TCR Dβ-Jβ sjTRECs检测方法的建立和应用 被引量：12

1

作者 李扬秋 杨力建 +3 位作者 陈少华 韩素芳 张学利 许敏华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期467-470,共4页

目的　建立检测TCRDβ JβsjTRECs的方法 ,并了解不同T细胞受体Dβ Jβ之间T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)在胸腺细胞和外周血T细胞中的形成情况。方法　利用巢式PCR分别扩增 10例正常人外周血单个核细胞和 3例正常胸腺细胞DNA中不同的D... 目的　建立检测TCRDβ JβsjTRECs的方法 ,并了解不同T细胞受体Dβ Jβ之间T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)在胸腺细胞和外周血T细胞中的形成情况。方法　利用巢式PCR分别扩增 10例正常人外周血单个核细胞和 3例正常胸腺细胞DNA中不同的Dβ片段和Jβ重排时形成的sjTRECs的情况 ,PCR产物进一步进行克隆和序列分析以确定结合区的位置。结果　可检测到Dβ1与 5个Jβ1基因片段、Dβ2与 4个Jβ2基因片段分别形成的sjTRECs,其中以Dβ1 Jβ1S1、Dβ1 Jβ1S2和Dβ2 Jβ2S2的sjTRECs最常见 ,PCR产物经克隆和序列分析证实其形成Dβ JβsjTRECs的情况。 结论　成功地建立了检测Dβ Jβ sjTRECs的方法 ,为分析各TCRβ亚家族的sjTRECs含量和确定TCRβna 展开更多

关键词 TCR Dβ-Jβ sjtrecs 检测 T细胞受体 胸腺细胞 T细胞

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实时定量PCR检测正常人外周血T细胞和胸腺细胞中sjTRECs水平 被引量：37

2

作者 李扬秋 杨力建 +5 位作者 陈少华 陈嘉愉 刘薇薇 王震 张玉平 吴秀丽 《现代临床医学生物工程学杂志》 CAS 2001年第6期397-400,共4页

目的　了解正常人外周血T细胞和胸腺细胞中信号结合T细胞受体删除DNA环 (sjTRECs)的含量 ,从而推测正常人中幼稚T细胞的含量和胸腺的输出功能 .方法　利用实时定量PCR和TaqMan方法检测 11例正常人外周血单个核细胞、7例儿童和 3例成人... 目的　了解正常人外周血T细胞和胸腺细胞中信号结合T细胞受体删除DNA环 (sjTRECs)的含量 ,从而推测正常人中幼稚T细胞的含量和胸腺的输出功能 .方法　利用实时定量PCR和TaqMan方法检测 11例正常人外周血单个核细胞、7例儿童和 3例成人胸腺细胞DNA中sjTRECs的水平 .结果　正常人中sjTRECs含量分别为 :8.83±4.81/ 10 0 0个外周血单个核细胞 ;2 7.31± 3.2 3/ 10 0 0个成人胸腺细胞和 170 .2 9± 5 9.5 2 / 10 0 0个儿童胸腺细胞 .结论　sjTRECs水平与年龄有关 ,正常人外周血中每 10 0 0个单个核细胞中约含 4. 展开更多

关键词 sjtrecs 幼稚T细胞 胸腺细胞 实时定量PCR

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一种检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量简易方法的研究 被引量：1

