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假单胞菌株M18中pqsA突变株的构建及其对plt的调控 被引量:1
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作者 唐璐璐 魏雪 +2 位作者 李赛男 许煜泉 黄显清 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期2094-2099,共6页
【目的】根际铜绿假单胞菌M18能产生藤黄绿菌素(Plt)和吩嗪-1-羧酸(PCA)两种主要的抗生素。其PqsR/PQS群体感应系统由应答调控蛋白PqsR与信号分子PQS组成。前期研究已经表明pqsR负调控Plt生物合成及基因簇表达。本论文旨在研究PQS分子对... 【目的】根际铜绿假单胞菌M18能产生藤黄绿菌素(Plt)和吩嗪-1-羧酸(PCA)两种主要的抗生素。其PqsR/PQS群体感应系统由应答调控蛋白PqsR与信号分子PQS组成。前期研究已经表明pqsR负调控Plt生物合成及基因簇表达。本论文旨在研究PQS分子对Plt合成及基因表达的调控作用。【方法】从M18基因组中扩增PQS合成基因pqsA,通过同源重组技术构建假单胞菌M18的pqsA突变菌株M18pqsA。利用lacZ报告基因分析、信号分子添加实验等,研究PQS对Plt合成及基因表达的调控作用。【结果】在KMB培养基中,分别比较野生型菌株M18和突变菌株M18pqsA的Plt产量,突变菌株的Plt产量存在较小幅度的升高,约为野生型菌株的1.53倍。添加PQS对plt表达存在一定程度但不是很显著的负调控作用。【结论】PQS分子对Plt生物合成及基因表达存在部分负调控作用。 展开更多
关键词 假单胞菌株M18 pqsA 藤黄绿菌素 PQS
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假单胞菌M18 relA突变株的构建及其对吩嗪-1-羧酸合成的调控 被引量:1
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作者 王金英 张明月 +4 位作者 王国昊 魏雪 李雅乾 黄显清 许煜泉 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期275-280,共6页
假单胞菌M18是一株能同时合成吩嗪-1-羧酸(PCA)和藤黄绿菌素两种抗生素的植物根际分离细菌。RelA催化合成的效应分子ppGpp能介导细菌因营养饥饿引起的应激反应。以M18菌株染色体DNA为模板,PCR扩增获得relA基因,通过庆大霉素抗性片段插... 假单胞菌M18是一株能同时合成吩嗪-1-羧酸(PCA)和藤黄绿菌素两种抗生素的植物根际分离细菌。RelA催化合成的效应分子ppGpp能介导细菌因营养饥饿引起的应激反应。以M18菌株染色体DNA为模板,PCR扩增获得relA基因,通过庆大霉素抗性片段插入失活与同源重组技术,构建假单胞菌M18的relA突变菌株M18RAG。在PPM培养基中进行PCA发酵分析,发现突变菌株M18RAG的PCA产量显著升高,约为野生型菌株的1.5-2倍。relA基因反式互补实验以及phzA′-′lacZ翻译融合测定结果,均进一步证明了RelA对PCA生物合成及其基因表达具有抑制作用。 展开更多
关键词 细菌应激反应 ppGpp合成酶RelA 假单胞菌M18 吩嗪-1-羧酸
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假单胞菌M18菌株的PltR因子特异性正调控藤黄绿菌素合成 被引量:1
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作者 严安 汪晓雷 +1 位作者 张雪洪 许煜泉 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2007年第3期325-332,共8页
经生物信息学分析,在假单胞菌M18(Pseudomonas sp.M18)菌株的藤黄绿菌素(pyolute-orin,Plt)生物合成基因簇上游定位了一个属于LysR家族的调控因子编码基因pltR.运用同源重组技术,构建了pltR失活的突变菌株M18TRG,在King’sB培养基中,与... 经生物信息学分析,在假单胞菌M18(Pseudomonas sp.M18)菌株的藤黄绿菌素(pyolute-orin,Plt)生物合成基因簇上游定位了一个属于LysR家族的调控因子编码基因pltR.运用同源重组技术,构建了pltR失活的突变菌株M18TRG,在King’sB培养基中,与野生型菌株相比,Plt合成能力下降了70%,而吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid,PCA)的合成能力不受影响.反式互补pltR的突变株能回复Plt的合成能力达到野生型水平.在菌株M18中过表达pltR,Plt产量提高13倍,PCA产量没有改变.这些结果表明pltR基因表达产物是Plt生物合成的特异性正调控因子.在野生型菌株M18和不产Plt的突变株M18T中,pltR基因表达量无显著差异,表明pltR基因的表达不受Plt调控.与野生株相比,突变株M18TRG中的转录融合plt-lacZ表达量显著降低,表明PltR对Plt的正调控作用主要发生在转录水平上.对pltR基因在gacA突变株M18G和rsmA突变株M18R中的表达量的进一步研究发现,PltR参与了gacA基因对Plt的合成的正调控,但不参与rsmA基因对Plt合成的负调控. 展开更多
关键词 假单胞菌M18(Pseudomonas sp.m18)藤黄绿菌素 PltR 转录促进
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GacA对假单胞菌株M18两个phz基因簇和菌群传感的调控 被引量:1
