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GDNF缺失突变体的设计及其结构与功能关系(英文)
被引量：
1
1
作者
王金惠
冯健男
+1 位作者
刘淑红
王嘉玺
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期557-562,共6页
研究了GDNF结构与功能的关系 .基于鼠源GDNF的晶体结构 ,利用计算机SGIIndigo2(R4 4 0 0 )工作站和InsightⅡ (95.5)蛋白质分析软件模拟了人GDNF三维结构 ,设计了GDNF分子的两个缺失突变体ΔN1 2 8和ΔN78 90 .以野生型GDNFcDNA作为模...
研究了GDNF结构与功能的关系 .基于鼠源GDNF的晶体结构 ,利用计算机SGIIndigo2(R4 4 0 0 )工作站和InsightⅡ (95.5)蛋白质分析软件模拟了人GDNF三维结构 ,设计了GDNF分子的两个缺失突变体ΔN1 2 8和ΔN78 90 .以野生型GDNFcDNA作为模板 ,用PCR法得到编码缺失突变体的DNA片段 .将大肠杆菌作为表达系统 ,使缺失突变体GDNF在大肠杆菌中表达 ,对表达产物纯化和复性后进行生物活性测定 .两株突变体在大肠肝菌中获得了高效表达 ,纯化后的GDNF突变体ΔN1 2 8可以与存在于KG 1a细胞表面的受体结合 ,但不能促进 8日龄鸡胚背根节突起的生长 .突变体ΔN78 90既不能与受体结合 ,同时也失去了促背根节突起生长的功能 .说明GDNF分子的N端氨基酸对分子的生物学活性很重要 ,但对分子与受体GDNFR α的结合并不是必需的 ,而分子中的螺旋区对分子与受体的结合以及生物学活性都必不可少 .
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关键词
gdnf
缺失突变体
结构
功能
设计
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职称材料
纤溶酶原K5抗血管增生活性依赖其完整Kringle结构域
被引量：
6
2
作者
李朝阳
蔡卫斌
+6 位作者
杨中汉
杨霞
宋志宏
周世豪
李明友
刘祖国
高国全
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期17-23,共7页
根据K5蛋白(Pro451—Ala541)的结构特征和二硫键分布特点,设计K5的两个缺失突变体K5 mut1(Cys461—Cys540,保留K5 kringle环3个完整二硫键但去除N端和C端多余氨基酸)和K5mut2(Cys482—Cys535,打开kringle环,只保留2个二硫键).以野生型...
根据K5蛋白(Pro451—Ala541)的结构特征和二硫键分布特点,设计K5的两个缺失突变体K5 mut1(Cys461—Cys540,保留K5 kringle环3个完整二硫键但去除N端和C端多余氨基酸)和K5mut2(Cys482—Cys535,打开kringle环,只保留2个二硫键).以野生型人纤溶酶原K5 cDNA为模板,用PCR方法得到编码缺失突变体的DNA片段,定向克隆入pET22b(+)质粒载体,重组体转化进大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,产物经亲和层析和高浓度甘油透析纯化后进行鉴定和生物活性测定.K5 mut1蛋白特异性抑制人视网膜微血管内皮细胞增殖,且活性强度是完整的K5蛋白2倍;K5mut2对人视网膜微血管内皮细胞无显著抑制作用.结果提示,完整的Kringle结构(包含3个二硫键)是维持人纤溶酶原K5抗血管增生活性的必需结构域,而K5分子中Kringle结构域外的N端和C端氨基酸臂则并非其活性所必需.
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关键词
纤溶酶原
KRINGLE
5
血管增生抑制因子
缺失突变体
结构与功能
暂未订购
用计算机模拟研究人肿瘤坏死因子的结构功能
被引量：
1
3
作者
陈建军
孙苗
+1 位作者
陈常庆
王德宝
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2000年第2期6-12,5,共8页
人肿瘤坏死因子(humantumornecrosisfactor,hTNFα)的生物学活性是由两种不同受体(TNFR1/R55和TNFR2/R75)介导的。为了了解hTNFα与这两种受体相互作用的异同之处,以便指导hTNFα的蛋白质工程改造,根据LT与R55受体胞外区复合物的晶体结...
