ThRAP2.1参与了中山杉406在水淹胁迫响应中的调控,可作为候选基因用于中山杉及其他落羽杉属树木耐水淹机制的研究。 展开更多

关键词 中山杉406 ThRAP2.1基因 克隆 亚细胞定位 表达分析

原文传递

人肺表面活性物质结合蛋白A基因组克隆及亚克隆 被引量：1

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作者 姬毅 封志纯 +1 位作者 黄建生 任大明 《中国儿童保健杂志》 CAS 2000年第1期37-39,共3页

【目的】　获得ＳＰＡ Ⅰ基因克隆及亚克隆，并进行序列分析，为研究ＳＰＡ 基因结构、表达调控、基因工程生产奠定基础。【方法】　以正常人血白细胞染色体ＤＮＡ 为模板，采用ＰＣＲ 及基因克隆技术，获得ｐＢＳ／ＳＰＡ Ⅰ克... 【目的】　获得ＳＰＡ Ⅰ基因克隆及亚克隆，并进行序列分析，为研究ＳＰＡ 基因结构、表达调控、基因工程生产奠定基础。【方法】　以正常人血白细胞染色体ＤＮＡ 为模板，采用ＰＣＲ 及基因克隆技术，获得ｐＢＳ／ＳＰＡ Ⅰ克隆和ｐＵＣ１９／６３０ｂｐ 亚克隆，测序证实之。【结果】　测序结果显示，与已发表的ＳＰＡ Ⅰ序列相比，未发现基因突变。【结论】　证实获得的基因为ＳＰＡ Ⅰ。 展开更多

关键词 克隆 亚克隆 SP-A 肺

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人EGFR显性负性突变体真核表达载体的构建、蛋白表达及亚细胞结构定位 被引量：3

11

作者 廖刚 王子卫 +2 位作者 赵林 张能 汤为学 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第21期2266-2270,共5页

目的:构建人EGFR显性负性突变体真核表达载体pEGFPN1-DNEGFR,转染COS-7细胞,检测DNEGFR-EGFP的表达并进行亚细胞结构定位.方法:将RT-PCR(reverse tran-scription-polymerase chain reaction)方法扩增得到编码EGFR信号肽段、胞外区和跨... 目的:构建人EGFR显性负性突变体真核表达载体pEGFPN1-DNEGFR,转染COS-7细胞,检测DNEGFR-EGFP的表达并进行亚细胞结构定位.方法:将RT-PCR(reverse tran-scription-polymerase chain reaction)方法扩增得到编码EGFR信号肽段、胞外区和跨膜区的cDNA,定向克隆至空载体pEG-FP-N1中,构建真核表达载体pEGFPN1-DNEGFR.经PCR扩增鉴定、双酶切鉴定、核苷酸序列测定以及生物信息学分析证明pEGFPN1-DNEGFR构建成功后,脂质体法转染体外培养的COS-7细胞,Western Blot检测DNEGFR-EGFP蛋白的表达,应用光谱激光扫描共聚焦显微镜对DNEGFR-EGFP亚细胞结构定位检测.结果:PCR扩增鉴定、双酶切鉴定、核苷酸序列测定以及生物信息学分析证实pEGFPN1-DNEGFR构建成功,并且Western Blot检测DNEGFR-EGFP蛋白的表达,光谱激光扫描共聚焦显微镜观察显示DNEGFR-EGFP蛋白主要定位于细胞膜.结论:成功构建人EGFR显性负性突变体真核表达载体,并在COS-7细胞胞膜上表达,为靶向EGFR显性负性策略在肿瘤基因治疗中的进一步研究打下基础. 展开更多

关键词 表皮生长因子受体 显性负性突变体 单核苷酸多态性 定向克隆 亚细胞结构定位

原文传递

大白菜CBL家族基因的鉴定和遗传进化分析 被引量：11

12

作者 李利斌 王殿峰 +2 位作者 刘立锋 刘国明 高建伟 《山东农业科学》 2009年第5期4-7,11,共5页

利用拟南芥中的CBL基因序列在GenBank中搜索比对大白菜的基因组序列和EST序列,鉴定出13个大白菜的CBL基因,分别命名为BrCBL1至BrCBL13,并对这些基因预测编码的蛋白序列进行特征分析和遗传进化比较分析,为进一步研究它们在大白菜逆境响... 利用拟南芥中的CBL基因序列在GenBank中搜索比对大白菜的基因组序列和EST序列,鉴定出13个大白菜的CBL基因,分别命名为BrCBL1至BrCBL13,并对这些基因预测编码的蛋白序列进行特征分析和遗传进化比较分析,为进一步研究它们在大白菜逆境响应过程中的功能和利用它们进行大白菜抗逆分子育种奠定了基础。 展开更多