3

作者 张华华 曾耀英 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第2期114-117,共4页

目的　建立一种快速、简单的检测小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞的信号结合T细胞受体删除环(signaljointTCRrearrangementexcisioncircles,sjTRECs)水平的方法,并研究其准确性,以期推测初始T细胞含量从而评价胸腺功能。方法　根据标准质粒荧光... 目的　建立一种快速、简单的检测小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞的信号结合T细胞受体删除环(signaljointTCRrearrangementexcisioncircles,sjTRECs)水平的方法,并研究其准确性,以期推测初始T细胞含量从而评价胸腺功能。方法　根据标准质粒荧光定量PCR的扩增曲线选择合适有效的扩增循环次数;优化PCR条件;梯度稀释的标准质粒(10 3 - 10 8拷贝)PCR扩增后使用图像分析软件包分析琼脂糖凝胶电泳的图像,测量PCR产物带的光密度,经统计获得标准曲线及方程。将样本的PCR产物带的光密度代入标准曲线方程,从而获得样本的sjTRECs水平读数,并和实时定量PCR结果比较。结果　获得适合的PCR条件;成功建立可信度高的标准曲线;与实时定量PCR的检测结果比较,小鼠sjTRECs含量随年龄变化的趋势一致。结论　成功建立研究方法,与实时定量PCR评价sjTRECs水平得到明显相似的结果。 展开更多

关键词 sjtrecs 初始T细胞 胸腺功能 实时定量PCR

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CML中TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs的检测情况

4

作者 李扬秋 陈少华 +2 位作者 杨力建 耿素霞 尹青松 《现代临床医学生物工程学杂志》 CAS 2005年第5期371-373,共3页

目的检测慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况,从而了解相应3种Vβ亚家族naive T细胞的近期胸腺输出情况.方法利用半巢式PCR扩增9例CML患者外周血单个核细胞(PBMC)、CD4+细胞和CD8+细胞DNA... 目的检测慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况,从而了解相应3种Vβ亚家族naive T细胞的近期胸腺输出情况.方法利用半巢式PCR扩增9例CML患者外周血单个核细胞(PBMC)、CD4+细胞和CD8+细胞DNA的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1sjTRECs,13例正常人外周血作为对照.结果TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在部分正常人和1例CML患者CD4+或CD8+细胞可以检测到,而在CML患者PBMC中则未能检测到.结论在CML患者Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs检出率低,与其胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naive T细胞水平低下有关. 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 细胞受体基因 胸腺输出功能 sjtrec TCR Vβ2 Vβ5 Vβ1

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实时定量PCR检测小鼠成熟过程中T淋巴细胞sjTRECs水平 被引量：3

5

作者 张华华 曾耀英 +3 位作者 肇静娴 江逊 何贤辉 林羿 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2005年第15期1370-1373,共4页

目的:实时定量PCR检测正常小鼠成熟过程中胸腺及脾脏T淋巴细胞的信号结合T细胞受体重排删除DNA环(sjTRECs)含量,从而推测T淋巴细胞中的初始T细胞的数目,评价小鼠成熟过程中的胸腺功能.为胸腺发育和功能研究及胸腺研究模型的建立提供研... 目的:实时定量PCR检测正常小鼠成熟过程中胸腺及脾脏T淋巴细胞的信号结合T细胞受体重排删除DNA环(sjTRECs)含量,从而推测T淋巴细胞中的初始T细胞的数目,评价小鼠成熟过程中的胸腺功能.为胸腺发育和功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法.方法:实时定量PCR(SYBRGreen法)检测T淋巴细胞中sjTRECs含量.结果:1～6wk的小鼠胸腺中的初始T细胞含量持续增加,9wk时已经开始下降,12wk时持续下降.而小鼠的外周中初始T细胞的含量则随着周龄增加而增加(1～12wk).结论:在小鼠的成熟过程中,从9wk开始胸腺的生成功能减弱,而胸腺的输出功能持续增加;成功建立和应用实时定量PCR检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量,是准确评价小鼠胸腺功能的方法. 展开更多

关键词 实时定量PCR 信号结合T细胞受体重排删除环 T细胞

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T细胞受体Dβ-Jβ sjTRECs连接区多样性 被引量：1

6

作者 李扬秋 陈少华 +3 位作者 杨力建 周羽竝 耿素霞 韩素芳 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期37-39,共3页

