目的对两步磁珠法提取血浆游离DNA的方法进行评价,初步探讨血浆游离DNA定量对于肺癌患者实验诊断的意义。方法在健康志愿者血浆中掺入DNA标准品127 bp,208 bp和Quick-load~@100 bp DNA ladder(由100-1 500 bp DNA片段组成),采用两步磁...目的对两步磁珠法提取血浆游离DNA的方法进行评价,初步探讨血浆游离DNA定量对于肺癌患者实验诊断的意义。方法在健康志愿者血浆中掺入DNA标准品127 bp,208 bp和Quick-load~@100 bp DNA ladder(由100-1 500 bp DNA片段组成),采用两步磁珠法和分离柱提取法提取血浆中掺入的DNA标准品;用Qubit测定DNA浓度,安捷伦2100生物芯片分析仪和琼脂糖凝胶电泳检测分析DNA片段大小分布。用两步磁珠法和分离柱提取法分别提取15例肺癌患者的血浆cfDNA,利用安捷伦2100生物芯片分析仪和琼脂糖凝胶电泳比较两种方法提取的cf-DNA片段大小分布,分析cf-DNA浓度与肺癌分期的相关性。结果两步磁珠法第二步分离的DNA浓度与掺入标准品DNA(127 bp,208 bp)片段浓度呈正相关(r^2=0. 985 7,P <0. 001);两步磁珠法提取的Quick-load~@100 bp DNA ladder第一步分离的DNA片段≥300 bp,第二步分离的DNA片段≤300 bp,分离柱提取法重提取的Quick-load~@DNA ladder≤1 500 bp。两步磁珠法第二步分离的肺癌患者血浆cf-DNA浓度与肺癌分期呈正相关(r^2=0. 866 4,P=0. 004 9)。分离柱提取法提取的cf-DNA浓度与肺癌分期无显著相关性(r^2=0. 500 9,P=0. 214 5)。结论两步磁珠法可分别提取不同大小片段的DNA标准品,同时有效提取肺癌患者血浆中小片段游离DNA,且其浓度与肺癌分期呈正相关。展开更多