关键词 大白菜 CBLs 电子克隆 结构分析 遗传进化

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中国沙棘人工林持久性对土壤水分状况的响应 被引量：12

13

作者 陈贝贝 曾诚 +3 位作者 高海银 刘春红 李根前 代光辉 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期67-71,共5页

在黄土高原丘陵沟壑区,土壤含水量是决定中国沙棘种群演替方向的主导因子。为探讨中国沙棘人工林持久性对土壤水分状况的响应规律及其克隆繁殖调节机制,采用不同土壤含水率梯度的样地数据,分析克隆繁殖能力与种群特征关系。结果表明:子... 在黄土高原丘陵沟壑区,土壤含水量是决定中国沙棘种群演替方向的主导因子。为探讨中国沙棘人工林持久性对土壤水分状况的响应规律及其克隆繁殖调节机制,采用不同土壤含水率梯度的样地数据,分析克隆繁殖能力与种群特征关系。结果表明:子株数量、克隆器官延伸能力和分枝强度与土壤含水率呈正相关,子株数量与克隆器官延伸能力、分枝强度呈正相关,种群增长率和稳定性随着子株数量的减少而下降。可以表明:土壤水分的减少,使中国沙棘的克隆繁殖和克隆扩散能力减弱,人工林的持久性也相应地下降。 展开更多

关键词 土壤含水率 子株数量 种群结构 克隆扩散 人工林持久性 中国沙棘

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拟南芥抗病基因FLS2和LysM的亚克隆及其在番茄中的表达

14

作者 陈武 杨玉婷 +2 位作者 李颖 黄三文 黎定军 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1635-1642,共8页

从拟南芥JAtYTAC基因组文库中完整地亚克隆了FLS2和LysM两个抗病基因,亚克隆的DNA片段中分别包含各自的启动子、内含子和终止子。利用农杆菌介导的方法分别将这两个基因转化番茄品种‘Moneymaker’,转基因植株经PCR初步筛选后再分别提取... 从拟南芥JAtYTAC基因组文库中完整地亚克隆了FLS2和LysM两个抗病基因,亚克隆的DNA片段中分别包含各自的启动子、内含子和终止子。利用农杆菌介导的方法分别将这两个基因转化番茄品种‘Moneymaker’,转基因植株经PCR初步筛选后再分别提取总RNA进行RT-PCR,以验证其是否在‘Moneymaker’中表达。试验结果表明,FLS2和LysM均能成功地在‘Moneymaker’中表达,说明番茄的转录系统不仅能识别这两个抗病基因的启动子并起始转录,还能正确识别并剪切这两个基因的外显子和内含子。据此推测,拟南芥和番茄这两个远缘物种的转录机制存在相对保守的成份,这为探索在这两个物种间R基因的功能及其下游信号通路的保守性提供了有价值的参考。 展开更多

关键词 拟南芥 番茄 FLS2 LysM 亚克隆 表达

原文传递

B＊48与B＊1568难以应用SSP方法确定低分辨分型的分析

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作者 缪扣荣 潘芹芹 +5 位作者 薛敏 樊甦 王晓艳 赵星 潘猛 汪承亚 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2007年第5期372-375,共4页