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作者 史鸣奇 李雅乾 +3 位作者 王沂 黄娇芳 黄显清 许煜泉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1306-1316,共11页
【目的】假单胞菌株M18(Pseudomonassp.M18)是从甜瓜根际土壤中分离获得的一株对多种植物病原菌具有显著拮抗作用的菌株,在菌群传感(quorumsensing)系统的调控下,能分泌吩嗪-1-羧酸(PCA)以及多种吩嗪(phz)类衍生物的抗真菌物质。全局性... 【目的】假单胞菌株M18(Pseudomonassp.M18)是从甜瓜根际土壤中分离获得的一株对多种植物病原菌具有显著拮抗作用的菌株,在菌群传感(quorumsensing)系统的调控下,能分泌吩嗪-1-羧酸(PCA)以及多种吩嗪(phz)类衍生物的抗真菌物质。全局性因子GacA是M18菌株吩嗪类物质的合成与菌群传感系统的重要调控因子,本文将就GacA对上述两者的调控做进一步研究。【方法】PCR基因扩增和测序研究M18菌株中PCA合成基因簇,运用RT-PCR及构建phzA-lacZ转录融合手段研究M18菌株中两个phz基因簇各自的转录特征以及受全局性因子GacA的调控作用,运用翻译融合手段进一步研究M18菌株中GacA对菌群传感系统的调控作用。【结果】M18菌株的染色体中存在着两个PCA合成基因簇phzA1-G1和phzA2-G2,与铜绿假单胞菌株(P.aeruginosa)PAO1的一致性达99%。但是,M18菌株phzA2-G2基因簇下游的非编码区与PAO1菌株不同,存在着三段单位长度为144 bp的重复序列;在野生菌株M18中,phzA1-G1的转录水平明显高于phzA2-G2,GacA促进phzA1-G1转录,抑制phzA2-G2转录,区别性地调控两个phz基因簇的转录,GacA在整体上抑制phz基因簇的转录,与PAO1菌株中,GacA对phz的调控方式相反;gacA基因突变对菌群传感系统中lux家族基因中的lasI表达量无显著影响,但正调控las系统下游的rhlI表达量,GacA对phz基因簇表达的调控部分通过菌群传感系统实现。【结论】在M18菌株和PAO1菌株中,GacA对吩嗪类产物合成的调控方式相反,对菌群传感系统的调控也存在着差异性,这些差异可能是两个菌株在各自不同生境下长期进化的结果。 展开更多
关键词 吩嗪-1-羧酸 phz合成基因簇 GACA 菌群传感 假单胞菌株M18
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Las-like quorum-sensing system negatively regulates both pyoluteorin and phenazine-1-carboxylic acid production in Pseudomonas sp. M18
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作者 CHEN Yun WANG XiaoLei +2 位作者 HUANG XianQing ZHANG XueHong XU YuQuan 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2008年第2期174-181,共8页
A las-like quorum-sensing system in Pseudomonas sp.M18 was identified,which consisted of lasI and lasR genes encoding LuxI-LuxR type regulator.Several functions of the las system from strain M18 were investigated in t... A las-like quorum-sensing system in Pseudomonas sp.M18 was identified,which consisted of lasI and lasR genes encoding LuxI-LuxR type regulator.Several functions of the las system from strain M18 were investigated in this study.The chromosomal inactivation of either lasI or lasR by recombination increased the production of both pyoluteorin(Plt)and phenazine-1-carboxylic acid(PCA)by 4-5 fold and 2-3 fold over that of the wild type strain of M18,respectively.Production of both antibiotics was restored to wild-type levels after in trans complementation with the wild-type lasI or lasR gene.Expression of the translational fusions pltA'-'lacZ and phzA'-'lacZ further confirmed the negative effect of lasI or lasR on both biosynthetic operons,and it was also demonstrated that the las system was related to the ability of swarming motility and the inhibition of cell growth. 展开更多
关键词 las system phenazine-1-carboxylic acid pyoluteorin swarming Pseudomonas sp.m18
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