目的　了解T细胞受体Dβ Jβ重排形成的T细胞受体删除DNA环 (sjTRECs)连接区序列特点。 方法　利用巢式PCR分别扩增 10例正常人外周血单个核细胞和 3例正常胸腺细胞DNA中不同的Dβ片段和Jβ重排时形成的TRECs的情况 ,PCR产物进一步进行... 目的　了解T细胞受体Dβ Jβ重排形成的T细胞受体删除DNA环 (sjTRECs)连接区序列特点。 方法　利用巢式PCR分别扩增 10例正常人外周血单个核细胞和 3例正常胸腺细胞DNA中不同的Dβ片段和Jβ重排时形成的TRECs的情况 ,PCR产物进一步进行克隆和序列分析以确定结合区的序列。结果　获得Dβ1与 5个Jβ1基因片段、Dβ2与 4个Jβ2基因片段分别形成的sjTRECs连接区序列 ,部分所形成sjTRECs的Jβ与Dβ之间存在核苷酸的随机插入 (N区 )等多样性。结论　Dβ JβsjTRECs的连接并非简单的头对头拼接方式 。 展开更多

关键词 T细胞受体 T细胞受体删除环 T细胞 连接区多样性

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人外周血sjTREC水平与年龄的相关性调查 被引量：1

7

作者 欧雪玲 伍新尧 +2 位作者 童大跃 时燕薇 孙宏钰 《解剖学研究》 CAS 2010年第3期169-173,共5页

目的探讨人外周血中sjTREC水平及其与年龄的相关性。方法收集225例不同年龄健康人外周血样品,抽提基因组DNA,利用实时定量PCR技术,定量测定不同年龄组外周血中sjTREC含量的分布情况。sjTREC含量与年龄的关系作相关分析;各年龄组性别差异... 目的探讨人外周血中sjTREC水平及其与年龄的相关性。方法收集225例不同年龄健康人外周血样品,抽提基因组DNA,利用实时定量PCR技术,定量测定不同年龄组外周血中sjTREC含量的分布情况。sjTREC含量与年龄的关系作相关分析;各年龄组性别差异作t检验。结果 225例外周血sjTREC含量随年龄增长逐渐减少;对0～14岁、15～54岁及55岁以上3组进行方差分析(LSD检验),差异显示有统计学意义(P<0.001);性别差异不显著;供体年龄与外周血sjTREC水平呈显著负相关,r=-0.823(P<0.001)。结论人外周血中sjTREC含量与年龄存在明显相关性,对于法医物证实践中血痕的年龄推测具有一定指导意义。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR 信号结合T细胞受体删除DNA环 年龄

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脓毒症患儿T细胞亚群和sjTREC基因水平的评估 被引量：6

8

作者 曹清 安康 +1 位作者 张建 李璧如 《中国小儿急救医学》 CAS 2011年第4期312-315,共4页

目的本研究旨在评价脓毒症患儿T细胞亚群和sjTREC基因水平，为其合理的免疫调节治疗提供理论依据。方法根据感染严重程度将患儿分为脓毒症组（25例）、严重脓毒症组（23例）和正常对照组（50例）。在使用血制品、免疫制剂及营养支持前... 目的本研究旨在评价脓毒症患儿T细胞亚群和sjTREC基因水平，为其合理的免疫调节治疗提供理论依据。方法根据感染严重程度将患儿分为脓毒症组（25例）、严重脓毒症组（23例）和正常对照组（50例）。在使用血制品、免疫制剂及营养支持前测定各组患儿T细胞亚群。通过实时荧光定量PCR法分别检测各组患儿sjTREC基因水平变化，利用双标准曲线法对sjTREC基因水平进行绝对定量，检测结果用sjTREC与Ca内参基因拷贝数比值（sjTREC／Ca×2×1ooo）表示，结果应用SPSS16．0软件进行统计学处理。结果严重脓毒症组患儿CD3＋、CD4＋和CD8＋细胞比例明显低于正常对照组（P〈0．01）；严重脓毒症组患儿sjTREC基因水平为173．86±38．37，明显低于脓毒症组（345．15±66．21）和正常对照组（389．42±50．20），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论严重脓毒症患儿存在T细胞亚群数量紊乱和胸腺输出功能下降，故在早期进行细胞免疫支持可能会改善临床预后。 展开更多