目的分析SSP方法难以确定B* 48与B* 1568低分辨分型的原因。方法应用基因克隆和DNA测序技术对受检标本HLA-B基因第1-3外显子(Exon1-3)作核苷酸序列分析,通过序列比对寻找SSP分型困难的原因。结果该标本HLA-B基因Exon1序列与B*4801Exon1... 目的分析SSP方法难以确定B* 48与B* 1568低分辨分型的原因。方法应用基因克隆和DNA测序技术对受检标本HLA-B基因第1-3外显子(Exon1-3)作核苷酸序列分析,通过序列比对寻找SSP分型困难的原因。结果该标本HLA-B基因Exon1序列与B*4801Exon1序列完全相同,与已公布的B* 15Exon1序列相比,第5位碱基由G→T,第11位碱基由C→T,第44、45位碱基由GA→CG。Exon3序列则与B* 1568完全相同,按WHOHLA命名该标本为B* 1568。结论部分PCR-SSP引物序列涉及Exon1区域,但有些等位基因在此区域的序列并未公布,因此可能出现分型困难。分析SSP分型中引物发生的疑难问题,有助于提高HLA分型水平。 展开更多

关键词 等位基因 HLA- PCR—SSP 分型 低分辨 DNA测序 DNA亚克隆

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西尼罗I型病毒亚克隆的构建及其鉴定

16

作者 商涛 马文丽 +4 位作者 黄吉城 张海燕 廖之君 陈霞 郑文岭 《热带医学杂志》 CAS 2008年第3期205-208,共4页

目的构建西尼罗病毒基因组的cDNA亚克隆,为西尼罗病毒全长cDNA克隆的研发和应用打下基础。方法根据基因组中限制性酶切位点的分布设计4对引物,QIAamp RNA抽提试剂盒提取西尼罗病毒培养细胞BHK-21的总RNA,长片段RT-PCR技术扩增目的基因... 目的构建西尼罗病毒基因组的cDNA亚克隆,为西尼罗病毒全长cDNA克隆的研发和应用打下基础。方法根据基因组中限制性酶切位点的分布设计4对引物,QIAamp RNA抽提试剂盒提取西尼罗病毒培养细胞BHK-21的总RNA,长片段RT-PCR技术扩增目的基因片段。将目的基因片段与pMD18-T载体进行连接,转化入感受态细胞E.coli DH5α,进行蓝白斑筛选后得到阳性克隆,将重组质粒进行PCR和测序鉴定。结果获得的目的基因片段经PCR和测序结果表明西尼罗病毒功能基因正确地克隆进入载体。结论成功获得西尼罗I型病毒功能基因的cDNA亚克隆,可应用于西尼罗病毒全长cDNA克隆的制备。 展开更多

关键词 克隆载体 亚克隆构建 长片段RT-PCR 西尼罗病毒

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β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因亚克隆研究

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作者 黄兴奇 郑伟军 +1 位作者 陈永青 宋大新 《西南农业学报》 CSCD 1990年第4期113-115,共3页

β-1,3-1,4-葡聚糖酶（endo-1,3-1,4- -Glucanase）能专一性地分解大麦、燕麦淀粉质胚乳细胞壁的主要成份β-1,3-1,4-葡聚糖,产生还原糖,从而提高大麦和燕麦可利用糖源的含量,促进淀粉的释放。在啤酒酿造中,该酶在提高麦芽利用率,增加... β-1,3-1,4-葡聚糖酶（endo-1,3-1,4- -Glucanase）能专一性地分解大麦、燕麦淀粉质胚乳细胞壁的主要成份β-1,3-1,4-葡聚糖,产生还原糖,从而提高大麦和燕麦可利用糖源的含量,促进淀粉的释放。在啤酒酿造中,该酶在提高麦芽利用率,增加麦汁浸出量,加快糖化液和啤酒的过滤速度,避免啤酒浑浊等方面均有重要作用。最近,作者从Bacillus subtilis 1.88中分离到了含bgls基因的7.1kbEcoRI DNA片段,携带该片段的重组质粒pFG（表达出专一性降解大麦β-1,3-1,4-葡聚糖的酶活性。为了研究bgls基因的结构、功能和表达等特征,我们对bgls基因进行了亚克隆。 展开更多

关键词 β-1 3-1 4-葡聚糖酶 基因 亚克隆

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大肠杆菌头孢哌酮抗性基因亚克隆及序列初步分析

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作者 包勇 范昕建 +3 位作者 舒煦 刘必刚 吴俊辉 雷秉钧 《华西医科大学学报》 CSCD 1999年第3期245-248,共4页