人肿瘤坏死因子(humantumornecrosisfactor,hTNFα)的生物学活性是由两种不同受体(TNFR1/R55和TNFR2/R75)介导的。为了了解hTNFα与这两种受体相互作用的异同之处,以便指导hTNFα的蛋白质工程改造,根据LT与R55受体胞外区复合物的晶体结构及hTNFα和LT与两种受体结合的相似性,预测了hTNFα与其两种受体胞外区形成复合物的三维结构模型。并根据所得的计算机模型,分析了hTNFα和受体结合前后的溶剂可及表面积的变化,以及受体与hTNFα之间可能形成的氢键、明显的静电作用和疏水作用。然后根据模型对hTNFα的结构-功能关系进行了分析,并以此为基础设计了几个新的hTNFα突变体。
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关键词
人肿瘤坏死因子
计算机模拟
结构功能关系
暂未订购
题名
GDNF缺失突变体的设计及其结构与功能关系(英文)
被引量：
1
1
作者
王金惠
冯健男
刘淑红
王嘉玺
机构
军事医学科学院基础医学研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期557-562,共6页
文摘
研究了GDNF结构与功能的关系 .基于鼠源GDNF的晶体结构 ,利用计算机SGIIndigo2(R4 4 0 0 )工作站和InsightⅡ (95.5)蛋白质分析软件模拟了人GDNF三维结构 ,设计了GDNF分子的两个缺失突变体ΔN1 2 8和ΔN78 90 .以野生型GDNFcDNA作为模板 ,用PCR法得到编码缺失突变体的DNA片段 .将大肠杆菌作为表达系统 ,使缺失突变体GDNF在大肠杆菌中表达 ,对表达产物纯化和复性后进行生物活性测定 .两株突变体在大肠肝菌中获得了高效表达 ,纯化后的GDNF突变体ΔN1 2 8可以与存在于KG 1a细胞表面的受体结合 ,但不能促进 8日龄鸡胚背根节突起的生长 .突变体ΔN78 90既不能与受体结合 ,同时也失去了促背根节突起生长的功能 .说明GDNF分子的N端氨基酸对分子的生物学活性很重要 ,但对分子与受体GDNFR α的结合并不是必需的 ,而分子中的螺旋区对分子与受体的结合以及生物学活性都必不可少 .
关键词
gdnf
缺失突变体
结构
功能
设计
Keywords
structural modeling
,
gdnf
,
deletion mutant
,
structure and function
分类号
Q754 [生物学—分子生物学]
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
纤溶酶原K5抗血管增生活性依赖其完整Kringle结构域
被引量：
6
2
作者
李朝阳
蔡卫斌
杨中汉
杨霞
宋志宏
周世豪
李明友
刘祖国
高国全
机构
中山大学中山眼科中心
中山大学基础医学院生物化学教研室
广州市启源生物科技有限公司
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期17-23,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30370313
No.30570372)
+3 种基金
新世纪优秀人才支持计划(NCET-04-0792)
中华医学基金会资助项目(CMB-SUMS学者项目CMB98-677)
教育部回国人员基金资助项目(2003年)
广东省自然科学基金(No.04009426)~~
文摘
根据K5蛋白(Pro451—Ala541)的结构特征和二硫键分布特点,设计K5的两个缺失突变体K5 mut1(Cys461—Cys540,保留K5 kringle环3个完整二硫键但去除N端和C端多余氨基酸)和K5mut2(Cys482—Cys535,打开kringle环,只保留2个二硫键).以野生型人纤溶酶原K5 cDNA为模板,用PCR方法得到编码缺失突变体的DNA片段,定向克隆入pET22b(+)质粒载体,重组体转化进大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,产物经亲和层析和高浓度甘油透析纯化后进行鉴定和生物活性测定.K5 mut1蛋白特异性抑制人视网膜微血管内皮细胞增殖,且活性强度是完整的K5蛋白2倍;K5mut2对人视网膜微血管内皮细胞无显著抑制作用.结果提示,完整的Kringle结构(包含3个二硫键)是维持人纤溶酶原K5抗血管增生活性的必需结构域,而K5分子中Kringle结构域外的N端和C端氨基酸臂则并非其活性所必需.
关键词
纤溶酶原
KRINGLE
5
血管增生抑制因子
缺失突变体
结构与功能
Keywords
plasminogen
kringle 5
angiogenic inhibitor
deletion mutant
structure and function
分类号
R322.91 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R774.13 [医药卫生—眼科]
暂未订购
题名
用计算机模拟研究人肿瘤坏死因子的结构功能
被引量：
1
3
作者
陈建军
孙苗
陈常庆
王德宝
机构
中国科学院上海生物工程研究中心
中国科学院上海生物化学研究所
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2000年第2期6-12,5,共8页
基金
86 3计划资助项目!( 86 3 10 3 13 0 1 0 4)
文摘
人肿瘤坏死因子(humantumornecrosisfactor,hTNFα)的生物学活性是由两种不同受体(TNFR1/R55和TNFR2/R75)介导的。为了了解hTNFα与这两种受体相互作用的异同之处,以便指导hTNFα的蛋白质工程改造,根据LT与R55受体胞外区复合物的晶体结构及hTNFα和LT与两种受体结合的相似性,预测了hTNFα与其两种受体胞外区形成复合物的三维结构模型。并根据所得的计算机模型,分析了hTNFα和受体结合前后的溶剂可及表面积的变化,以及受体与hTNFα之间可能形成的氢键、明显的静电作用和疏水作用。然后根据模型对hTNFα的结构-功能关系进行了分析,并以此为基础设计了几个新的hTNFα突变体。
关键词
人肿瘤坏死因子
计算机模拟
结构功能关系
Keywords
hTNFα receptor complex, Homology
modeling
,
structure
function
relationship,
mutant
分类号
R73-354 [医药卫生—肿瘤]
暂未订购
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GDNF缺失突变体的设计及其结构与功能关系(英文)
王金惠
冯健男
刘淑红
王嘉玺
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
纤溶酶原K5抗血管增生活性依赖其完整Kringle结构域
李朝阳
蔡卫斌
杨中汉
杨霞
宋志宏
周世豪
李明友
刘祖国
高国全
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
6
暂未订购
3
用计算机模拟研究人肿瘤坏死因子的结构功能
陈建军
孙苗
陈常庆
王德宝
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2000
1
暂未订购
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