关键词 脓毒症 T细胞亚群 胸腺输出功能 sjtrec基因

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苯中毒患者胸腺近期输出功能和T细胞亚群变化 被引量：7

9

作者 韩素芳 李扬秋 +4 位作者 周羽竝 杨力建 陈少华 刘薇薇 陈嘉榆 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2003年第6期2-4,共3页

目的　分析职业性慢性轻度苯中毒工人外周血单个核细胞中信号结合T细胞受体删除DNA环 (sjTRECs)的含量和CD4+/CD8+比值 ,从而了解其初始 (naive)T细胞含量和胸腺近期输功能 ,以及外周T细胞亚群分布情况。方法　利用间接免疫荧光法检测 1... 目的　分析职业性慢性轻度苯中毒工人外周血单个核细胞中信号结合T细胞受体删除DNA环 (sjTRECs)的含量和CD4+/CD8+比值 ,从而了解其初始 (naive)T细胞含量和胸腺近期输功能 ,以及外周T细胞亚群分布情况。方法　利用间接免疫荧光法检测 11例健康人和 5例轻度苯中毒患者外周血单个核细胞中CD4+/CD8+比值 ;采用实时荧光定量聚合酶链反应 (real timePCR)和TaqMan方法检测两组外周血单个核细胞中sjTRECs的含量。结果　每 10 0 0个外周血单个核细胞中sjTRECs含量在正常人中为 9 10± 4 5 5 ,轻度苯中毒为 2 80± 3 79,P <0 0 5 ;轻度苯中毒者CD4+/CD8+的比值 (0 92± 0 3 5 )明显低于正常人 (1 49± 0 2 1) ,P <0 0 1。结论　轻度苯中毒患者胸腺近期输出功能低下 。 展开更多

关键词 苯 胸腺功能 实时定量PCR T淋巴细胞亚群 信号结合T细胞受体删除DNA环

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B-ALL患者胸腺输出TCR Vβ亚家族nave T细胞分析 被引量：1

10

作者 李闯 李扬秋 +3 位作者 尹青松 陈少华 杨力建 胡刚 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期788-790,共3页

目的了解B细胞-急性淋巴细胞白血病（B-ALL）患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族23种信号T细胞受体删除DNA环（sjTRECs）的存在情况，从而了解胸腺近期输出各TCR Vβ亚家族naive T细胞的功能。方法利用半巢式PCR分别扩增10例B-ALL患者外周血... 目的了解B细胞-急性淋巴细胞白血病（B-ALL）患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族23种信号T细胞受体删除DNA环（sjTRECs）的存在情况，从而了解胸腺近期输出各TCR Vβ亚家族naive T细胞的功能。方法利用半巢式PCR分别扩增10例B-ALL患者外周血单个核细胞DNA中的23种Vβ～Dβ1 sjTRECs，10例正常人作为对照。结果TCR Vβ亚家族sjTRECs在大部分正常人和部分B-ALL患者中均可检测到，与正常人比较，B-ALL病人的Vβ24～Dβ1 sjTRECs出现频率比正常人高，且有统计学意义（80％：30％，P=0．0285），另有18个家族的Vβ～Dβ1 sjTRECs比正常人低，其中在Vβ1（30％，P=0．0285）、Vβ12（20％，P＝0．0285）、Vβ13（40％，P=0．0043）、Vβ15（20％，P=0．0022）和Vβ18（20％，P=0．0089）5个亚家族sjTRECs出现频率的差异有统计学意义。结论B-ALL病人胸腺输出大多数Vβ亚家族naive T细胞功能低于正常人。 展开更多