为了确定耐药质粒ｐ Ｆ Ｃ所编码β内酰胺酶衍化类型，用从临床分离出的大肠杆菌耐药质粒 ｐ Ｆ Ｃ头孢哌酮抗性基因，经分段亚克隆，构建重组质粒ｐ Ｆ Ｂ１、ｐ Ｆ Ｂ２、ｐ Ｆ Ｂ３ ，对上述 ３ 个重组质粒分别测序获得的抗性基因... 为了确定耐药质粒ｐ Ｆ Ｃ所编码β内酰胺酶衍化类型，用从临床分离出的大肠杆菌耐药质粒 ｐ Ｆ Ｃ头孢哌酮抗性基因，经分段亚克隆，构建重组质粒ｐ Ｆ Ｂ１、ｐ Ｆ Ｂ２、ｐ Ｆ Ｂ３ ，对上述 ３ 个重组质粒分别测序获得的抗性基因序列经 Ｉｎｔｅｒｎｅｔ互联网同源性检索，表明该抗性基因部分序列，与肺炎克雷伯氏菌编码超广谱β内酰胺酶 Ｔ Ｅ Ｍ５２ 的抗性基因序列存在高度同源性（９７％ ），提示ｐ Ｆ Ｃ头孢哌酮抗性基因所编码的 β内酰胺酶可能衍化自 Ｔ Ｅ Ｍ型。 展开更多

关键词 CPZ质粒 抗性基因 头孢哌酮 大肠杆菌

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高效厌氧氨氧化颗粒污泥脱氮特征及EPS分层特性 被引量：4

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作者 王衫允 贾方旭 +3 位作者 靳鹏飞 高梦佳 马斌 彭永臻 《中国给水排水》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期35-39,共5页

考察了处理低氨氮废水的厌氧氨氧化颗粒污泥的脱氮特征、分层EPS组分及三维荧光光谱特性。结果表明,厌氧氨氧化颗粒污泥表现出高效的厌氧氨氧化活性,对NH+4-N和NO-2-N的平均降解速率分别为0.14和0.15 g/(g VSS·d),去除率分别为80.1... 考察了处理低氨氮废水的厌氧氨氧化颗粒污泥的脱氮特征、分层EPS组分及三维荧光光谱特性。结果表明,厌氧氨氧化颗粒污泥表现出高效的厌氧氨氧化活性,对NH+4-N和NO-2-N的平均降解速率分别为0.14和0.15 g/(g VSS·d),去除率分别为80.1%和97.0%;对TN的去除率为65.8%;该过程伴随N_2O的产生和短时积累,峰值浓度为0.92 mg/L,仅占TN转化率的2.52%;另外,p H值能指示厌氧氨氧化反应的终点。对分层EPS组分的分析可知,蛋白质为所有EPS层的主要成分,达226.9 mg/g VSS,占EPS总量的58.9%;绝大部分EPS为TB-EPS,占EPS总量的77.1%。三维荧光光谱显示蛋白质主要为酪氨酸和色氨酸,两者在TB-EPS中的荧光强度分别为165.5和46.1 AU/(mg C·L)。该研究结果为今后厌氧氨氧化污泥颗粒化的研究提供了理论依据。 展开更多

关键词 厌氧氨氧化 颗粒污泥 PCR—clone 分层胞外聚合物 三维荧光光谱

原文传递

大型模型克隆检测技术研究

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作者 梁正平 谭佳加 +1 位作者 程一群 马骁驰 《计算机科学》 CSCD 北大核心 2012年第4期28-31,52,共5页

模型克隆检测在软件维护、软件结构优化等方面具有重要价值和意义。首先综述了模型克隆的定义,接着对模型克隆的完整检测过程进行了详细划分和讨论,然后介绍了当前国际上最具代表性的两类大型模型克隆检测技术,最后对模型克隆检测的研... 模型克隆检测在软件维护、软件结构优化等方面具有重要价值和意义。首先综述了模型克隆的定义,接着对模型克隆的完整检测过程进行了详细划分和讨论,然后介绍了当前国际上最具代表性的两类大型模型克隆检测技术,最后对模型克隆检测的研究现状和亟需解决的问题进行了分析,并展望了该领域未来的研究方向。 展开更多

关键词 模型驱动开发 模型克隆 克隆检测 子图同构 特征向量

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