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基于GFP观察鼠伤寒沙门氏菌HilD介导ssrAB表达的初探
1
作者 韩敏敏 张丽 +3 位作者 周妮妮 陈传荣 曹堃 李郁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1112-1118,共7页
目的以绿色荧光蛋白(GFP)标记的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.Typhi)为研究对象,秀丽隐杆线虫为模式生物,初步探究体内环境下HilD对ssrAB表达的调控作用。方法通过基因工程技术分别构建携带gfp基因的亲本株S.Typhi(ssrAB-gf... 目的以绿色荧光蛋白(GFP)标记的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.Typhi)为研究对象,秀丽隐杆线虫为模式生物,初步探究体内环境下HilD对ssrAB表达的调控作用。方法通过基因工程技术分别构建携带gfp基因的亲本株S.Typhi(ssrAB-gfp+pcDNA3.1)、hilD基因缺失株S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1)和hilD基因回补株S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)标记菌。利用荧光显微技术,观察3株标记菌在饲喂感染秀丽隐杆线虫体内外的GFP表达状况及其定殖分布,并通过ImegJ软件进行荧光强度的比较。结果成功构建的3株标记菌在秀丽隐杆线虫体内外均呈现绿色荧光,荧光强度为S.Typhi(ssrAB-gfp+pcDNA3.1)高于S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)和S.Typhi(ΔhilD+ssr AB-gfp+pcDNA3.1),S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)高于S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1);3株标记菌在线虫体内主要定殖分布于口咽部和肠道中,荧光强度为口咽部较肠道高。结论GFP在鼠伤寒沙门氏菌中得到稳定表达,感染秀丽隐杆线虫后同样获得GFP的稳定表达,且在线虫的口咽部和肠道具有良好的定殖分布,首次初步证明体内环境下HilD介导ssrAB表达,但并非为单一的调控作用。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门氏菌 HilD ssrab GFP 秀丽隐杆线虫
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肠炎沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因缺失菌株的构建及其生物学特性 被引量：4
2
作者 唐正露 曹堃 +3 位作者 张丽 韩敏敏 罗聪玉 李郁 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1195-1205,共11页
【背景】沙门氏菌(Salmonella)是重要的人畜共患病原菌,由于耐药菌株的不断出现,新型防治方法的研究迫在眉睫。【目的】探究ssrAB、hilA、hilD基因对肠炎沙门氏菌致病作用的影响,筛选安全可靠的沙门氏菌减毒活疫苗或载体用菌株。【方法... 【背景】沙门氏菌(Salmonella)是重要的人畜共患病原菌,由于耐药菌株的不断出现,新型防治方法的研究迫在眉睫。【目的】探究ssrAB、hilA、hilD基因对肠炎沙门氏菌致病作用的影响,筛选安全可靠的沙门氏菌减毒活疫苗或载体用菌株。【方法】采用自杀性质粒介导的同源重组技术,分别构建ssrAB、hilA、hilD单基因缺失株(ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD)、双基因缺失株(ΔssrABhilA、ΔssrABhilD、ΔhilAhilD)和三基因缺失株(ΔssrABhilAhilD),并比较上述缺失菌株与亲本菌株间生物学特性的差异。【结果】基因缺失后菌株的生长速率无显著变化(P>0.05);除ΔhilD生物膜形成能力最强外,其他基因缺失菌株生物膜形成能力变化不显著(P>0.05);ΔssrABhilAhilD和ΔssrABhilA的LD50值最高,ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD次之;亲本菌株引起的小鼠十二指肠的病变程度较所有缺失菌株明显严重;在所有缺失菌株中,ΔssrABhilAhilD对HeLa细胞的黏附力最低,ΔhilD在小鼠体内的定殖率最高;而机体分泌IL-1、IL-18、IFN-γ的能力与沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因无显著相关性(P>0.05)。【结论】构建的7株基因缺失株中,ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD、ΔssrABhilA和ΔssrABhilAhilD有致病力低、生长速率良好、能有效刺激细胞因子产生等特性,具备作为沙门氏菌减毒活疫苗或载体的潜质。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 ssrab hilA hilD 缺失菌株 构建 生物学特性
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