关键词 急性淋巴细胞白血病 T细胞受体删除DNA环 胸腺近期输出功能

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荧光定量PCR检测T细胞受体删除环在亲缘与非亲缘异基因造血干细胞移植后免疫重建早期的应用 被引量：2

11

作者 王坤 金静君 +4 位作者 杨婷 韩俊永 陈金烟 薛士杰 刘慎敏 《福建医药杂志》 CAS 2017年第5期139-143,共5页

目的检测接受亲缘与非亲缘的异基因造血干细胞移植(allogeneic hemopoietic stem cell transplant,alloHSCT)的恶性血液病患者免疫重建早期T细胞受体删除环(signal joint T-cell receptor excision circle,sjTREC)的水平,分析供受者间... 目的检测接受亲缘与非亲缘的异基因造血干细胞移植(allogeneic hemopoietic stem cell transplant,alloHSCT)的恶性血液病患者免疫重建早期T细胞受体删除环(signal joint T-cell receptor excision circle,sjTREC)的水平,分析供受者间亲缘关系对免疫重建早期的影响。方法采用TaqMan探针,Real-Time PCR技术,对6例(2例亲缘,4例非亲缘)allo-HSCT恶性血液病患者在移植前及移植后6个月的外周血sjTREC进行绝对定量检测。结果每1 000个细胞中各组sjTREC水平分别为:亲缘组移植前(17.05±22.28)拷贝,移植后(24.26±25.50)拷贝;非亲缘组移植前(6.74±12.85)拷贝,移植后(28.30±19.12)拷贝。结论两组患者移植后的sjTREC水平较移植前均有所上升,但无论移植前后两组之间的差异均不明显,提示在allo-HSCT患者移植后的免疫重建受诸多因素共同影响,供者是否具有亲缘关系在小样本检测中未发现明显差异。 展开更多

关键词 T细胞受体删除环 异基因造血干细胞移植 亲缘

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异基因造血干细胞移植后患者胸腺输出功能研究

12

作者 赵林俊 孙丽华 +4 位作者 龙霞 许蕾 姚志娟 王钧 孟庆祥 《白血病．淋巴瘤》 CAS 2013年第3期161-164,共4页

目的 采用改良的信号连接T细胞受体重排删除环（sjTREC）定量方法检测异基因造血干细胞移植患者胸腺输出功能并分析其影响因素。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术检测26例异基因造血干细胞移植患者各时期（移植前及移植后1... 目的 采用改良的信号连接T细胞受体重排删除环（sjTREC）定量方法检测异基因造血干细胞移植患者胸腺输出功能并分析其影响因素。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术检测26例异基因造血干细胞移植患者各时期（移植前及移植后14 d、28 d、3个月、6个月、9个月、1年、1.5年、2年、2.5年、2.5年以上）外周血sjTREC水平，分析胸腺输出功能及影响因素。以24名健康体检者sjTREC作为对照。结果 健康体检者外周血Log（sjTREC copies／ml）为3.74±0.26，与年龄呈负相关（r＝-0.65，P＜0.01），与性别无明显相关性；患者移植前外周血Log（sjTREC copies／ml）为3.09±0.52，移植后14 d、28 d、6个月、1年外周血Log（sjTREC copies／ml）分别为1.18±0.22、2.16±0.31、1.31±0.20、1.83±0.31，1年后恢复到移植前水平，1.5年时为2.15±0.35，与健康对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；移植后sjTREC的恢复与年龄无明显相关性；合并有急性移植物抗宿主病（aGVHD）患者，移植1年内外周血sjTREC含量较低，1.5年后与无aGVHD者无明显区别。结论 改良的sjTREC定量方法，适用于研究异基因造血干细胞移植后胸腺输出功能；异基因造血干细胞移植后胸腺功能恢复缓慢，aGVHD影响移植后早期胸腺功能的恢复。 展开更多

关键词 造血干细胞移植 sjtrec 胸腺输出 聚合酶链反应

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